人β防御素3基因在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达

根据大肠杆菌对精氨酸密码子使用的偏爱性和β防御素3全基因中G．C、A、T含量的平衡，设计搭桥引物，通过PCR法合成人β防御素全基因序列，克隆到真核表达载体pPICZα-A，测序确认．将重组体电击转化酵母GS115，转化子经甲醇诱导表达，Tricine-SDS-PAGE分析，琼脂孔穴扩散法检测抑菌活性．结果表明，目的基因在毕赤酵母中已得到表达，表达量为0．22mg／mL，重组人β防御素3对金黄色葡萄球菌有抑菌活性．     

Reaction dynamics between the photonuclease triplet-excited vitamin-K3 and guanine nucleotide

Nanosecond laser pulse photolysis was used to investigate the excited-state dynamics of the photonuclease vitamin-K3 (VK3). A spectral band peaked at 285 nm was newly observed and attributed to the triplet-excited state of VK3. In studying the photochemistry between the photonuclease VK3 and guanine nucleotide (dGMP), we obtained spectroscopic evidence for the photo-initiated formation of both VK3 radical anion and dGMP radical cation, and thus proved the charge transfer reaction between the triplet-excited VK3 and the ground-state dGMP.     

MTT法检测金黄色萄萄球菌活菌数的研究

以金黄色葡萄球菌为对象,探讨了MTT法应用于细菌细胞数定量分析时,MTT作用时间、毒性、剂量和DMSO用量等因素对活菌计数的影响.结果表明:当细菌数在105～107个/mL时,吸光度值与细菌数目呈良好的正向线性关系,MTT法可准确检测金黄色葡萄球菌的活菌数量.最佳反应条件为:0.25 mg/mL MTT溶液作用2 h,DMSO为2～2.5倍的菌液体积.     

免疫磁珠检测食品中金黄色葡萄球菌的研究

通过对金黄色葡萄球菌免疫磁珠添加量、免疫磁珠与菌液最佳反应时间、免疫磁珠分离金黄色葡萄球菌的敏感性试验、特异性试验的研究,确定了金黄色葡萄球菌抗体添加量50μg/m L、免疫磁珠添加量100μL,免疫磁珠与菌液最佳作用时间为30 min,免疫磁珠法检测灵敏度底限为10-9,相应的细菌浓度为14 cfu/m L.本试验制备的免疫磁珠灵敏性强,特异性高,大大节省了检测时间和费用.因此研究食品中金黄色葡萄球菌快速、准确检测方法以预防和控制食品安全事件的发生,具有重要的现实意义.     

锌指核酸酶技术最新进展及其在植物基因工程中的应用

锌指核酸酶(zinc finger nucleases,ZFNs)是近年来发展起来的一项定点改变基因组序列的新技术.它能够特异切开基因组中的特定序列,产生双链断裂DNA,诱导细胞启动DNA损伤修复过程,在修复过程中实现对靶基因的敲除或改变.这一技术可以通过删除某一基因或一个基因的一部分、导入点突变等,对该基因的功能进行研究,也可以定向改变基因组序列,使生物体获得新的功能.这项技术在基因功能的研究和新药的研发、新品种选育等方面有着十分广阔的应用前景,是后基因组时代基因功能研究的重要手段.介绍了ZFNs工作原理,重点阐述了该技术近几年的最新进展及其在植物学领域的应用,同时也对ZFNs存在的问题进行了深入分析.     

比较5种消毒剂对4种细菌的杀菌效果

目的 验证5种消毒剂对4种SPF级实验动物必须排除的细菌的杀菌效果。方法 以D/E中和肉汤为中和剂,检测其对5种消毒剂的中和作用;通过悬液定量杀菌实验,测试5种消毒剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌和鼠伤寒沙门氏菌的杀菌效果。结果 D/E中和肉汤对于新洁尔灭、健之素消毒液、百毒杀、百胜-30和75%乙醇均有较好的中和作用。新洁尔灭、健之素消毒液、百胜-30和75%乙醇4种消毒剂分别与4种细菌作用,1.5 min后杀灭效果良好。1∶600倍稀释的百毒杀消毒液有效杀灭金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、沙门氏菌需要5～10 min,但它对铜绿假单胞菌杀菌效果不理想。1∶200倍稀释的百毒杀消毒液作用1.5 min,可以有效杀灭铜绿假单胞菌。结论 新洁尔灭、健之素消毒液、百胜-30和75%乙醇在较短时间内即可对4种细菌产生良好的消毒效果。百毒杀有效杀灭铜绿假单胞菌需要较高浓度。     

常见食物中毒菌毒素的研究进展

食物中毒是食品卫生中经常遇到的问题,而细菌(毒素)性食物中毒又是最常见的形式之一,其中O157:H7大肠杆菌的Vero毒素、金黄色葡萄球菌肠毒素和肉毒梭菌神经毒素是经常引起食物中毒的细菌毒素.对这3种食物中毒菌毒素的产生、中毒情况、毒素类型、基因特性、致病机理、检测方法、应用研究及发展趋势进行了综述.     

基于多功能纳米酶的高灵敏金黄色葡萄球菌Apt-LFA检测方法

侧流层析分析(lateral flow assay, LFA)具有操作简单、成本低等优点,在致病菌检测领域应用前景广阔,但以胶体金为标记的LFA比色分析灵敏度较低。基于此,通过合成万古霉素修饰的Fe₃O₄@MOF@PtPd作为磁分离/纳米酶双功能信号探针,并与金黄色葡萄球菌适配体(aptamer, Apt)相结合,实现了夹心模式的LFA检测。在最优条件下,该LFA传感器可以实现对金黄色葡萄球菌的检测,其线性范围为10～100 000 CFU/mL,检测限为2 CFU/mL;该试纸条对牛奶中所添加金黄色葡萄球菌的所得回收率为96.9%～103.4%。研究结果反映出该LFA传感器具有灵敏度高、操作简便的优点;同时,其具有通用性,仅通过更换适配体就能应用于其他革兰氏阳性菌的检测。     

微量量热法筛选促菌特效营养药的研究

用热活性检测仪测定了枸杞,黄芪,灵芝,鹿茸对金黄色葡萄球菌促进作用的热功率－时间曲线,计算了不同浓度营养药物作用下的生长速率常数;根据生长速率常数和浓度的数据,确定了营养药物的最佳浓度。     

爪蟾卵提取物中凋亡特异核酸酶抑制物的鉴定

细胞色素c加至非洲爪蟾（Xenopus laevis）卵提取物S－150中,能诱导外源细胞核发生凋亡。诱导过程中,爪蟾凋亡特异核酸酶XAD被激活,在核小体间切割染色质,形成DNA梯（ladder).实验表明,正常卵提取物中大量存在凋亡特异核酸酶XAD抑制因子IXAD,抑制XAD的核酸酶活性;IXAD分子量约40ku,正常状态下以二聚体形成或与XAD形成复合体存在;凋亡中IXAD被降解,导致XAD被释放激活。Western检测和交叉抑制实验显示IXAD与DFF45在结构与功能上可能同源。实验结果进一步证明凋亡途径在进化上的保守性。