aroA基因的克隆和优化

除草剂草甘膦 (glyphosate ,N_phosphonomethylglycine )的靶标酶是由aroA基因编码的EPSP (5_烯醇式丙酮酰莽草酸_3_磷酸 ,5_enolpyruvylshikimate_3_phosphate)合成酶。采用先进的基因优化技术 ,以鼠伤寒沙门氏杆菌和大肠杆菌的EPSP合成酶基因为模板 ,通过随机结合 ,交错延伸的PCR扩增过程 ,克服定点突变的局限性 ,使基因获得多位点突变 ,并使之在大肠杆菌中得到表达。对纯化后的表达产物的酶动力学性质的测定结果表明 ,获得了与作为模板的野生型相比 ,具有高得多的酶活力 (降低的Km (PEP) )和大大增强的草甘膦抗性 (升高的Ki(glyphosate) )的突变基因     

毛细管电泳柱端喷壁式安培检测仪的研制

设计了一套喷壁式毛细管电泳安培检测装置.针对传统毛细管电泳安培检测仪中电极和毛细管口不易对准,管温无法恒定,仪器体积庞大,操作自动化程度低等缺点,提出了自对准电化学池系统、水冷温控系统、高压电源系统、自动进样切换系统等新的设计方案,比较好地解决了这些问题.用色氨酸、犬尿氨酸和3-羟犬尿氨酸作为模型化合物对仪器的性能进行测试,结果发现3种化合物的分离效率可达2.09×104、1.01×104和1.06×104,检测限依次为1.29×10-8、3.67×10-8、2.26×10-8mol/L.     

富产海藻糖合成酶菌株的筛选

研究了从土壤中分离获得一种富产海藻糖合成酶菌株的全过程．通过平板初筛和摇瓶产酶转化试验及离子色谱仪(HPAEC)检测，确证该酶能转化聚合度大于3的麦芽寡糖合成海藻糖，转化率约为40％，通过形态、结构特征分析以及16SrDNA基因全序列与参比菌株的基因序列比较，菌株JNU-1与食尼古丁节杆菌16S rDNA序列同源性达95．12％，故将该菌株定名为食尼古丁节杆菌JNU-1(Arthrobacter nicotinovorus JNU-1)．     

用蛋白内源荧光考察溶液pH对PSⅡ两种外周蛋白构象的影响

借助278nm和295nm激发的内源荧光光谱分析，考察不同pH值缓冲液中23kD、17kD蛋白构象变化．结果表明：295nm波长光激发时，23kD蛋白具有326nm荧光发射峰和360nm副峰；17kD蛋白具有328nm荧光发射峰和355nm副峰；278nm波长光激发时，23kD和17kD蛋白的最大荧光发射峰均在306nm处．与中性条件下相比，酸性(pH3．0～4．0)或碱性(pH8．0～9．0)缓冲液中，23kD蛋白和17kD蛋白的内源荧光光谱都发生显著变化：最大荧光峰位置和强度均不相同，340nm-360nm荧光发射副峰的强度增加．反映溶液中两种蛋白的构象易发生改变，离子键和氢键是维系23kD、17kD蛋白构象的重要因素之一。     

不同添加物对L-色氨酸补料分批发酵的影响

以谷氨酸棒杆菌TQ2223(Phe^- Tyr^- 5MT^r SG^r 5FT^r CIN^r)为供试菌株，研究了在L-色氨酸低糖流加发酵过程中分别补加(NH4)2SO4、玉米浆及L-苯丙氨酸、L-酪氨酸对发酵的影响，结果表明：在发酵中期分次添加上述物质可以使色氨酸的产酸率最高达到12．1g／L。     

色氨酸及其肽对cis-syn型1,3-二甲基尿嘧啶二聚体的光敏化裂解作用

通过荧光猝灭实验和测定二聚体裂解程度的辐照实验研究色氨酸(Trp)及其二肽色氨酰酪氨酸(Trp-Tyr)和色氨酰苯丙氨酸(Trp-Phe)对cis-syn型1,3-二甲基尿嘧啶二聚体(DMUD)的光敏化裂解作用.结果表明,色氨酸及其二肽在较强光(λ＞290 nm)辐照下,主要通过双光子电离生成的水合电子(eaq)导致二聚体裂解,其次,通过激发单重态与二聚体间的电子转移导致二聚体裂解Trp-Tyr因其氧化电位(Eox)低,除以上二途径外,另有一导致二聚体裂解的可能途径:色氨酸残基激发三重态与二聚体间的电子转移光敏化二聚体裂解.     

应用地高辛标记的PCR-ELISA技术快速检测转基因水稻

应用地高辛标记的PcR—ELISA(Dig-PcR—ELISA)技术进行转基因水稻检测研究。针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子(p35S)、胭脂碱合成酶(NOS)终止子(Thos)，筛选标记潮霉素磷酸转移酶基因(hpt,hph)、β—葡萄糖苷酸酶基因(gus)、抗草丁膦除草剂基因(bar)，建立Dig—PcR—ELISA检测方法；能进行半定量检测，敏感性试验表明，Dig—ELISA检测比常规电泳检测可提高敏感性达1000倍，可检测含量达0．1％的GM0样品。全过程可在24h内完成。     

酵母海藻糖合成酶基因植物表达载体的构建

以从原核表达载体中酶切得到的tps1基因为模板，设计适当的引物，利用PCR技术，克隆出核苷酸数大约1.5k的片段，PCR产物经回收后，与PCAMBIAI303载体连接并转化大肠杆菌DH5a，阳性重组子经PCR鉴定，结果表明已获得海藻糖磷酸合成酶基因的植物表达载体。     

用蛋白内源荧光法考察盐溶液中两种外周蛋白构象的变化

作者借助由278nm和295nm光源激发的蛋白质内源荧光分析，考察了在几种盐溶液(甲醇和NaCl，NaCl，脲，三氯乙酸，CaCl2)中23kD，17kD蛋白构象的变化。结果表明，由295nm波长的光激发时，17kD蛋白荧光发射峰位于328nm处和360nm附近，这表明大部分17kD蛋白的Trp^71处于分子内部；23kD蛋白具有326nm荧光发射峰，表明23kD蛋白所含2个色氨酸残基(Trp^34和Trp^168)处于其分子内部的疏水部位。CaCl2、脲、NaCl、三氯乙酸、甲醇和NaCl对17kD和23kD外周蛋白的内源荧光都有影响，其中CaCl2、甲醇和NaCl的影响较大，脲、NaCl的影响相对较小，这反映了两种蛋白在溶液中的构象易发生改变。     

甲苯二异氰酸酯致支气管哮喘的机制研究

研究了甲苯二异氰酸酯(TDI)对小鼠肺内嗜酸性粒细胞(EOS)的影响和肺内一氧化氮(NO)及一氧化氮合成酶(NOS)含量的变化,结果显示,TDI可引起肺内EOS的浸润,导致肺内NO水平的升高,诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活性增加,二者呈显著性正相关关系.