冷活性琥珀酸脱氢酶的特性

用常规酶学方法从嗜冷酵母(Y18)中分离纯化有催化活性的琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase, SDH).该酶的最适反应温度为20℃,0℃仍然保持酶活性的20%,40℃处理30min酶活性损失90.4%,不同温度处理后酶在280nm的紫外吸收明显改变,随温度升高在280nm紫外吸收值增大.这些结果表明所分离到的SDH是对温度敏感的冷活性酶.纯化的SDH经PAGE电泳分析显示单一条带,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测出相对分子质量为60×103和32×103的2条带,分别为黄素蛋白(flavoprotein, FP)大亚基和铁蛋白(iron-protein, IP)小亚基.通过对FP的1491个碱基的DNA序列分析表明(酿酒酵母FP基因全序列由1923个碱基组成),菌株Y18与酿酒酵母具有很高的DNA序列同源性;Y18与酿酒酵母FP一级结构包括酶的活性中心基本一致,但Y18的FP中3个位置的氨基酸变为R基较小的氨基酸,并有3个位置的氨基酸被在β-转角处出现频率较高的氨基酸所取代(丝氨酸、天冬氨酸和苏氨酸).这些结构特性可能使Y18 SDH的空间结构更具柔韧性(flexibility),有利于在低温条件下发挥催化功能.     

蝴蝶花中2种异黄酮的含量测定及其抗肿瘤活性

建立蝴蝶花中鸢尾黄素与次野鸢尾黄素的含量测定方法,并对此2种异黄酮成分进行抗肿瘤活性的初步研究.采用HPLC法测定不同产地蝴蝶花中鸢尾黄素与次野鸢尾黄素的含量;以Hela、Hccc-9810和H460细胞为供试细胞株,采用CCK-8法测定鸢尾黄素、次野鸢尾黄素的抗肿瘤活性.结果表明:鸢尾黄素与次野鸢尾黄素的线性范围分别为0. 5～100、2. 5～250 mg/L;平均加样回收率分别为99. 96%、100.24%; RSD%分别为2. 01%、1. 49%;鸢尾黄素对Hela细胞的增值抑制作用明显(IC50=(49. 24±1. 11)μmol/L),而对于Hccc-9810和H460细胞株抑制作用不明显.结论:建立的HPLC含量测定方法专属性强、准确度高、重复性好,可用于蝴蝶花中鸢尾黄素、次野鸢尾黄素的含量测定;鸢尾黄素对Hela细胞的抑制效果较好.     

1,25(OH)_2VD_3在过敏原特异性免疫治疗花粉过敏哮喘中的应用

以1,25(OH)₂VD₃为佐剂制备软叶针葵花粉变应原疫苗,以小鼠致敏哮喘模型为研究对象进行特异性免疫治疗.通过检测小鼠气道高反应性、血清中特异性抗体、细胞因子以及肺组织病理学切片等指标对治疗模型的构建进行评价,探讨1,25(OH)₂VD₃在过敏原特异性免疫治疗花粉过敏哮喘免疫机制中的作用.结果表明:以1,25(OH)₂VD₃为变应原疫苗能有效抑制花粉特异性IgE的产生和Th2细胞因子IL-4分泌,促进封闭性抗体IgG2a产生和Th1细胞因子IFN-γ的分泌,增加耐受性细胞因子IL-10生产,使Th2反应向Th1反应转变.1,25(OH)₂VD₃在花粉过敏性哮喘治疗中能大幅提高过敏原特异性免疫治疗的疗效.     

Rhodobacter sphaeroides 偶氮还原酶三级结构同源建模与分析

利用同源建模方法构建了Rhodobacter sphaeroides偶氮还原酶AZR的三级结构模型.结果表明,AZR为α/β型结构的黄素氧化还原蛋白,5个相互平行的β折叠形成分子中间的平面,5个α螺旋分列于平面的两侧;在β折叠的C端非共价结合的黄素单核苷酸(FMN)作为氧化还原反应中心.根据序列对齐分析,将依赖黄素的偶氮还原酶分为两个家族,但结构对比分析表明,它们具有类似的三级结构和活性区域.对AZR的结构研究为发现新的偶氮还原酶和深入研究其功能奠定了基础.     

