春化相关基因ver203FcDNA3′末端的克隆及序列分析

以差异筛选技术克隆到的春化相关基因cDNAverc2 0 3为基础 ,设计 5′端引物 ,利用RACE克隆策略 ,通过RT PCR扩增得到cDNA的 3′未端序列ver2 0 3F(1197bp) .Northernblot分析表明其全长约为 2 .0kb ,且其表达具有春化处理的特异性 .检索表明该基因序列(AB0 12 10 3)与一大麦茉莉酸诱导基因有部分同源性 .推测该基因在调控开花过程中可能参与茉莉酸介导的信号传导途径 .     

人HCUTA全长cDNA的克隆与原核表达

人ＨＣＵＴＡ是最近克隆的一个新的全长cＤＮＡ,编码蛋白可能参与人铜离子容受系统。 ＪＣＩＴＡ的全区用〗ＣＲ拉示后。克隆到ｐＥＴ２８ａ＋表达载体中,在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得了高效表达,表达的ＨＣＵＴＡ重组蛋白细菌总蛋白的２８．３％。ＨＣＵＴＡｃＤＮＡ的ＧｅｎＢａｎｋ接收号为ＡＦ１０６９４３。     

人脑胶质细胞瘤分化相关基因GDR1全长cDNA的克隆和鉴定

人脑胶质细胞瘤是严重危害人类健康的一类恶性肿瘤,选用在ＤＤＲＴ－ＰＣＲ研究中获得的１９个代表新基因的ＥＳＴ之一设计筛库引物,在人ＣＤＮＡＹ语文加中筛出一长度为１５３５ｂｐ的ＣＤＮＡ克隆,其开放读码框码３３４个氨基酸,与已知蛋白无明显同源性属一新发现的ＧｅｎＢａｎｋ接受号为ＡＦ０６８１９５．ＲＴ－ＰＣＲ显示该 物在分化后的ＢＴ－３２５中的表达量明显高于分化前的细胞,暗示该蛋白可能与脑     

农杆菌介导的二氢黄酮醇3''5''羟化酶cDNA对非洲菊的转化及对其花色的影响

通过非洲菊(Gerbera hybrida)组织培养建立起适合于农杆菌介导的基因转化受体系统，非洲菊叶柄外植体在MS 3mg／L BA 0．01mg／L NAA培养基中直接诱导芽生长，在MS 0．1mg／L NAA培养基中生根培养，获得再生植株，诱导率达57％。带有云南矮牵牛(Petunia hybrida)二氢黄酮醇3’5’羟化酶cDNA的pEH表达载体与农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）LBA4404融合后，与非洲菊叶柄外植体共培养3d，通过含有卡那霉素25mg/L和羧苄菁霉素500mg/L的选择培养，诱导出转基因非洲菊。经PCR和Southern分子杂交检测，证明目的基因已整合入非洲菊的基因组中，转基因非洲菊花色、花型及叶型都有显变化。     

生物信息学技术克隆并分析新基因STRF7

为进一步研究信号转导相关的新基因片段BE644250,采用生物信息学方法克隆基全长cDNA,并分析了其ORF,电子表达谱,染色体定位等,之后对全长序列进行了实验验证。电子延伸（contig)获得了729bp的延伸产物,含一个典型的74aa的ORF,命名为STRF7。与已知蛋白无明显同源性,部分地相似于人的源框蛋白CDX－4和酵母的转录调节子ADR6,属一新发现的基因;RT－PCR从IL－6刺激后的U937中克隆了STRF7基因,基序列与电子延伸结果安全一致,进一步的分析显示STRF7在多种组织中表达并定位于第6号染色体上,上述结果显示,STRF7是一个新基因,编码含74aa的蛋白,并且是一个潜在的转录因子。     

人基质细胞中新基因的获得及目的基因的克隆

取连续培养的骨髓基质细胞并提取其mRNA,合成cDNA后,收集＞400bp的片段,连接到真核表达载体pcDNA3.0上,构建人胎儿骨髓基质细胞真核cDNA质粒文库,并以PCR的方法从文库中扩增出编码人IL－6、SCF的基因序列,随机对文库克隆进行测序,得到了3个新基因EST,其中2个在GenBank的登录号分别为AF244998及AF244999。     

23种新的水稻boxC/D snoRNA的鉴定及功能分析

构建了一个水稻核内小分子RNA的cDNA文库, 经初步筛选获得30种boxC/D snoRNA. 与目前已鉴定的水稻snoRNA序列相比较, 除了U14等7种snoRNA 之外, 其余23种均为首次在水稻中发现. 在23种新的水稻boxC/D snoRNA中, 11种只存在于水稻中, 其余12种中, 6种为植物特有, 6种在酵母、动物和拟南芥中存在同源分子. 17种snoRNA指导了水稻5.8S, 18S和25S rRNA中24个2′-O-核糖甲基化修饰核苷, 其中19个靶位点的修饰已被证实. 6种新的水稻snoRNA不具有与rRNA互补的反义序列, 是一类新的snoRNA. 研究结果表明, 通过构建核内小分子RNA的cDNA文库可以有效地分离和鉴定水稻中新的snoRNA. 这些新发现的snoRNA对于阐明植物snoRNA基因组织和表达以及rRNA中2′-O-核糖甲基化修饰位点的产生机制具有重要意义.     

植酸酶基因表达与调控机制研究（Ⅱ）：番茄幼苗 …

采用异氰酸胍法从发芽３－４ｄ的番茄幼苗中提取出总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素亲和层析分离纯化ｍＲＮＡ。以ｍＲＮＡ为模板,Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）为引物用逆转录法合成双链ｃＤＮＡ。     

蕨晚期配子体发育相关cDNA的克隆和初步研究

利用差异显示PCR技术比较蕨早、晚期配子体(颈卵器期)在mRNA水平上基因表达的差异. 经Reverse-Northern杂交证实获得了6个和颈卵器发育相关的cDNA,对其克隆并测序. 用BLAST和DNAStar分析了各片段间的序列同源性,发现这些序列与水稻、拟南芥、大肠杆菌和人的一些序列具有同源性.