人胰高血糖素样肽-1串联体的克隆及其表达

为大量获取人胰高血糖素样肽-1,利用基因串联的方法构建了人胰高血糖素样肽-1的一组串联体.将化学合成的人胰高血糖素样肽-1（human glucagon like peptide-1, hGLP-1）cDNA基因插入质粒载体pET-32a(⁺)中,构建成硫氧还蛋白（thioredoxin）及六聚组氨酸（hexahistidine）与rhGLP-1的融合表达载体pET32-GLP-1.在此基础上将该融合基因序列进行同向串联,获得二串和三串的表达载体pET32-GLP-1-2 和pET32-GLP-1-3.将该三种表达载体转化大肠杆菌BLR(DE3)后获得相应的基因工程菌.结果表明：三种基因工程菌经发酵和IPTG诱导后均正确表达目的蛋白,目的蛋白表达量随着基因串数的增加而得到一定提高,重组蛋白经分离纯化后进行生物学活性测试具有明显的降低血糖浓度作用.     

丝氨酰-天冬氨酰-谷氨酸三肽吸附低密度脂蛋白的机理的探讨

以聚丙烯酰胺(PAM)微球为载体,丝氨酰-天冬氨酰-谷氨酸(SDE)三肽为配体,通过两种方法将配体偶联到载体上制成吸附剂。采用体外静态吸附法检测吸附剂的吸附效果,考察SDE三肽仿生吸附剂对低密度脂蛋白(LDL)的吸附并探讨其机理。结果表明:两种方法制备的吸附剂对LDL都有一定的亲和吸附能力,Ca2 可通过桥接LDL所含磷脂极性头部的磷酸基团和吸附微珠配体上的羧基及交联相邻LDL磷脂间的磷酸基团,增大LDL吸附到吸附微珠上的机率,进而提高其吸附率。用戊二醛固定化配体制成的吸附剂因表面含有更多能与LDL相互作用的基团(COOH),更有利于LDL的吸附。     

肽酰转移酶催化肽键形成机理的理论计算研究

蛋白质合成过程关键的一步,由肽酰转移酶参与的肽键形成机理是一个基础的被长期讨论的生物分子学问题．早在三十几年前,就已经知道肽酰转移酶对肽键的合成起至关重要的作用．并且也知道肽酰转移酶是一个大的核蛋白,即包括很多蛋白质和RNA的大分子．但是一直以来科学家都认为,这个反应机理应该和丝氨酸水解酶水解蛋白质一样,是一个基于蛋白质催化的过程．     

硼酸对苗期花生叶片保护酶活性的影响

研究不同浓度硼酸对苗期花生叶片保护酶活性的影响。结果表明,喷施浓度为0.1%~0.4%的硼酸可以显著提高苗期花生叶片的POD、SOD、CAT和PPO活性;以浓度为0.2%~0.3%的硼酸喷施效果最好。但当硼酸浓度为0.6%时,4种保护酶的活性反而低于对照。     

抗原决定基印迹材料及其应用

基于抗体-抗原原理的蛋白质印迹材料对蛋白质的分离纯化、药物转运和细胞成像等具有十分重要的意义.其中抗原决定基印迹材料具有模板易得、构象稳定、空间位阻小等优点受到越来越多的关注和得到广泛的应用.本文重点综述了抗原决定基印迹材料的最新制备方法(包括抗原决定基本体印迹、抗原决定基接枝表面印迹、抗原决定基限域表面印迹、基于协同作用的抗原决定基表面印迹技术)以及在肽段、蛋白及细胞识别方面的应用.最后总结了抗原决定基印迹技术面临的主要问题和未来的发展方向.     

