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851.
现象学至少带给课堂教学中教师情感表达研究领域两个重要的研究方法:其一,是它的"本质直观"方法。其二,是它的"回到事情本身"方法。同时,现象学对课堂上教师情感表达研究的启示是:立地在课堂教学场,对教师情感表达本身进行反思,重新理解教师情感表达的意义,支持和鼓励教师在课堂上自然健康地进行情感表达,这对于当今的教师培训(尤其是农村骨干教师培训)具有很强的现实意义。 相似文献
852.
将RT-PCR扩增的Egr-1基因连接到pMD-18载体上并测序鉴定,经测序正确的Egr-1基因亚克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1上构建成重组质粒pEGFP-Egr-1.重组质粒pEGFP-Egr-1转染HepG2细胞后,运用荧光显微镜及荧光定量PCR技术分析其在HepG2细胞中的表达情况,并进一步运用WST-1法分析其表达对HepG2细胞增殖的影响.结果显示,重组质粒pEGFP-Egr-1构建正确,转染后在荧光显微镜下观察可见HepG2细胞发出绿色荧光信号,荧光定量PCR分析发现转染后HepG2细胞Egr-1基因mRNA水平明显升高.WST-1结果表明,与对照组相比,转染pEGFP-Egr-1质粒的HepG2细胞,其增殖速率明显下降.上述结果表明,pEGFP-Egr-1重组质粒构建成功,外来过表达Egr-1基因能够抑制HepG2细胞增殖. 相似文献
853.
以前期筛选到的纤维素酶高产菌株绿木霉T.viride ZY-01的总RNA为模板,利用RT-PCR技术克隆出内切葡聚糖酶EGⅣ基因,连接至pET-28a构建出重组质粒,并转化至E.coli BL21(DE3)中表达。该EGⅣ基因约有1089bp,在启动子T7lac的控制和IPTG的诱导下,目的基因成功地在原核细胞中表达。通过SDSPAGE检测得出目标蛋白分子量为39kDa,重组酶的比酶活为1.05U/mg,该酶最适pH值为6、最适反应温度为50℃。 相似文献
854.
855.
提出了一种新的用于微阵列基因差异表达多重假设检验的统计量计算方法,该方法利用基因表达值到各类样本数据中心的距离作为统计量进行多重假设检验,各统计量之间没有相关性,并且有效地减弱了数据噪声带来的假阳性结果,从而提高了多重假设检验的功效,所选择出的基因集也具有更好的分类能力. 相似文献
856.
重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35%,表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到羧肽酶原B,在复性液中进行稀释复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B,然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28.5mg/L),比活为13.5u/mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶 羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物,证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。 相似文献
857.
根据噬菌体434cro的基因序列,合成了一对在Cro的C-末端含有6个His密码子的寡核苷酸(69bp),并在其两端设计了PstI和KasI两个酶切位点。经粘合、退火后将双股寡核苷酸链分别插入p434cro(3.35kb)质粒的438位(PstI切点)和638位(KasI切点),构建成含434crohis基因的重组质粒。其表达产物为C端含有6个His的阻遏蛋白434crohis。经功能测定表明融合蛋白434crohis仍具有调节DNA转录功能,并用金属亲和层析鉴定了表达产物 相似文献
858.
香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,SDS-酚法纯化的基因组RNA作为模板,RT-PCR合成并扩增外壳蛋白基因cDNA,cDNA克隆于pGEM-T easy vector,转化为E.coliJM109。阳笥克隆pTCaCP经序列分析,证明带有全长CP基因。 相似文献
859.
860.