锯缘青蟹对病原菌感染的急性反应功能蛋白质组

为研究锯缘青蟹对常见重要病原菌的急性反应蛋白质组．将锯缘青蟹随机分为四组．分别注射生理盐水、副溶血弧菌、鳗弧菌和嗜水气单胞菌．继而提取肌肉蛋白进行双向电泳．通过比较各组肌肉蛋白的双向电泳图谱获得三个差异表达的蛋白．对这三个差异蛋白进行肽质量指纹图谱及其生物信息分析．鉴定为Calexeitin、无翅蛋白片断、速激肽相关肽．这些结果对研究锯缘青蟹的抗病蛋白及其机理具有重要意义．     

胱抑素C和组织蛋白酶B轴对β淀粉样肽聚集和降解的影响

淀粉样蛋白沉积疾病是由错误折叠的蛋白在细胞内外聚集而引起的一类蛋白质构象类疾病.淀粉样肽β(Amyloid β,Aβ)被认为是引起阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)的致病蛋白,Aβ是由淀粉样前体蛋白(Amyloid precursor protein, APP)经一系列分泌酶切割而产生的,由于切割方式不同产生多种不同的肽段类型.人胱抑素C(Human cystatin C,HCC)是一种普遍存在于人体体液和组织液中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂.HCC可与可溶性的Aβ结合,它与Aβ的原纤维共定位于AD病人的脑部病灶组织,表明它具有一定的神经保护作用.组织蛋白酶B(Cathepsin B,Cat B)是一种半胱氨酸蛋白酶,主要存在于脑内胶质细胞的溶酶体中.Aβ含量的增加可以刺激胶质细胞释放Cat B,对Aβ浓度进行调节,但Cat B在中枢神经系统中的Aβ前体蛋白处理和Aβ42代谢中发挥的作用仍有待确定.本文阐述了HCC-Cat B轴可能在AD进程的不同阶段发挥了不同的作用的观点,以期为AD的预防和治疗提供有价值的信息.     

稻瘟病菌坏死和乙烯诱导肽1样蛋白的原核表达、纯化与活性分析

坏死和乙烯诱导肽1(necrosis and ethylene-inducing peptide 1, Nep1)样蛋白(Nep1-like proteins, NLPs)是一类广泛存在于细菌、真菌及卵菌中的分泌型蛋白.本研究通过生物信息学分析了稻瘟病菌中的4个坏死和乙烯诱导肽1样蛋白的家族基因成员的相关信息,克隆了它们的编码区序列,分别将它们构建到了pGEX-6P-1载体中.通过优化诱导条件对它们进行了原核表达、纯化,获得了相应的可溶性目的蛋白,进一步将纯化的目的蛋白注射到烟草叶片中,发现N端融合GST标签的MoNLP1、MoNLP4蛋白仍具有生物学活性,可以明显诱发烟草叶片组织产生细胞坏死.该研究为进一步深入研究该基因家族在稻瘟病菌中的功能与作用以及开发更多潜在的植物蛋白激发子奠定基础.     

内质网应激通过不依赖脂质从头合成的通路诱导非酒精性脂肪肝病

内质网应激对代谢状态失衡具有重要影响。近年来研究人员发现内质网应激可以诱导小鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发生发展。但是内质网应激引发肝脏脂肪堆积的机制尚不完全清楚。二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT1)是催化甘油三酯合成的关键酶之一,对肝脏脂质合成具有重要意义。在此前的研究中,尚未有人报道过DGAT1在内质网应激诱导NAFLD中的作用。在本研究中,我们通过给小鼠腹腔注射衣霉素,成功诱导了小鼠肝脏内质网应激,发现衣霉素处理的小鼠肝脏有更高的甘油三脂含量并出现较为明显的脂滴堆积。然而,转录水平的检测结果显示该应激并没有上调脂质从头合成关键基因在肝脏中的表达,反而是下调了这些基因的表达。进一步分析发现内质网应激导致小鼠肝脏游离脂肪酸含量显著升高,同时引起肝脏DGAT1表达上调,但并不影响DGAT2的表达。综上,我们的结果表明衣霉素诱导的内质网应激并非通过引发肝脏脂质的从头合成导致肝脏脂肪堆积,而是通过上调肝脏脂肪酸含量以及提高DGAT1的表达,从而促进甘油三酯的合成,导致肝脏脂滴堆积。     

