大豆转录因子GmWRKY57B的基因克隆及功能分析

WRKY类转录调控因子在高等植物中构成一个基因超家族, 它不但广泛参与了植物对非生物胁迫和生物胁迫的反应, 还参与了生长发育及多种代谢途径的调控. 本研究构建了一个大豆cDNA文库, 采用酵母单杂交的方法, 用来自AtNPR1启动子区的W-box对构建的大豆cDNA文库进行筛选, 获得了GmWRKY57B基因, 该基因全长1033 bp, 编码299个氨基酸, 属于WRKY类转录因子的第Ⅲ组; 酵母挽救实验及凝胶阻滞实验均表明, GmWRKY57B能够与W-box特异性结合; 酵母体内的转录激活实验表明, GmWRKY57B在酵母细胞中具有转录激活功能; GmWRKY57B在大豆根、茎、叶中均有表达; GmWRKY57B基因在烟草中的过表达能够提高转基因烟草植株的抗旱性, 表明GmWRKY57B 基因在非生物逆境中有一定的功能.     

小鼠视神经再生研究动物模型的建立

目的总结制作小鼠视神经完全截断性动物模型作为视神经再生研究的经验和体会。方法将雄性Bcl-2高表达转基因小鼠(Bcl-2 transgenic mice)和受GFAP启动子控制表达疱疹病毒-胸苷激酶转基因雌性小鼠(GFAP-TK)交配产生的4只8~12周成年小鼠(20~30g),Bcl-2/GFAP-TK双转基因小鼠作为实验组,同周龄4只Bcl-2转基因小鼠作为对照组。其中Bcl-2/GFAP-TK双转基因小鼠皮下植入缓释泵,连续7d释放更昔洛韦(GCV)100mg.kg-1.d-1以选择性地去除视神经损伤后激活的星形胶质细胞。更昔洛韦缓释泵植入术后2d在两组动物中制作右侧单眼标准完全性视神经钳夹损伤模型,视神经钳夹10d后获取组织标本。采用免疫荧光染色特异性检测再生轴突纤维并进行定量分析;结合罗丹明的霍乱毒素B亚单位(CTB-R)或增强表达绿色荧光蛋白的复制缺陷型腺相关病毒(AAV-EGFP)用作顺行性标记物以显示再生轴突是否到达大脑靶器官。结果在Bcl-2/GFAP-TK双转基因小鼠中存在免疫荧光阳性的再生视神经轴突,再生轴突计数为71.99±24.04,并可见生长锥(growth cone)样结构,但是再生轴突纤维未能延伸达到大脑靶器官。在对照组Bcl-2转基因小鼠中未见明显再生迹象。结论小鼠视神经完全截断性动物模型可用于视神经病变的再生研究。     

离子束生物工程的现状与展望

20世纪80年代发展起来的离子束生物工程技术以低能离子与生物体之间存在着复杂的相互作用为基础,有目的的对物体细胞的遗传物质进行加工、转移和重组,开拓了农作物遗传改良的新途径。对离子束生物工程的技术原理、研究现状和发展趋势进行了综合评述。     

植物转基因沉默的原因及对策

转基因植物中转基因沉默已成为植物基因工程的一大障碍,转基因沉默的原因是多方面的,可能是由于转录前外源基因和内源基因的结构特性、伴置效应以及宿主植物的遗传调控;也可能是因为转录时启动子、转录因子和终止子的作用;还可能是由于转录后的修饰作用、外源基因表达特异性和环境等因素。为了克服转基因植物中转基因沉默,可以采取下列对策：选择适宜的外源基因和调控元件、采用适当的转化方法、使用更加简便快捷的筛选策略等。     

转基因作物再次丰收质疑声依然存在

2007年1月,一个赞成转基因生物技术的组织——国际农业生物技术应用服务局（ISAAA）发布2006年度报告称,全球转基因作物的种植面积首次突破了1亿公顷大关。但批评者抱怨说,除了使玉米、大豆和棉花对除草剂和害虫更有抵抗力外,生物技术没有带来任何其他好处。     

农杆菌介导人肝再生增强因子转化河套蜜瓜的研究

利用三亲融合法将含有人肝再生增强因子(hum an augm en ter of liver regeneration,hALR)的果实特异性表达载体pPZP-CAN导入农杆菌LBA 4404,转化河套蜜瓜子叶外植体,经诱导与筛选获得了抗性再生植株,PCR扩增、PCR-Sou thern和斑点杂交检测证明hALR已整合入河套蜜瓜再生植株基因组中.     

一种基于手动芯片点样仪的快捷高效的转基因植物PCR-dot-blot鉴定法

本论文报道一种快捷高效的PCR—dot—blot新方法．该方法利用手动芯片点样仪将微量PCR产物（约100pgDNA）点样,并采用North2 South Biotin Random Prime DNA Labeling and Detection Kit（PIERCE）完成快速斑点杂交．通过鉴定转基因烟草证明这种方法是可行而有效的．这种新方法节省材料,效率极高,特别适合大批量鉴定转基因植物．     

独活寄生汤调节淋巴系统防治类风湿关节炎

目的 探讨独活寄生汤(DHJST)对类风湿关节炎模型小鼠淋巴系统及免疫反应的影响。方法 采用随机数字表法将10只3月龄TNF-α转基因(TNF-Tg)小鼠随机分为模型组(TNF-Tg)和DHJST组(5只/组);5只野生型同窝小鼠作为正常对照。DHJST组采用独活寄生汤灌胃,模型组和正常对照组(Control)采用相同体积的生理盐水灌胃,1次/d,连续给药12周后取材。采用阿尔新蓝-苏木精(ABOG)染色观察骨量及滑膜炎症情况;免疫荧光染色,观察促炎M1型巨噬细胞、淋巴管新生以及分布情况。结果与模型组比较,DHJST组小鼠软骨侵蚀、骨侵蚀以及滑膜炎症情况明显改善(P<0.05),促炎M1型巨噬细胞数量减少(P<0.01),毛细淋巴管生成增加(P<0.01),集合淋巴管分布广(P<0.01)。结论 DHJST可通过调控淋巴系统,改善小鼠关节炎症情况,进而减缓类风湿关节炎进展。     

脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1转基因小鼠制备

目的制备脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1(Insulin-Like Growth Factors 1,IGF-1)转基因小鼠。方法采用精子为载体法进行基因转导,出生后小鼠PCR检测,建立转基因小鼠系,用Western blot和免疫荧光法分别检测转基因小鼠海马齿状回亚粒状区(subgranular zone,SGZ)IGF-1表达量和报告基因EGFP阳性细胞数。结果获得3只阳性小鼠,2只外源基因能稳定遗传,并建立了转基因小鼠系,转基因鼠SGZ区域IGF-1表达量显著高于正常鼠,EGFP也在此区域表达。结论成功制备IGF-1转基因小鼠。     

水稻OsWNK基因超量表达载体的构建及转化

选取一个受褐飞虱(Nilaparvata lugensStal)诱导的蛋白激酶基因O sWNK,将该基因的全长cDNA片断通过酶切、连接、转化,连接到pCAMB IA1301质粒表达载体上,成功构建了O sWNK基因的超量表达载体pCAM-B IA1301∶OsWNK.将pCAMB IA1301∶OsWNK电击转入农杆菌细胞中,并将转化好的农杆菌与H1493的愈伤组织共同培养,通过抗生素筛选、PCR鉴定,证明已经获得了转基因植株.