四株大肠杆菌质粒的染色体诱动作用初报

从动物粪便中分离到四株大肠埃希氏菌142A、41A、193C、199T所携带的抗药性质粒pTF1、pTF6、pTF7、pTF8。所携带的抗性基因pTF1和pTF6均为人Ap~r、Tc~r、Sm~r;pTF7为Ap~r、Tc~r、Sm~r、Cm~r;pTF8为Tc~r和Sm~r。它们均可以10~(-3)—10~(-5)的转移颖率转移到不同品系的大肠杆菌中去。抽提各质粒的DNA并进行转化实验,然后再进行接触转移实验均获得予期结果。我们将各转移子E.coli K12W1485(pTF1、pTF6、pTF7、pTF8)分别作为供体,再分别与E.coli XACF-△(lacpro)arg-R if~r进行杂交实验以pro、arg为双选择标记;与E.coli62pro~-、his~-、trp~-、Nal~r进行杂交实验以pro、trp作为双选择标记;与E.coliK12W1177leu~-、thr~-、thi~-、Str~r进行杂交实验以leu、thr作为双选择标记结果均获各重组子。实验说明抗药性质粒pTF1、pTF6、pTF7、pTF8均具有诱动其宿主染色体转移的功能。杂交实验能获重组子,原因是供体染色体在质粒诱动作用下能够向受体转移,进而与受体染色体发生重组。有关质粒的作用及转移机制有待于深入研究。     

仔猪断奶前腹泻的防治

症状：仔猪出生后5日以内突然表现厌食、扎堆、排黄色稀粪且内含凝乳块、身上沾满黄色稀粪、迅速脱水、消瘦，最终死亡．因排黄色稀粪故称黄痢。仔猪15～30日龄发病，表现被毛粗乱、体温稍高、食欲不振，排白色粘性粪便，我们称之为白痢。黄痢和白痢均是由肠毒素性大肠杆菌引起的。     

重组胸腺素α1在大肠杆菌中的融合表达及培养条件的优化

采用三角摇瓶来摸索BL21(DE3)/pET28A-Tα1菌种表达目的蛋白的最优发酵条件,并在此基础上在Biotop CF-5L自动控制发酵罐中,利用补料分批培养技术,流加甘油,进行发酵培养;利用Western blotting进行发酵产物鉴定. 摇瓶培养最优条件:10%接种量、25 mL LB培养基、37 ℃培养, 0.02 g/mL的甘油做碳源,接种后4 h加入终浓度为0.75 mmol/L的IPTG,诱导3h后目的蛋白表达量最高. BL21(DE3)/pET28A-Tα1菌种在Biotop CF-5L自动控制发酵罐中的条件为:以10%的接种量接种到3L发酵培养基中,设定溶氧40%,pH7.0,温度37 ℃,通气量3 L/min,快速流加甘油60 g ,培养4 h后,加入终浓度为0.75 mmol/L的IPTG,诱导3 h后终止发酵. 发酵罐中获得的菌体量为36 g/L,蛋白表达率为10%左右.     

摇瓶中重组大肠杆菌生产人γ-干扰素工艺优化

目的优化大肠杆菌生产重组人γ-干扰素摇瓶发酵工艺条件,分析摇瓶发酵过程中的制约因素。方法在摇瓶中研究了种子菌龄、接种量和诱导时机等因素对工程菌生产rhIFN-γ和质粒稳定性的影响,及优化条件下工程菌发酵参数。结果最佳条件:种子液为OD6000.5~1.5,接种量为6%,培养至OD600为1.5时42℃诱导表达4 h。在此条件下,在摇瓶中使用M9II培养基时,质粒无丢失,摇瓶中rhIFN-γ的表达量占菌体总蛋白的43.2%,光密度为3.3。对发酵过程中总糖、还原糖、总氮和pH的分析表明,发酵过程中培养基中碳源、氮源丰富,而溶解氧的不足和pH值偏酸性可能是整个培养过程的限制性因素。结论构建的工程菌发酵的稳定性和重复性良好,为rhIFN-γ的大规模生产提供可靠的放大依据。     

N-端改造植物P450酶实现工程大肠杆菌合成甜菜黄素

甜菜黄素是安全的植物源水溶性天然色素,主要应用于食品行业.甜菜黄素还具有抗氧化活性和光学特性,在医疗保健、荧光成像等领域具有潜在应用价值.目前,甜菜黄素的主要来源是植物提取分离,但存在甜菜黄素含量低、种类少等问题.本文改造植物P450氧化酶,研发大肠杆菌异源合成甜菜黄素的新方法.首先,对甜菜的P450氧化酶CYP76A...     

