重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶蛋白在改良M9培养基中的诱导表达

以重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶(L-谷氨酸:氨连接酶,Glutamine Synthetase, GS EC 6.3.1.2)蛋白表达宿主菌株BL21(DE3) (pET3C/谷氨酰胺合成酶)作为研究对象,借助SDS PAGE分析方法,对于用乳糖诱导由T7lac启动子控制的重组目的产物蛋白的各种基本参数进行了初步的研究.研究了最佳本底培养基、最佳碳源及其最佳添加比例、碳源与诱导物的最适组合,并探索了适用于改良型培养基的诱导参数.实验结果表明,对于重组目的产物蛋白,改良型M9培养基完全可以替代LB培养基;以甘油为碳源,可以避免葡萄糖对T7lac启动子的屏蔽作用.以乳糖为诱导物,目的蛋白的表达量、可溶性及酶活与以IPTG为诱导物基本接近.研究结果为酶法合成谷氨酰胺的工业化生产提供了一定的参考.     

双螺杆挤压耦合碱预处理对芦苇酶解效果的影响

为了提高芦苇中木质纤维素的利用率,减少预处理过程中的能耗、水耗及废水,对双螺杆挤压耦合碱预处理芦苇的工艺条件及酶解效果进行了研究。首先,考察双螺杆螺纹元件、螺杆转速、碱用量、处理温度和保温时间对芦苇酶解效果的影响,对比不同预处理前后芦苇纤维结构和化学组成的变化;其次,通过对预处理后芦苇的逆流洗涤工艺进行优化,分析芦苇的化学组分和酶解得率;最后,采用扫描电镜和傅里叶变换红外光谱仪对预处理前后芦苇的纤维结构进行表征。结果表明：采用双螺杆挤压在KOH用量为4%（质量分数）、温度为90 ℃、保温2 h、逆流洗涤用水量的固液比（m/v）为1∶8的条件下,能够有效破坏芦苇纤维结构,脱除表面蜡质,木质素脱除率达到72%,预处理后芦苇在较低纤维素酶用量（10 FPU/g底物）下,水解48 h后总糖得率达到0.45 g/g（干芦苇）。因此,双螺杆挤压耦合碱预处理可以提高芦苇酶解转化利用率,工艺过程能耗低、水耗低、无废水排放,为芦苇原料化利用提供了一种低成本、绿色可行的技术方案。     

重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因及其重组质粒构建

目的:利用重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因的全长序列.方法:对风疹E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠PCR法分别合成该基因的3个片段,测序鉴定后以酶切连接法将各段拼接成全长为1 443 bp的RV rE1,将E1基因的全长序列克隆导入原核表达载体pET32a.结果:分别进行8轮、5轮和6轮的重叠PCR扩增,合成风疹基因3个片段;以酶切连接法将3个片段拼接成全长rE1基因并克隆入pET32a构建成载体pET32-RV rE1,PCR、酶切和测序鉴定结果表明,合成的E1基因大小、序列与预期相符;构建获得重组质粒pET32-RV rE1.结论:成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因并构建其重组质粒pET32-RV rE1.     

石油污染对真鲷幼体中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的毒理效应

研究了在实验生态条件下,不同浓度可溶性０＃柴油的暴露对真鲷幼鱼内脏组织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（Ｃａｔ）活性的影响．实验结果表明：ＳＯＤ酶活性对于油污染胁迫呈现出明显的剂量－诱导效应关系．在同一剂量溶度作用下,延长暴油时间,能诱导鱼体内ＳＯＤ酶活性,抑制Ｃａｔ酶活性．当污染胁迫解除后,其幼体内脏组织中的ＳＯＤ酶和Ｃａｔ酶活力均得到不同程度的恢复     

