眼镜蛇（Najanajaatra）毒膜毒素MT—I的生物学效应研究

从眼镜蛇毒中纯化出膜毒素ＭＴ－Ｉ，该毒素与磷脂酶Ａ２产生协同学保血效应，使同二胜利肌等标本产生进行性挛缩，对体外Ｈｕｔ－７８细胞有杀伤作用，腹腔注射能引起家猫的心电图异常。     

蛇毒类凝血酶研究进展

对有关蛇毒类凝血酶(SVTLEs)的分布分类、理化性质、酶学性质、结构特征、基因克隆表达、临床应用等方面的研究资料进行了概括和综述.结果发现:SVTLEs主要分布在蝮亚科和蝰科毒蛇的毒液中;根据SVTLEs水解纤维蛋白原释放FPA和FPB的速度不同,可将其分为SVTLE-AB、SVTLE-A和SVTLE-B等3类;多数SVTLEs的分子量在30~50 kD,含6个二硫键,pI较低,部分SVTLEs的pI较高;SVTLEs可水解TAME和BAEE,其活性可被DFP和PMSF所抑制,但不被胰蛋白酶trypsin及凝血活性中心His的专一抑制剂TLCK和EDTA抑制;对SVTLEs的一级结构和二级结构研究较多,对高级结构研究有待深入;很多SVTLEs基因在大肠杆菌中成功获得了表达,但表达物不能被糖基化和正确折叠,故没有活性或活性不高,而其在真核表达系统中表达活性较高;部分碳水化合物具有稳定SVTLEs结构及提高SVTLEs的酶活力的作用;SVTLEs的临床应用涉及心肌梗塞、缺血性中风、血栓性疾病等疾病的治疗.SVTLEs未来的研究重点将集中于其在真核表达系统的表达和对其高级结构的解析.     

蕲蛇蛇毒中凝血酶样酶的分离纯化与特性

蕲蛇粗毒经DEAE -SephadexA - 5 0、POROS 5 0HS及TSKG30 0 0SW分离纯化 ,得到 1个具有凝血酶活力的峰 .该峰经SDS -PAGE和PAGE检测均为一条带 ,分子量约 2 8.0kDa ,加DTT处理后 ,拆分为约 14.8kDa的亚基 .其凝血酶活力为 14.7NIHu/mg ,精氨酸酯酶活力为 2 1.98TAMEμmol/mg·min .该组分具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,但没有明显的出血反应 .肝素不影响该组分的凝血酶和精氨酸酯酶活性 ,EDTA、PMSF、DFP则会产生不可逆抑制作用 ,表明该组分属于金属蛋白 .     

长白白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶制品的生化分析

对长白白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的理化及酶学性质进行系统研究． 结果表明， 该酶为一分子量为３８ ０００， 等电点为４５０ 并对温度有很高稳定性的糖蛋白， 该酶的最适ｐ Ｈ 值为８０，其活力可被 Ｄ Ｆ Ｐ 和 Ｐ Ｍ Ｓ Ｆ抑制．     

抗尖吻蝮蛇毒卵黄抗体口服给药保护剂的研究

【目的】比较硫糖铝和5种糖类对抗尖吻蝮蛇(Deinagkistrodon acutus)毒卵黄抗体(IgY)的保护作用,为开发抗尖吻蝮蛇毒IgY口服制剂提供依据。【方法】通过免疫白来航鸡(Gallus domesticus),从所产鸡蛋中制备抗尖吻蝮蛇毒IgY。在不同pH 值(2.0,3.0)条件下,于IgY中加入相同剂量的保护剂,用ELISA 法测定IgY 活性;在pH 值为2.0且加入条件下,加入等于或高于胃内正常质量浓度的胃蛋白酶,后加入不同剂量的硫糖铝,再用ELISA法测定IgY 抗体活性;用不同剂量的保护剂与IgY混合后灌胃小鼠(Mus musculus),在不同时间点(1.5,2.5,3.5h)取血,采用ELISA和Western法测定血清中的IgY活性。【结果】在pH 值为2.0和3.0条件下,硫糖铝对IgY抗体活性的保护效果均为最佳;在pH 值为2.0且加入不小于胃内正常的胃蛋白酶质量浓度的条件下,体积分数在30%以上的硫糖铝均可提高IgY 活性;IgY 灌胃后的小鼠血清中,体积分数为50%的硫糖铝可有效保护IgY 活性。【结论】加入硫糖铝作保护剂后能有效提高IgY 对胃酸和胃蛋白酶的抵御作用。
     