金雀异黄素对小鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖、迁移和黏附的影响

利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法、细胞划痕实验和细胞黏附实验等研究了金雀异黄素对小鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖、迁移以及与血管内皮细胞黏附的影响;利用免疫荧光实验观察了金雀异黄素对B16BL6细胞中微管和肌动蛋白分布的影响.结果表明,与对照组相比,金雀异黄素可以抑制B16BL6细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞的黏附,影响B16BL6细胞中肌动蛋白的组装,但不影响细胞中微管的组装.这些结果提示,金雀异黄素抑制B16BL6细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞的黏附可能是通过诱导细胞中肌动蛋白的重排来实现的.     

硒对落葵植株生长、光合特性及可溶性糖含量的影响

以落葵为实验材料,经溶液培养实验,研究了不同硒浓度（0,1、1,0、10mg／L）对落葵植株根系生长、光合作用及可溶性糖的影响,结果表明：在0．1mg／L硒浓度处理下,各项根系生长指标达到最大值,且与对照差异达显著水平;随着硒浓度的增加,净光合效率（Pn）呈先增加再降低趋势,细胞间隙CO2浓度（Ci）呈逐渐增加趋势,蒸腾速率（Tr）、蒸腾效率（Te）均呈下降趋势,在低浓度硒处理（0,1和1．0mg／L）下,落葵的可溶性糖含量与对照差异不显著;在高浓度硒处理（10mg／L）T,可溶性糖含量剧烈增加．低浓度硒有利于植物的生长,高浓度硒则抑制植物的生长,     

相转移催化法合成黄酮糖苷的研究

以[(CH3OCH2CH2OCH2CH2)3N]为相转移催化剂,白杨素和鸡豆黄素为苷元,研究了黄酮和异黄酮类化合物分别与1-溴-2,3,4,6-O-四乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖进行缩合反应制备糖苷的合成工艺.其合成收率分别为60%和54%.     

核酸与杨梅黄素荧光体系的研究

 研究了杨梅黄素与核酸溶液的结合反应.加入核酸溶液后,杨梅黄素在436nm处的荧光强度显著地增强.在最佳实验条件下,对ctDNA和yRNA的线性范围分别为0.2～3.2μg/mL和0.18～3.2μg/mL.并讨论了干扰物质的影响,对其作用机理也进行了初步探讨.     

视黄素受体介导的视黄素（retinoids）抗癌作用

对近年来视黄素受体介导视黄素抗癌作用机理的研究进展作一综述,主要有：1）视黄素受体;2）视黄素受体与细胞生长;3）视黄素受体与孤生受体的的相关性;4）视黄素受体对AP-1活性的抑制作用;5）视黄素受体介导的信号转导途径。通过研究,对于探讨视黄素受体的功能、阐明视黄素的抗癌机理、合成更多的受体选择性视黄素具有重要的现实意义。     

葵盘果胶与羧甲基纤维素钠复配及其在果酱中的应用

研究葵盘果胶与羧甲基纤维素钠的复配,旨在提高单一葵盘果胶的凝胶性质。在研究葵盘果胶凝胶性质的基础上,复配葵盘果胶、羧甲基纤维素钠,确定两者优化配比,并以苹果果酱的感官品质、凝胶强度为评价指标,确定复配凝胶在苹果果酱中的最佳配方。实验结果表明,当葵盘果胶与羧甲基纤维素钠质量比为10∶1至10∶4时,羧甲基纤维素钠可提高复配胶的凝胶强度,且复配凝胶应用在苹果果酱中的优化配比为葵盘果胶质量分数1.0%、羧甲基纤维素钠质量分数0.1%,制备得到的果酱感官品质较优,凝胶强度达到最大值(40.55±0.68)g/cm²。故一定质量比的葵盘果胶与羧甲基纤维素钠进行复配在理论与实际应用中均具有协同作用。