1株具抑制一氧化氮合成酶活性放线菌菌株的分离和鉴定

 从云南河口采集的土壤中分离到1株稀有放线菌YIM30243^T.该菌株具有很强的抑制一氧化氮(NO)合成酶活性.通过对其进行的包括形态、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16SrDNA序列等方面的多相分类研究,确定其为诺卡氏菌属的1个新种,我们将其命名为白色诺卡氏菌(Nocardiaalba sp.nov.).该菌株在大多数培养基上生长良好,气生菌丝呈黄白色至粉红白色,基内菌丝黄白至黄褐色.气生菌丝、基内菌丝均呈不规则断裂.     

发菜中麦芽寡糖基海藻糖合成酶的抗体制备及鉴定

通过PCR法从发菜总DNA中克隆到编码麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因前645bp的催化位点保守序列的片段,将该基因片段在大肠杆菌中表达,得到符合预期大小的重组蛋白．将该重组蛋白纯化回收用于制备该酶的特异性抗体．检测表明抗体具有较高效价．利用该抗体检测干旱胁迫下发菜藻丝体中该酶的表达量表明干旱胁迫条件下该酶的表达量增加：且与海藻糖积累量呈正相关,可能参与发菜的抗逆性保护作用．     

Conformation-activity studies on the interaction of berberine with acetylcholinesterase:Physical chemistry approach

Berberine has been reported as an acetylcholinesterase (AChE) inhibitor.With significantly low cytotoxicity,berberine will be developed for the clinical treatment of Alzheimer disease (AD) with higher efficacy and fewer side effects.This work investigated the structure change events of AChE that occur during the interaction with berberine by isothermal titration calorimetry (ITC),fluorescence titration,and circular dichroism (CD).The results show that the binding of berberine to AChE is mainly driven by a favorable entropy increase with a less weak affinity.Berberine causes a loss in enzymatic activity at a concentration much below the concentration which gradually exposed the tryptophan residues to a more hydrophilic environment and unfolded the protein,which indicates that the inhibition of AChE with berberine includes the main contributions of interaction and minor conformation change of the protein induced by the alkaloid.     

流动注射化学发光法测定L—色氨酸

在酸性溶液色,高锰酸钾能氧化L－色氨酸产生化学发光反应,甲醛的存在可使化学发光强度增强,据此,采用流动注射技术,建立了一种测定L－色氨酸的化学发光分析法,方法的检出限为3．5×10^-8g/mL,相对标准偏差为1．8％（1．0*10^-6g/mL L-色氨酸,n=11)线性范围为1．0×10^-7--6.0*10^6g/mL。     

色氨酸分子在石墨表面吸附的扫描隧道显微镜研究

用扫描隧道显微镜(STM)研究了室温下色氨酸分子(L-Tryptophane)在石墨(HOPG)表面的吸附行为。实验发现,在室温下色氨酸分子可以在石墨表面形成均匀的吸附层,并形成二维条状结构和二维单斜晶格两种有序结构。针对这2种结构给出了可能的吸附模型。这2种有序结构的形成原因被认为与相邻色氨酸分子侧链之间的π堆积相互作用有关。     

人组氨酰-tRNA合成酶基因的克隆与表达

用RT-PCR方法从人胎盘总RNA中获得编码人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)基因的全序列,选用IMPACT-CN系统中的pTYB11,构建克隆与表达载体,转化大肠杆菌ER2566.经筛选与鉴定,得到3个阳性重组子,对其进行诱导表达获得Jo-1融合蛋白,western-blotting检验结果显示,该融合蛋白具有Jo-1免疫原性和免疫特异性.     

苦参凝集素的色氨酸残基修饰与荧光光谱研究

苦参凝集素（SFL）经等电聚焦测得其等电点为5.56,用比色法测得每分子SFL含有3个色氨酸残基,经N-溴代丁二酰亚胺（NBS）修饰表明其中2个Trp残基位于分子表面,当这2个Trp残基补修饰后,SFL的凝血活性完全丧失,糖保护试验表明,SFL专一性抑制糖Man能够保护SFL,阻断NBS对SFL的修饰作用,说明色氨酸不仅是SFL凝血活性所必需的,而且还参与其糖结合部位的组成,SFL随着NBS的逐渐修饰,其内源荧光光谱亦相应发生变化,结果表明分子表面的2个Trp残基可能位于分子的疏水袋中,而另一个Trp残基则埋藏于分子内部,荧光淬灭研究表明,丙烯酰胺能淬灭87%色氨酸残基的荧光。     

西双版纳地区三叶橡胶树异戊二烯和单萜烯排放机理初步研究

对云南省西双版纳地区三叶橡胶（Hevea brasiliensis（H.B.K）Muell.-Arg）异戊二烯和单萜烯排放的研究发现,三叶橡胶排放很少量的异戊二烯（排放速率大约0～1μgC·g^-1h^-1）,而排放大量的单萜烯（排放速率大约10～100μgC·g^-1h^-1）。造成这种排放特征的原因可能是橡胶树树叶叶绿体中合成异戊二烯所必需的异戊二烯合成酶（Isoprene Synthase）缺乏所致。     

重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶蛋白在改良M9培养基中的诱导表达

以重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶(L-谷氨酸:氨连接酶,Glutamine Synthetase, GS EC 6.3.1.2)蛋白表达宿主菌株BL21(DE3) (pET3C/谷氨酰胺合成酶)作为研究对象,借助SDS PAGE分析方法,对于用乳糖诱导由T7lac启动子控制的重组目的产物蛋白的各种基本参数进行了初步的研究.研究了最佳本底培养基、最佳碳源及其最佳添加比例、碳源与诱导物的最适组合,并探索了适用于改良型培养基的诱导参数.实验结果表明,对于重组目的产物蛋白,改良型M9培养基完全可以替代LB培养基;以甘油为碳源,可以避免葡萄糖对T7lac启动子的屏蔽作用.以乳糖为诱导物,目的蛋白的表达量、可溶性及酶活与以IPTG为诱导物基本接近.研究结果为酶法合成谷氨酰胺的工业化生产提供了一定的参考.     

HPLC快速测定发酵液中L–色氨酸

建立一种测定发酵液中L–色氨酸的高效液相色谱(HPLC)方法.以Agilent C18(5μm,150.mm×4.6.mm)为分离柱,V(0.03%的KH2PO4溶液)﹕V(甲醇)=90﹕10为流动相,流量为1 mL/min,在278.nm处检测L–色氨酸.该方法简便、快速、准确,在0.000～1.000.g/L范围内线性关系良好(R2=0.999 9),平均回收率为98.93%,精密度(RSD)为0.247%,可有效应用于发酵液中L–色氨酸含量的测定.