慢性心力衰竭失代偿患者血浆β-内啡肽与脑钠肽变化的意义

目的探讨慢性心力衰竭（CHF）患者血浆β-内啡肽（β-EP）在诊断和预后中的意义。材料和方法CHF患者71例,按NY-HA心功能分级分为3组（Ⅱ一Ⅳ）。应用放射免疫法（RIA）测患者血浆β-EP浓度,采用床旁Triager BNP测定仪测定同期血浆脑钠肽（BNP）量。结果CHF各组血浆β-EP和BNP含量与对照组相比显著性升高,并随心功能分级的增加呈上升趋势（P〈0．01）。CHF组血浆β-EP与BNP呈显著性线性正相关（P〈0．01）;血浆β-EP和BNP水平与EF值及EF呈显著性线性负相关（P〈0．01）。血浆中β-内啡肽含量越高则半年内心血管事件发生率越高（P〈0．01）。结论血浆β-内啡肽和BNP的水平是诊断CHF的重要实验室指标,并可用于心功能及预后的评估。     

荧光假单胞菌G2-EPSP合酶的拆分和intein介导的活性恢复

利用GPS-LS接点扫描系统, 在荧光假单胞菌G2的5-磷酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶编码基因aroA中随机插入15 bp (即编码5个氨基酸短肽)的外源片段, 建立含一系列不同插入位点的aroA突变体库. 利用内源aroA基因缺失的大肠杆菌突变株ER2799对突变体库进行功能互补筛选, 测序后确定了12个可以忍受5个氨基酸插入的位点, 其中位点F295/T296经Ssp DnaE内含肽(intein)介导的蛋白互补技术鉴定为可拆分和蛋白重建的位点. 从位点F295/T296将G2-EPSPS基因一分而二, N-端和C-端片段分别连接在携带Ssp DnaE 内含子元件的原核表达双质粒上, 获得共转化质粒pMEPSN295IN和pKEPSC296IC. 将质粒pMEPSN295IN和pKEPSC296IC分别或共转化内源aroA基因缺失的大肠杆菌突变株ER2799中, 携带共转化质粒的重组子能够在M9限制性培养基生长, 而携带单一质粒的不能生长, 表明从位点F295/T296拆分的aroA基因在内含肽介导下实现了蛋白重建, 在突变株ER2799中恢复了5-磷酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶活性, 酶活水平达到野生型的62.92%,为4.48 U/mg.     

含有氨基酸基团的聚(ε-己内酯)合成与表征

采用氨基酸钠游离的氨基引发ε-己内酯单体开环得到酯肽齐聚物,并以六亚甲基二异氰酸酯为扩链剂,将这些齐聚物扩链合成4种聚酯酰胺.将4种天然氨基酸(L-丙氨酸、L-亮氨酸、L-谷氨酸、L-赖氨酸)引入到聚(ε-己内酯)(poly(ε-caprolactone),PCL)中,合成和表征了4种含有氨基酸残基的聚合物.通过1H-NMR、FT-IR、水接触角、水吸收率和降解实验对该聚酯酰胺进行了表征.实验结果表明:经氨基酸改性PCL的亲水性和降解性得到了改善,其中含有L-赖氨酸残基的聚酯酰胺因亲水性最高,降解速率最快.     

aFGF特异性结合噬菌体的筛选与鉴定

利用噬菌体7肽库筛选出aFGF特异性结合噬菌体并鉴定其活性.经过四轮淘选,ELISA检测结合活性,然后挑取单克隆测序.竞争抑制试验验证阳性克隆与aFGF的结合活性.MTT法检测阳性噬菌体对aFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖的影响,一系列实验结果显示,筛选出的P8号阳性噬菌体与aFGF结合的特异性很高,对aFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖具有抑制作用.通过本实验,获得了具有与aFGF高度结合的噬菌体短肽,可为抗肿瘤新药提供重要基础.     

生物活性肽的生理作用与应用前景展望

<正>随着我国养殖业水平的提高,传统诱食剂已不能满足畜禽生产的需求,新的诱食剂产品开始出现。新型诱食剂的主要活性成分有:γ-氨基丁酸、活性肽、植物活性成分等。目前,国内外对生物活性肽进行了大量的基础研究,并通过应用研究将多种生物活性肽推向市场,获得了巨大的经济效益。1.生物活性肽的主要生理作用