蛇毒神经生长因子的分离纯化及鉴定

采用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０、ＣＭ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ３２柱层析，从中华眼镜蛇中分离出神经生长因子（Ｎｅｒｖｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｅｒ，ＮＧＦ）。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法证明所得以的ＮＧＦ为单一组分，相对分子质量约为１．３×１０＾４。经凝胶等电聚焦电泳测得ＮＧＦ等电点ＰＩ约为７．０左右。经ＨＰＬＣ及电泳图像分析系统测得纯度为９８％。此ＮＧＦ等８ｄ鸡胚背     

尖吻蝮蛇毒碱性出血毒素AaHⅢ晶体结构初步测定

出血毒素广泛存在于很多蛇毒中,它能引起动物的皮下、脑、肾以及心脏等组织的出血和坏死。80年代末以来,随着部分蛇毒出血毒素氨基酸序列的测定和生化性质的深入研究,发现大部分出血毒素都是含锌金属蛋白酶。根据蛇毒金属蛋白酶所包含的从N端到C端的功能结构域的数目,可将其分为4个类型:P-Ⅰ,P-Ⅱ,P-Ⅲ和P-Ⅳ。其中P-Ⅰ型分子量最小,只含蛋白酶结构域,是所有蛇毒含锌金属蛋白酶中共同的催化结构域。蛇毒金属蛋白酶活性区域的氨基酸序列与哺乳动物基底膜金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase,MMP)高度相似,并且与MMP一样能作用于结缔组织的胶原蛋白,对细胞分化和肿瘤生长起着信号传递作用,同属于MMP超家族,是抗肿瘤和关节炎药物设计研究中重要的靶蛋白。同时,出血活性是蛇毒毒害作用的一个重要方面,出血毒素空间结构与功能关系研究将有利于对蛇毒出血活性机理的认识。迄今只有3种蛇毒金属蛋白酶的晶体结构得以测定,蛇毒金属蛋白酶的作用机理,特别是出血作用的分子机制还有待于进一步研究。中国皖南尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒中含有丰富的出血毒素。已有3种出血毒素(AaHⅠ,AaHⅢ,AaHⅣ)得以分离纯化和结晶。其中AaHⅢ分子量为22ku,等电点pI>9.0,具有酪蛋白水解酶活性。在已发现的100多种各类蛇     

眼镜蛇毒神经生长因子对成年猫坐骨神经损伤治疗效果的实验室观察

目的 :探讨从眼镜蛇毒分离纯化出的神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对成年猫坐骨经损伤后的影响。方法 :本实验制成成年猫坐骨神经损伤模型 ,损伤局部注射蛇毒NGF(2μg/kg/d) ,分别治疗10d和30d ,并与对照组(损伤坐骨神经 ,不给药物)比较。结果 :眼镜蛇毒NGF在神经损伤早期应用能减轻神经纤维发生的溃变 ,促进神经纤维再生。结论 :损伤局部长时间注射NGF会导致神经纤维增生过度 ,丧失传导功能     

口服三种形式眼镜蛇毒的急性毒性及对肝癌移植瘤的抑瘤作用

目的 :了解口服 3种形式眼镜蛇毒的急性毒性及对肝癌的在体抑瘤作用。方法 :按Bliss法设计急性毒性实验 ,蛇毒兔血清、原毒和经酸热处理后蛇毒分别一次性给小鼠灌胃 ,观察其急性毒性。移植小鼠腹水型肝癌于小鼠右腋皮下 ,应用以上 3种形式蛇毒连续灌胃 9d ,每天给药量以最大耐受量 (LD1)的 1/3,计算其抑瘤率。结果 :小鼠口服上述 3种形式蛇毒的LD50 及 95 %可信限分别为 5 4 10mg·kg- 1(46 5 0～ 6 2 90mg·kg- 1)、5 2 94mg·kg- 1(42 0 7～ 6 6 6 3mg·kg- 1)和 97 4 5mg·kg- 1(83 6 2～ 113 5 6mg·kg- 1)。 3种形式蛇毒 2次抑瘤实验的抑瘤率 :蛇毒兔血清冻干粉为35 5 %、32 9% ,原毒为 2 2 9%、2 0 3% ,经酸热处理后蛇毒为 2 5 3%、2 1 3%。结论 :眼镜蛇毒原毒的抗肿瘤作用在蛋白变性或消化吸收后仍然得以保留 ,蛇毒兔血清冻干粉的毒性较其他两种低但抑瘤作用强     