纳米碳酸钾脱除Fmoc保护基的新方法

Fmoc是一种常用的氨基保护基,传统的脱除方法是通过加入二级胺与之作用来实现。针对方法中存在的成本较高、使用的过量二级胺不易回收以及污染环境等缺点,建立了利用新型无机碱纳米碳酸钾非均相脱除Fmoc保护基的新方法。采用湿法研磨方法,将普通碳酸钾制成粒径为64 nm的纳米碳酸钾,以Fmoc保护的L-苯丙氨酸的脱保护反应为Model反应,确定了最佳反应条件：反应溶剂为无水乙醇,Fmoc-L-Phe-OBn与纳米碳酸钾物质的量比为1︰2,反应温度为25 ℃,高产率得到了相应的游离氨基化合物,进一步研究了新方法的适用范围,对7个Fmoc保护的氨基酸和二肽的底物进行了测试。结果表明,产率均在98%以上,且纳米碳酸钾能够回收再利用,在5次之内的活性几乎没有变化。新方法具有操作简单、成本低、污染小、碳酸钾可回收利用的优点,对多肽的合成及脱保护研究有重要的参考价值。     

葱蝇谷胱甘肽S - 转移酶基因的克隆与序列分析(动物科学)

谷胱苷肽S-转移酶(GST)是昆虫体内广泛存在的一类解毒酶,可以保护机体免受内源性或氧化物的损害。昆虫对一些杀虫剂的抗性与GST表达水平增高有关。GST的研究主要集中在杀虫剂抗性上,可将其作为昆虫的药物靶标,设计和开发新型的杀虫剂。采用RACE的方法,克隆了葱蝇(Delia antiqua)GST基因cDNA的全长序列(GenBank登录号:JQ625502),获得的cDNA全长874bp,其中阅读框ORF 627bp,编码208个氨基酸,推测其相对分子质量为23.9kD,等电点为5.83。通过该基因推导的氨基酸序列与其它物种的GST蛋白进行相似性比较和系统发育分析,发现葱蝇与丝光绿蝇(Lucilia cuprina)的谷胱甘肽转移酶氨基酸序列同源性最高。该结果进一步丰富了GST基因的基础数据,有助于葱蝇的杀虫剂抗性机理和发育机理的相关研究。     

碱性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化活性肽的工艺优化

为了提高螺旋藻肽的抗氧化能力与收率,采用单因素实验和响应面法对碱性蛋白酶水解螺旋藻粉制备抗氧化活性肽的工艺条件进行优化。实验结果表明,与木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶相比,碱性蛋白酶对螺旋藻粉的水解能力最强,其最适水解条件为55.46℃、pH值为 6.71、固(g)液(mL)比为1∶10.83。在此条件下,酶解240min,螺旋藻肽的收率为58.50%,与优化前相比,提高了15.61%。所制备的螺旋藻肽具有较强的抗氧化能力,在质量浓度为0.86g/L时,其DPPH·清除能力为77.60%,与优化前相比,提高了7.62%。     

7种杀菌剂与拮抗菌SJ1606发酵代谢物配合对苹果树腐烂病菌的抑制活性

[目的]明确7种杀菌剂和拮抗菌SJ1606对苹果树腐烂病菌防治效果、筛选出高效混配剂,为传统化学杀菌剂的减量增效使用提供参考方向。[方法]采用菌丝生长速率法测定了7种杀菌剂和拮抗菌SJ1606发酵代谢物以及新型混剂对苹果树腐烂病菌的抑制效果。[结果]苹果树腐烂病菌对咪鲜胺、戊唑醇、丙环唑、多菌灵、苯醚甲环唑表现为高度敏感,以上5种化学杀菌剂对病原菌的EC₅₀分别为0.12、0.33、0.57、0.64、1.14μg/mL;对吡唑醚菌酯表现为中度敏感EC₅₀为6.92μg/mL;对福美双表现为不敏感,EC₅₀为149.99μg/mL。SJ1606发酵上清液和脂肽粗提物对病菌的EC50分别为40.36、14.75μL/mL。采用体积混配方法,脂肽粗提物对部分化学药剂表现出较强的增效作用,其中与多菌灵混配以7∶3增效最为明显,毒性比达1.72;与吡唑醚菌酯以6∶4的毒性比最高为1.58,与咪鲜胺混配以6∶4的混配毒性比最高为1.50;与丙环唑混配以5∶5毒性比最高为1.48。[结论]成功筛选出脂肽粗提物对化学杀菌剂混配增效比例...