人伴侣蛋白CCT的 β亚基全长cDNA克隆、表达及染色体定位的研究

伴侣蛋白能促进其他底物蛋白形成正确折叠结构,而本身并不成为底物蛋白的组分。在真核细胞质中的伴侣蛋白ＣＣＴ主要是参与协助细胞骨架蛋白的构成,为细胞生长所必需。通常哺乳动物的ＣＣＴ是由７￣９种不同亚基所组成的蛋白复合体,从人的睾丸组织ｃＤＮＡ文库中分离出一条新的全长ｃＤＮＡ,在其１９３５ｂｐ序列中含有一个长１６０５ｂｐ的可读框,它编码了５３５个氨基酸。基于从该ｃＤＮＡ推导的蛋白质与啤酒酵母、裂殖酵母、     

水稻愈伤组织根分化过程相关基因的初步筛选

水稻愈伤组织在N6培养基上可以保持稳定的增殖而不分化,而培养在含有ABA的N6培养基上的愈伤组织就可以被诱导分化,进而形成根.根据这种生理学特征,分别提取了生长在两种不同培养基上的愈伤组织的RNA,与水稻cDNA芯片杂交.通过分析两种愈伤组织基因表达的差异,共找到271个与水稻愈伤组织根分化过程相关的cDNA克隆,其中107个基因表达被诱导,164个基因表达被抑制.这些初步结果为进一步研究愈伤组织分化生根的分子机理提供了研究线索.     

蝎α—毒素的分子进化：加速突变与功能趋异

蝎α－毒素为一类空间结构高度相似而药理学功能趋异的蛋白质家族。cDNA序列分析表明蝎α－毒素5′非翻译区和信号肽编码区序列的保守性显著高于成熟毒素编码区，3′非翻译区在药理学组内高度保守。而且，成熟毒素编码区密码子第1，2和3位核苷酸突变率相似。非翻译区内每个位点的核苷酸替代数（K）小于成熟毒素编码区内每个同义位点的核苷酸替代数（Ks)，而且成熟毒素编码区内每个非同义位的核苷酸替代数（Ka)接近或大于Ks值。上述数据表明，蝎α－毒素成熟肽编码区内的突变为加速进化方式。这一结论进化树结果的支持。此外，研究还表明稳定3D结构的15个保守性残基靠近分子内部，这可能作为蝎α－毒素结构性限制因素在进化过程中维持CSαβ结构的恒定；4个热点突变区分布于分子表面的潜在功能区，表明正性Darwin选择驱动了蝎α－毒素的加速进化。研究结果合理地解释了蝎α－毒素保守性3D结构与趋异的药理学功能之间的关系。     

克隆与序列分析中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）HSP70基因全长ORF的RACE

采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆中华绒螯蟹(Edocheirsinensis)的Hsp70基因并进行序列分析.以中华绒螯蟹卵组织cDNA为模板,克隆测序后拼接得到一条长2 429 bp的cDNA序列,序列分析表明其覆盖了完整编码区,编码649个氨基酸.经antheprot分析发现2个Hsp70基因的签名序列:IFDLGGGTFDVSIL,IVLVGGSTRIPKIQK;Dnak特征基序DLGTF-S-V;非细胞器基序:RARFEEL;核定位信号标签:KKDPSESKRALRRL;胞质Hsp70特征基序GPTIEEVD.经BLASTn和BLASTx软件分析,该编码区核苷酸序列与凡纳滨对虾(Litopenaeus uannamei)、斑节对虾(Penaeus monodon)的相似性分别为85.30%和84.89%.根据核苷酸序列所推导出的Hsp70氨基酸序列,其与斑节对虾、罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)的相似性分别为93.23%和93.40%.本研究克隆了中华绒螯蟹的Hsp70基因,为进一步深入研究锯缘青蟹的抗逆机理及其遗传改良奠定了基础.     

11种鲇形目鱼的血液检测与比较分析

测定了大口鲇、鲇、杂交鲇、革胡子鲇、黄颡鱼、长吻鱼危、条纹拟鱼尝、青石爬鱼兆、斑点叉尾鱼回、白缘鱼央、黑尾鱼央、拟缘鱼央等11种鲇形目鱼12个样品的血细胞数量、血红蛋白浓度以及血清铁浓度,比较了它们的血清转铁蛋白分区和带谱以及红细胞形态差异,初步确定了鱼类的血液可作为渔业生产上鱼类疾病或生产性状的检测指标,并对鲇形目鱼类耐低氧和底栖的生活特性进行了分析.     

人粒细胞集落刺激因子cDNA的克隆与表达

用脂多糖诱导正常人单核细胞使产生粒细胞集落刺激因子。从诱导细胞中提取出总ＲＮＡ，以特上物经逆转录ＰＣＲ扩增出粒细胞集落刺激因子ｍＲＮＡ和ｃＤＮＡ，将其插入经改造的分泌型表达载体ｐＩＮ－ｏｍｐ Ａ，并转化受体菌Ｅ．ｃｏｌｉ。克隆的ｃＤＮＡ通过限制性酶双酶切的３＇端、５＇端及中间序列探针分子杂交鉴定，结果与预期一致。表达质粒在大肠杆菌哟ＩＰＲＴＧ诱导，粒细胞集落刺激因子被分泌到细菌的周质中。产物提取后     

昆明鼠乙酰胆碱酯酶基因克隆与表达

乙酰胆碱酯酶（ACHE）作为有机磷和氨基甲酸酯类农药的最适反应底物,在农药残留的快速检测中得到广泛应用,本实验根据家鼠AChE全基因序列设计并合成一对特异性引物,对昆明鼠脑组织AchE进行RT-PCR扩增,扩增产物经T-载体克隆、酶切鉴定和测序分析,结果表明：昆明鼠AChE编码序列长1845bp．经BLAST比对发现该序列与已报道序列（No．BC046327）的同源性为99．78％．构建原核重组表达质粒pET-AChE,并在E．coli中得到高效表达,表达蛋白的分子量约为68000．运用改进的Ellman法成功检测到重组表达蛋白的活性．     

豌豆cop1 cDNA的克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达

以拟南芥cop1 cDNA为探针,从豌豆(Pisum sativum) cDNA文库中克隆到了豌豆cop1 cDNA。序列分析表明,它全长为2863bp,其中包括604bp 5′非编码区、243bp 3′非编码区和2016bp编码区,编码672个氨基酸。在大肠杆菌中实现了豌豆cop1基因的高效表达。对拟南芥、豌豆和番茄3种植物cop1的序列同源性比较表明,cop1可能是一种进化上很保守的蛋白质。     

兔生长激素cDNA克隆和表达

从兔脑下垂体中的mRNA中,利用合成引物逆转录PCR,获得了前体和成熟生长激素的cDNA,成熟生长激素的cDNA克隆在pET-3a表达载体并转化到大肠杆菌BL21(DE3 plys)中,获得了高效表达,表达量达到大肠杆菌总蛋白的40%。