竹叶青（Trimeresurus stejnegeri）蛇毒

用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－５－分离竹叶青粗毒，再经ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－ＣＬ－６Ｂ、ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－５０和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００纯化，得到一个５－核苷酸酶，对血小板聚织要具有强抑制作用，在ＳＤＳ－聚丙烯酰谘电泳图谱上为一单一蛋白带，分子量为８２５００，是一个糖蛋白，含６．７％中性糖和０．７％唾液酸。     

大鼠膈肌来源的β-银环蛇毒素结合蛋白的一些结合性质

从毒蛇毒纯化的一类选择地阻遏乙酸胆碱(ACh)从运动神经末梢释放的神经毒素,即β型蛇神经毒素,被认为是分析研究神经递质释放机制的十分有用的工具.β-银环蛇神经毒素(β-bungarotoxin;β-BuTX)便是其中被研究得比较多的一种,其分子量约21000ku,由共价相连的2条不同的肽链构成.β-BuTX在外周神经系统中对运动神经末梢的释放过程有高度的选择性阻遏作用,但在中枢神经系统中除阻遏胆碱能突触传递外,尚作用于γ-氨基丁酸(GABA)能等神经元.据文献报道,已有作者鉴定了这种毒素在大鼠和鸡的脑中的结合蛋     

白唇竹叶青蛇毒类凝血酶基因的克隆和序列分析

通过分析多种已知的毒蛇蛇毒类凝血酶（SVTLEs）基因序列同源性，以保守的N和C末端氨基酸序列设计引物，克隆得到白唇竹叶青（Trimeresurus albolabris）SVTLE基因并分析其序列。以毒腺总RNA为模板进行RT—PCR，纯化并克隆至pMD18-T。结果表明，该酶基因大小为777bp；推测出其相应氨基酸序列含258个氨基酸残基，分子量为28．02kD，pI值为6．07；其3个可能糖基化位点为NDT103～105、NNS121～123和NRT251～253；与其它毒蛇的已知SVTLEs基因比较分析，推测出其含6对二硫键即Cys31—162、Cys50-66、Cys98．256、Cys142—210、Cys174—189和Cys200—225；其催化活性中心氨基酸残基为His65、Asp110和Ser204。分子进化树分析表明，毒蛇SVTLEs一级结构的进化具有一定种属特征，可为蛇的系统分类提供参考。     

中国科学院昆明动物研究所动物毒素实验室

蛇毒是毒蛇分泌的一种毒液,由多种蛋白和多肽等活性物质组成,具有多种生物学活性。它们可以作用于人体的血液系统、神经系统和免疫系统。由于它们作用专一、活性高,是天然药物开发的宝库。自古就有人使用饭匙倩蛇毒做镇痛药,由于现代对蛇毒蛋白的深入研究,蛇毒研发的药物在临床诊断和治疗上的应用越来越广泛。     

陕西蝮蛇蛇毒的比较研究

对陕西分布的日本蝮蛇短尾亚种（Agkistrodon blomhoffii breuicaudus)，秦岭蝮（A.qinlingensis)及中介蝮（A.intermedius)的蛇毒进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳研究，结果表明，蝮蛇蛇毒电泳具有种的特异性，三种蛇毒泳图谱无论在带的数目，含量及分布特征方面均存在明显差异，三者之间应为种间关系。     

江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A2的免疫学研究

用江浙蝮蛇毒中纯化的中性磷脂酶Ａ２（ＮＰＬＡ２）免疫家兔，获得了多克隆抗体，抗体与抗原结合后，抑制了该抗原的神经毒性，而对其催化活力无影响，表明ＮＰＬＡ２有两个活性结构域，即神经毒性与催化活性分别位于两个活性位点上，利用免疫亲和层析纯化了ＮＰＬＡ２的多抗，经ＥＬＩＳＡ检测，与酸性ＰＬＡ２和碱性ＰＬＡ２均有免疫交叉反应，这提示了ＮＰＬＡ２与酸性ＰＬＡ２及碱性ＰＬＡ２的抗原决定簇有同源性。