重组大肠杆菌BL21(pBAI)生产人干扰素α2b

通过培养重组大肠杆菌BL21(pBAI)表达人干扰素α2b(Human Interferon α2b,hIFNα2b).hIFNα2b表达由PL,启动子控制,通过升温至42℃诱导表达.本研究比较了分批培养和多种补料分批培养方式下hIFNα2b的生产,其中通过恒速流加葡萄糖,hIFNα2b的表达量达到6 540 mg/L,平均生产速率和比速率分别为546 mg/(L·h)和27 mg/(g·h).升温前1.5 h补充25 g酵母提取物,并以0.27 g/(g·h)的比速率供应葡萄糖,hIFNα2b的平均生产速率达到1 006 mg/(L·h),比生产速率为54 mg/(g·h),对有机氮源的得率提高到138 mg/g.     

hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定

构建了含有人白细胞介素-hIL-10（Human Interleukin10,hIL-10）基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定．用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b．将重组质粒转入BL21（DE3）感受态细胞,在37℃用IPTG诱导hIL-10表达．表达的重组蛋白经复性纯化后,用夹心ELISA法检测其对外周血单核细胞（PBMC）合成IFN-γ的抑制作用．重组质粒PET-32b／hIL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列和文献报道的hIL-10 cDNA序列一致．SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18000．活性测定结果显示,重组蛋白能显著抑制PBMC合成IFN-γ．这表明构建的PET-32b／hIL-10可以在大肠杆菌中高效表达,经复性和纯化后,获得了具有高纯度和活性的hIL-10     

大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白多价卵黄抗体的制备

对已构建的重组菌株BL21(DE3)(pETXKSL3)进行鉴定,酶切鉴定证实重组质粒pETXKSL3含有K88ac-ST_1-LT_B融合基因且阅读框架正确.Western blot分析表明K88ac-ST_1-LT_B融合蛋白能够被ST_1单抗、K88ac和LT_B抗体识别.以K88ac-ST_1-LT_B融合蛋白为抗原免疫蛋鸡制备卵黄抗体,ELISA法测定卵黄抗体效价可达1∶13 200.仔猪攻毒实验表明制备的卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢的预防有效率为96%,上述研究结果说明K88ac-ST_1-LT_B多价卵黄抗体对由ETEC引起的新生仔猪腹泻具有很好的预防效果,从而为最终开发出一种新型高效、可替代抗生素的防治新生仔猪大肠杆菌性腹泻的特异性卵黄抗体生物防治制剂打下坚实基础.     

红茶菌形态及菌液抑菌作用的研究

对红茶菌形态进行初步研究，采用纸片法测试红茶菌对细菌的(G^ ，G^-)抑制作用．结果表明：它由细菌A，B和酵母菌Y形成共生菌，其菌液对大肠杆菌(E．coli)、枯草芽孢杆菌(B．subtilis)和金黄色葡萄球菌(S．aureus)有明显的生长抑制作用。     

革兰氏染色实验教学探讨

革兰氏染色的结果受许多因素的影响,初做该实验的学生不易掌握。为更好地指导学生得到正确的实验结果,分别对菌龄、涂菌量和乙醇脱色等关键影响因素进行了探索。结果显示大肠杆菌革兰氏染色的最佳菌龄是10~24h,金黄色葡萄球菌是10~14h;两种菌的涂片菌量（厚度）为在直径0.5~1.0cm内涂1~2μL的涂片菌液;脱色时间是浸入酒精溶液中脱色20~30s。