尖吻蝮蛇毒出血毒素I0.27nm分辨率晶体结构测定

蛇毒含锌金属蛋白酶与基底膜金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)有着相似的活性区域和生物学功能,它们同属MMP超家族(MMP superfamily)。MMP超家族蛋白能水解基底膜上的胶原蛋白,对结缔组织细胞分化、基底膜形成和降解起着重要的平衡作用。在人体中,这种子衡的失调常导致关节炎和肿瘤疾病。因此,MMP蛋白成为抗癌症和关节炎药物设计研究中的重要靶蛋白。1994年,两种蛇毒含锌金属蛋白酶:来自东部响尾蛇(eastern diamondback rattlesnake)的Adamalysin Ⅱ和来自西部响尾蛇(western diamondback rattlesnake)的Atrolysin C的晶体结构得到解析。但详细的作用机理,特别是出血作用机理目前尚不清楚。     

几个重组蛇毒金属蛋白酶的表达、重折叠及其生物学活性

皖南尖吻蝮蛇毒出血金属蛋白酶acutolysin A除了具有引起动物皮下出血的活性外, 还具有降解纤维蛋白原和纤黏连蛋白的活性. 将acutolysin A以及非出血金属蛋白酶BR的cDNA分别克隆到原核表达载体pET-22b中, 并在大肠杆菌中以包涵体的形式表达了这两个重组蛇毒金属蛋白酶, 即A-22b和BR-22b. 经变性和复性处理后, A-22b具有明显的出血活性, 但没有对纤维蛋白原和纤黏连蛋白的水解活性; 而BR-22b没有出血活性, 却具有降解纤维蛋白原的活性. 此外, 通过PCR方法构建了两个嵌合体基因C1和C2. C1是由BR基因的5′端330 bp和acutolysin A的3′端285 bp构成的嵌合体基因; C2是由acutolysin A基因的5′端324 bp和BR的3′端336 bp构成的嵌合体基因. 将它们克隆进表达载体pET-22b中得到两个表达质粒, 即pC1-22b和pC2-22b. 并以包涵体的形式表达了相应的两个重组蛋白, 即C1-22b和C2-22b. 经同样的变性和复性处理后, C1-22b与BR-22b类似, 具有较强的纤维蛋白原水解活性, 但没有出血活性. 与A-22b相似, C2-22b具有出血活性但没有对这些蛋白的水解活性. 这些结果暗示, 蛇毒金属蛋白酶的N端主亚结构域在出血活性上很可能起关键作用并极大地影响酶对底物的选择性.     

眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人鼻咽癌CNE-2细胞株的影响

目的：了解眼镜蛇毒灌胃后的兔血清(serum of rabbit taking orally cobra venom，SRCV)对人鼻咽癌CNE-2细胞的影响。方法：采用体外细胞培养的方法，观察SRCV对人鼻咽癌CNE-2细胞及人胚肺成纤维细胞的细胞毒作用，及对细胞生长和分裂指数的影响。结果：发现SRCV能够明显抑制鼻咽癌CNE-2细胞的生长，且其抑制效应随剂量的增加而增加，但该血清对正常人胚肺成纤维细胞的生长却没有明显影响。结论：SRCV对鼻咽癌CNE-2细胞的生长有明显的抑制作用，并且有高度的选择性。     

MALDI/MS法研究蛇毒蛋白的分离及分子量测定

基体辅助激光解吸电离质谱法(Matrix assisted laser desorption ionization/Massspectrometry,MALDI/MS)是近年来发展起来的一个最新的质谱学分支,目前已在肽、蛋白质、寡核苷酸、多糖等生物大分子的研究方面取得较大进展.这种方法首先由德国科学家Karas和Hillenkamp建立起来.它的出现对于生物大分子的研究具有重要意义.这种方法具有以下一些特点:(1)使用脉冲激光作为电离手段,由于激光和生物样品分子之间作用的     

蛇毒蛋白质毛细管高效液相色谱分离

利用高分离效能、高灵敏度的毛细管高效液相色谱法, 实现皮摩尔级微量蛇毒蛋白质的组分分离同时利用自行充填的毛细管高效液相色谱柱替代昂贵的原装柱, 既能较好分离复杂的蛇毒蛋白质, 又可满足不同的分离纯化要求