大蒜汁抑菌作用的研究

采用平板菌落计数法,比较不同浓度的生蒜汁、熟蒜汁、醋酸汁、糖蒜汁对常见的3种菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)的抑菌作用.结果表明:生蒜、醋蒜汁对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均具有一定的抑制作用,且生蒜汁和醋蒜汁的抑菌作用显著高于熟蒜和糖蒜,且随大蒜汁浓度的增加,抑菌作用逐渐增强.     

ICU耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的临床分析

目的:通过对重症监护病房(ICU)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的分析,探讨合理使用抗生素及防治措施以预防医院内MRSA感染的发生和流行.方法:对我院ICU2008年7月1日至2009年10月30日近15个月的追踪观察,对102例MRSA引起的医院内感染进行回顾性临床耐药性分析.结果:我院ICU病房15个月内共发生MRSA感染102例,占金黄色葡萄球菌感染的96.2%,均全部使用过广谱抗生素,使用大于2种抗生素占41%(OR值1.46,95%CI 1.54～3.17),大干3种侵入性操作占56%(OR值4.80,95%CI 2.27～10.29),大于3种基础疾病占49%(OR值2.88,95%CI 1.40～6.02).结论:ICU中MRSA感染率较普通病房高,必须引起重视,控制MRSA感染应积极进行病原学监测、及时发现病例、隔离和治疗患者、合理使用广谱抗生素、严格消毒隔离措施、认真洗手等.     

几种表面活性剂对金黄色葡萄球菌生长的影响

在液体培养基中分别加入不同浓度不同种类的表面活性剂(AES、Tween-80、Tween-20和SDS),接种金黄色葡萄球菌,37℃恒温振荡培养,在不同培养时间测定培养液OD值,比较4种常用表面活性剂对金黄色葡萄球菌生长的影响.结果表明:4种表面活性剂对金黄色葡萄球菌的生长都表现出抑制作用,但抑制效应不同:AES对金黄色葡萄球菌生长的抑制作用最大,其次为Tween-80和Tween-20,SDS抑菌作用最弱.     

BCR/ABL和SEA双基因重组载体的构建和表达

目的:构建和表达含BCR/ABL融合基因和葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核双表达质粒.方法:利用RT-PCR技术从K562细胞中扩增出含BCR/ABL融合位点基因片段,提取金黄色葡萄球菌基因组DNA扩增出SEA基因,分别将两基因片段连在pIRES载体的多克隆位点A和B上,构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA- pIRES-BCR/ABL重组质粒.将重组质粒转染K293细胞,RT-PCR鉴定重组质粒在真核细胞的转录情况, SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白在真核细胞的表达.结果:成功扩增出BCR/ABL和 SEA基因片段;双酶切鉴定BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL重组质粒中含有BCR/ABL和SEA基因,测序证实完全正确;将重组质粒转染K293细胞后,经 RT-PCR扩增鉴定,插入到重组质粒的BCR/ABL和SEA基因能在真核细胞正常转录,经SDS-PAGE电泳鉴定重组质粒能够在真核细胞中表达BCR/ABL和SEA蛋白.结论:成功构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL真核双表达质粒,可在真核细胞中正常转录并表达BCR/ABL和SEA蛋白.     

金黄色葡萄球菌VBNC状态的诱导条件和EMA-qPCR检测

为建立金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)活的非可培养(VBNC)状态的诱导条件模型,考察了温度、盐度和酸度3个因素对金黄色葡萄球菌细菌可培养数的影响,通过正交试验优化得到了VBNC状态的诱导条件,同时观察细菌可培养数的变化,建立了DNA结合染料叠氮溴乙锭(EMA)与qPCR技术相结合检测VBNC金黄色葡萄球菌的方法.实验结果表明:细菌可培养数受酸度的影响最大,VBNC状态的最佳诱导条件为菌液在含15%NaCl和0.3%乙酸的营养肉汤培养基中于4℃下培养12 d;通过正交试验诱导后的不可培养菌可由EMA-qPCR方法有效检出,其与qPCR法的Ct值(荧光信号达到设定的阈值所经历的循环数)之差在1.29～8.56之间变化.     

