亮氨酸拉链结构蛋白在大肠杆菌重组子中的表达

酵母转录因子GCN4是通过亮氨酸拉链(bZIP)结构结合DNA的蛋白质之一，当GCN4二聚体与DNA结合时，亮氨酸拉链区的2个单体结合为平行的卷曲螺旋结构，而其基区由无规线团结构变为α螺旋．为探讨亮氨酸拉链蛋白与DNA的结合机理，设计了含有GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合DNA的必需氨基酸的折叠片段，并将其克隆到Escherichia coli BL21，讨论了此亮氨酸拉链蛋白的表达条件．在蛋白质的小量表达试验中，重组子Escherichia coli BL21于5mL含有50μg／mL氨节青霉素和34μg／mL氯霉素的LB液体培养基中培养至对数期，加入不同浓度的IPTG，继续培养以诱导蛋白质的表达，在不同的时间(如：诱导前，诱导2，4，6，8h)取样100μL到1．5mL离心管中、离心收集沉淀，将沉淀悬浮于样品缓冲液中，用10％SDS-PAGE检测；在10L含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中进行了大量表达，根据小量表达的试验结果确定了IPTG的浓度和诱导时间．结果表明：含有这种拉链蛋白质的重组子Escherichia coli BL21在37℃下小量培养时，0．1-0．8mmol的IPTG均可在2-10h内诱导该蛋白质表达；而大量培养时，0．2mmol和0．4mmol的IPTG在37℃均不可能诱导表达，只在28℃时才表达；小量培养和大量培养的最佳诱导时间为4-6h，诱导剂IPTG的浓度为0．2mmol，大量表达的温度为28℃而不是37℃．     

快速检验食品中沙门氏菌和O157:H7大肠杆菌

利用沙门氏菌快速检验装置(Oxoid公司出口）和可视免疫沉淀物（VIP）试剂盒（BioControlSystems公司出口）对广西桂林市的七星区某农贸市场的20种食品进行了沙门氏菌和O157：H7大肠杆菌的快速抽样检验，结果发现，其中的11种食品的沙门氏菌呈阳性反应，4种食品的O157：H7大肠杆菌也呈阳性反应，与目前国内普遍使用的传统检验方法相比，该方法具有快速、简便、高效、准确的特点。     

人纤溶酶原kringle5功能区基因在大肠杆菌中的表达

将人纤溶酶原kringle5功能区基因插入融合基因表达载体pET17bBamHⅠ位点,构建成重组质粒pETK23,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下,纤溶酶原kringle5功能区基因在重组转化菌株BL21(DE3,pETK23)中获得高效表达,表达产物以可溶性蛋白形式存在,表达量占菌体总蛋白的528%.     

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在干酪乳杆菌中的分泌表达

以大肠杆菌和乳酸菌穿梭表达型载体pMG36e为基本模型,采用重叠延伸PCR方法拼接相关调控元件构建一种乳酸杆菌组成型分泌表达载体;将编码LTB蛋白的eltb基因片段插入干酪乳杆菌分泌型表达载体中,构建重组质粒pMG36e-UP/L-LTB,电转化于干酪乳杆菌393中,筛选获得重组干酪乳杆菌,应用westernblot方法鉴定LTB表达情况.Western-blot分析显示,约有12 KDa的目的蛋白以分泌形式表达,可被LTB阳性血清识别.表明LTB蛋白在重组干酪孔杆菌获得了表达,并且具有免疫反应活性和佐剂活性,为以LTB为分子佐剂研制乳酸菌黏膜疫苗奠定基础.     

餐厨垃圾酸碱度对黑水虻灭活致病菌效率影响

黑水虻处理是近年发展起来的一种有机垃圾资源化方法,然而不同底物和处理方式下,致病菌的灭活规律存在较大差异,亟待研究和阐释.以沙门氏菌和大肠杆菌O157为模式致病菌,以不同初始pH条件下餐厨垃圾中致病菌的灭活规律为研究对象,分析致病菌灭活的主要因素和强化方法.结果发现,沙门氏菌在1～4 d被灭活,大肠杆菌O157在2～6 d被灭活,环境微生物以及物料酸性条件是致病菌灭活的主要因素.黑水虻是垃圾减量化的主要动力,但并不是致病菌灭活的主要因素.pH 6.0、8.0的条件比pH 5.3、10.0、12.0更具有优势,表现为较快的致病菌灭活速度、较高的黑水虻抗菌肽抑菌活性以及较快的幼虫生长速率.综上,黑水虻能够在减量化餐厨垃圾的同时灭活致病菌,初始pH 6.0～8.0的条件值得应用和推广.     

仔猪下痢的病因及综合防治措施

仔猪下痢是由致病性大肠杆菌引起的急性传染病,在仔猪生产中广泛存在,它不仅给养猪业带来直接经济损失,还间接地影响到病愈猪的生长发育,成为影响养猪业经济效益的重要制约因素。虽然有多种防治仔猪下痢的生物菌苗,如母猪产前接种的k88、k99、987p、混合菌苗,以及仔猪服用的NYIO菌苗等,但由于病因的多样性,加上各养殖户、猪场的防治体系不完善,该病经常发生。现结合临床诊疗经验,就该病的发病原因与综合防治总结如下。     

化学合成的α—降钙素基因相关肽基因在大肠杆菌中的融合表达 …

化学法合成的α－降钙素基因相关肽基因从ｐＸＺ１０１有达质粒转移到ＰＵＣ１８质 测序鉴定后,克隆到ＰＧＥＸ表达载体上,在大肠杆菌Ｃ６００中表达。     

仔猪混合感染致病性白色葡萄球菌和大肠杆菌的诊断及防制初报

经过病原的分离鉴定、致病性试验及病仔猪防治效果的分析,确诊某集约化养猪场仔猪发生以“渗出性皮炎”为主的疾病为致病性白色葡萄球菌和大肠杆菌混合感染,通过采取综合的防制措施后,彻底控制本病的发生和流行。     

大肠杆菌热稳定肠毒素的攻毒最佳模型的确定

用致病性大肠杆菌C83916菌株,通过腹腔注射和经口灌胃两种途径感染小鼠,并且每一种途径分别按照体重给菌和按照分组给菌两种方式,最后确定最佳的给菌方式。结果:经腹腔注射并按照体重给菌可诱导小鼠腹泻,大便培养阳性,半数致死量为9.2×109个细菌/10g体重。最后确定经腹腔并按照体重注射致病性大肠杆菌C83916菌株是引起小鼠腹泻最佳模型。     

大肠杆菌的伏安行为及薯蓣皂甙元对该行为的影响

研究了不同条件下大肠杆菌的伏安行为,该伏安峰电流与大肠杆菌的活性呈正比.通过伏安法所获得的大肠杆菌的增长曲线相似于细胞计数法所获得的结果.这种电化学方法被用于研究天然药物前体薯蓣皂甙元对大肠杆菌的影响,结果显示,该化合物能显著降低培养过程中大肠杆菌的伏安行为,具有良好的抗菌活性,可用作抗菌药.