紫贻贝酶解多肽体外抗肿瘤活性研究

确定了紫贻贝胰蛋白酶水解时的最佳条件,研究了紫贻贝酶解多肽的体外抗肿瘤活性.采用正交实验方法, 以料液比、pH、加酶量、酶解温度和酶解时间为因素,以酶解液的氨基氮含量和肿瘤细胞增殖抑制率为指标进行L16(45)正 交实验,MTT法检测酶解多肽对DU-145、PC-3、H1299和MGCS0-3等肿瘤细胞的抑制活性;HE染色法观察酶解多肽对 肿瘤细胞形态的影响;免疫组化法检测酶解多肽对细胞中Bel-2表达的影响.结果表明:当料液比为1:4、pH为8.5、加酶 量为1 000 U/g、温度为45℃、酶解时间为5h时酶解多肽的水解度最大;当料液比为1:4、pH为8.0、加酶量为1 500 U/g、温 度为40℃、酶解时间为2h时酶解多肽的抗肿瘤活性最强,该肽可以下调肿瘤细胞中Bc1-2的表达.紫贻贝酶解多肽具有 抗肿瘤活性,可能是通过诱导细胞凋亡来实现的.     

酶联免疫法测定水产品中己烯雌酚残留量

采用酶联免疫法测定水产品中残留己烯雌酚的含量,并采用液相色谱-质谱联用法验证阳性结果。实验结果表明,该方法对水产品中己烯雌酚的检出限为0.35 μg/kg,回收率达77%～91%,具有良好的灵敏度和准确度。     

真核生物DNA聚合酶δ的研究现状

DNA聚合酶δ(DNA polymerase δ)是真核生物DNA复制的主要复制酶,同时还参与DNA修复,对保持真核生物基因组的结构完整性和遗传稳定性具有重要作用.对DNA聚合酶δ蛋白功能活性及其基因表达机制的研究因受技术上的限制而未能深入研究.由于其重要的生物学功能,目前引起人们的更多关注和重视.文中就该酶的生物学功能、亚基组成、核心酶的分子表达调控以及与其他蛋白相互作用等方面对国内外DNA聚合酶δ的研究进行简要综述.     

玉米自交系在缺磷胁迫下的5种抗氧化酶活性变化的研究

以珍珠岩作基质固体培养4种不同基因型玉米自交系材料，设置：0．25mol／LKH2PO4全磷（对照）、0mol／LKH2PO4（缺磷）2种处理，于第5，7，9，11d考察超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）、谷胱甘肽还原酶（GR）活性的变化．缺磷时不同自交系相同抗氧化酶活性的变化趋势不一致．相同自交系的不同抗氧化酶在缺磷胁迫下的变化趋势也有差异．结论：不能仅用1种膜保护酶在胁迫时活性的高低来判断材料是耐缺磷胁迫型还是缺磷敏感型．应综合考虑这5种保护酶活性．     

西藏高校学生乙型肝炎表面抗原携带情况调查与分析

目的：了解西藏高校学生的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的携带情况,并分析其相关因素。方法：应用酶联免疫法（ELISA）检测1890名入校新生的HBV血清标志物,利用SPSS15统计学软件进行数据的录入和分析,率之间采用χ2检验。结果：1890名大学新生,其中男性1011名,女性879名;藏族1100名,汉族及其他民族790名;检出HBsAg阳性者为242例,阳性率为12.8%（其中男生为14.0%,女生为11.4%）,男女阳性率差异无统计学意义（χ2=3.000,P〉0.05）。比较城乡生源的阳性率,发现不同生源地入校新生阳性率比较差异无统计学意义（其中城市12.8%、农村13.1%,χ2=0.035,P〉0.05）。藏族与汉族HBsAg阳性率比较差异有统计学意义（藏族15.8%,汉族8.5%,χ2=21.213,P〈0.001）;藏族学生HBsAg阳性率分地区比较差异无统计学意义（拉萨14.8%、日喀则5.7%、林芝13.4%、山南14.4%,χ2=0.383,P〉0.05）。结论：西藏高校学生乙肝表面抗原阳性率高于全国平均阳性率。应加强教育,定期注射乙肝疫苗,增强抗病能力,有效控制乙肝在高校的传播。     

非甾体类抗炎药的临床应用研究

目的阐述非甾体抗炎药物的临床应用.方法通过对国内外文献的比较分析,概述非甾体抗炎药作用机制、发展进程及发展趋势.结果非甾体抗炎药物是通过抑制花生四烯酸代谢而发挥作用,但对花生四烯酸代谢酶的选择性差异造成其严重的不良反应,使非甾体抗炎药临床应用受限.结论为了降低药物的不良反应,选择性COX-2/5-LO双重抑制剂及一氧化氮释放型非甾体抗炎药是临床用药的发展趋势.