微生物能力验证样品制备工艺及水产品企业水平测试结果评价

为了提高舟山市水产品企业实验室微生物检测能力,保证企业自检结果准确可靠,根据舟山市进出口检验检疫工作的特点,选取了水产品中3个常规的微生物检测项目,即菌落总数、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌检测,采用了真空冷冻干燥技术制备一系列微生物能力验证样品,对舟山市88家水产品企业的实验室进行微生物能力验证。结果表明采用本工艺制备的能力验证样品具有稳定性好、贮存方便、保存期长等优点。从水产品企业微生物水平测试结果来看,菌落总数项目的满意率为81.8%;副溶血弧菌检测的正确率为93.8%,而金黄色葡萄球菌检测的正确率为82.1%。检测结果存在偏差的主要原因是检测中未使用标准菌株进行参照、试剂在使用前无进行质量核查、对某些生化反应判断失误等。     

兔葡萄球菌病的诊断和药敏试验

目的对家兔发病死亡的原因进行诊断。方法对病死家兔进行剖检观察,并进行细菌分离培养与生化鉴定、PCR检测和药敏试验。结果通过对病死家兔进行剖检观察、细菌分离培养、生化鉴定、血清学试验、PCR检测和药敏试验,确诊病死家兔是金黄色葡萄球菌感染引起的细菌性疾病。药敏试验结果表明,分离菌株对青霉素、氨苄西林、万古霉素等抗生素敏感,而对头孢他啶、呋喃妥因已产生耐药性。结论为金黄色葡萄球菌病原鉴定与疾病诊断提供了科学依据。     

单克隆抗体与葡萄球菌肠毒素A结合物的制备及其抗肝癌作用

目的：制备超抗原（BAg)葡萄球菌肠毒素A（SEA）与抗人原发性肝细胞癌（简称肝癌）单克隆抗体（McAb)HAb18F(ab‘)2段的结合物,探讨其介导外周血单个核细胞（PBMC）的抗人肝癌作用。方法,制备McAb HAb18,并用木瓜蛋白酶消化法制备其F（ab‘)2段,再用化学连接剂N－琥珀酰亚氨基－3－（2－二硫吡啶）丙酸酯（SPDP）制备HAb18 F(ab‘)2-SEA结合物,结合物经经快速蛋白质液相层析系统用凝胶色谱柱纯化后,用SDSPAGE鉴定各种收集峰,免疫组化ABC法鉴定结合物的抗体活性,MTT法鉴定结合物活化PBMC的活性及其介导PBMC的杀伤肝癌细胞作用,结果,制备的HAb18F(ab‘)2-SEA结合物具有肝癌抗体活性和活化PBMC的功能,此结合物具有明显的介导PBMC杀伤肝癌细胞的作用,并与其[浓度呈正相关,结论,SPDP是一种很好的蛋白质交联剂,HAb18 F(ab‘)2-SEA结合物民向治疗肝癌具有一定的发展前景。     

聚合酶链反应检测石蜡切片中金黄色葡萄球菌DNA的研究

目的　探讨聚合酶链反应技术 (PCR)在检测石蜡包埋组织中金黄色葡萄球菌DNA的应用及价值。方法　利用PCR技术 ,对 55例福尔马林固定、石蜡包埋小鼠组织中SA DNA进行了检测。结果　 55例石蜡包埋的小鼠组织中均检测到SA DNA ,这与临床病理诊断为金黄色葡萄球菌 (S .aureus)感染相一致。结论　PCR技术可用于检测石蜡包埋组织中的SA DNA片段 ,为鼠S .aureus感染的回顾性分析提供了有效手段     

位点特异性DNA内切酶在植物基因打靶中的应用

基因打靶是在基因组指定位点插入、删除和替换DNA序列的技术。由于同源重组频率低,在植物中高效的基因打靶技术一直未被建立,制约了植物基因功能和分子育种的研究。近年来,人工设计的锌指蛋白和TAL效应因子DNA结合结构域实现了对全新DNA序列的识别。人工设计的DNA结合结构域连接核酸内切酶能在基因组指定位点创造双链DNA断裂,进而产生定点突变和促进同源重组。笔者重点介绍锌指核酸酶和TAL效应因子核酸酶在植物基因组定点突变和基因打靶中的研究进展,并对目前存在的问题进行分析。