丙酰辅酶A的体外酶法合成

丙酰辅酶A(丙酰-CoA)是一种重要的代谢中间物,可以用来生产丙烯酸、3-羟基丙酸、β-羟基戊酸和聚酮化合物。将天然的琥珀酰辅酶A合成酶、甲基丙二酰辅酶A变位酶、甲基丙二酰辅酶A脱羧酶在大肠杆菌中克隆并过表达,采用这3种纯化的酶体外催化合成丙酰-CoA,评价了琥珀酸生产丙酰-CoA代谢途径。琥珀酸可经琥珀酰辅酶A合成酶催化生成琥珀酰-CoA,琥珀酰-CoA再由甲基丙二酰辅酶A变位酶催化生成甲基丙二酰-CoA,最后甲基丙二酰-CoA经甲基丙二酰辅酶A脱羧酶催化生成丙酰-CoA。反应产物经高效液相色谱分析,检测到目标产物丙酰-CoA,结果证明了从琥珀酸体外合成丙酰-CoA的代谢途径的可行性。     

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在干酪乳杆菌中的分泌表达

以大肠杆菌和乳酸菌穿梭表达型载体pMG36e为基本模型,采用重叠延伸PCR方法拼接相关调控元件构建一种乳酸杆菌组成型分泌表达载体;将编码LTB蛋白的eltb基因片段插入干酪乳杆菌分泌型表达载体中,构建重组质粒pMG36e-UP/L-LTB,电转化于干酪乳杆菌393中,筛选获得重组干酪乳杆菌,应用westernblot方法鉴定LTB表达情况.Western-blot分析显示,约有12 KDa的目的蛋白以分泌形式表达,可被LTB阳性血清识别.表明LTB蛋白在重组干酪孔杆菌获得了表达,并且具有免疫反应活性和佐剂活性,为以LTB为分子佐剂研制乳酸菌黏膜疫苗奠定基础.     

φ10启动子控制下大肠杆菌中rhNTA表达的乳糖诱导

采用乳糖作为诱导物,对φ启动子控制下重组蛋白rhNTA（a new thrombolytic agent）在大肠杆菌中的表达进行研究,结果为培养12h（诱导6h）后湿菌体重量86．0－100．2g/L、目标蛋白占细胞总蛋白的40％－50％。研究了关键基质组分、乳糖诱导等对表达的作用。结果表明,基础料和补充氮源中酵母膏的比例、诱导时机和乳糖流加方式等对表达量的提高有明显的影响。实验显示,采用乳糖诱导时重组蛋白的可溶性部分占有较大的比例。     

His-猪生长激素融合基因在Bm-N细胞和蚕体内的表达与纯化

用构建的带有His—Tag pgh融合基因的重组杆状病毒Bm—BacPAK6—pgh研究了Bm—BacPAK6—pgh在家蚕细胞(Bm—N)和蚕体内的表达，并对蚕体表达产物进行了纯化．SDS—PAGE电泳分析显示，重组病毒Bin—BacPAK6—pgh在Bin—N细胞、蚕体中得到了融合表达，Western blot分析表明，Bm—N细胞、蚕体中表达的融合蛋白与大肠杆菌表达的猪生长激素具有相同的抗原性．Bm-BacPAK6-pgh在Bin—N细胞内的表达始于24h，而蚕体中的表达始于72h，二者的表达峰分别在96h和120h．经40％饱和度硫酸铵盐析和Ni—NTA Agarose亲和柱二步纯化可获得SDS—PA(正电泳纯的具有抗原性的重组猪生长激素融合蛋白。     

聚乙烯吡啶季铵盐的制备及抗菌性能

以4-乙烯吡啶和丙烯酰胺为原料(摩尔比为1∶2),以DMF与去离子水为混合溶剂(体积比1∶1),以AIBN为引发剂合成P(4-VP-CO-AM),用溴代烷烃将其季铵化,制成季铵盐型抗菌剂,以大肠杆菌为致病菌体,采用琼脂扩散法测试其抗菌性能.接着用化学接枝的方法将季铵盐共聚物接枝到经KH-550改性的载铜硅藻土上制成不溶于水的复合型抗菌剂,测定抗菌性能.实验结果表明:载铜硅藻土改性的季铵盐共聚物的抗菌性能比未改性前略有下降,但却具有了优异的热稳定性能且难溶于水,使用时能避免抗菌剂对水体的二次污染,是一种较为理想的有机-无机复合型抗菌材料.     

希佛碱铜配合物对大肠杆菌代谢抑制的微量热法研究

用LKB—2277微量热议测定了大肠杆菌在不同温度下受到希佛碱药物作用时的生长代谢热谱,计算了生长代谢的各种参数,拟合了多种关系式,从热动力学原理探讨了大肠杆菌在药物作用下生长代谢抑制规律,发现可用细菌生长代谢总时间和停滞期时间表征大肠杆菌的生长代谢和希佛碱铜配合物的抗菌活性.     

硒的热化学研究：Ⅲ硒和箬叶多糖FⅢ对大肠杆菌作用热…

用微量热法研究了Ｎａ２ＳｅＯ３和箬叶多糖ＦⅢ对大肠杆菌作用的产热曲线，得了大肠杆菌在不同条件下的生长速率常数Ｋ等参数。实验结果表明，Ｎａ２ＳｅＯ３在低浓度下对大肠杆菌生长有促进作用，在高浓度时有很强的抑制作用；箬叶多糖ＦⅢ和硒等叶多糖ＦⅢ对大肠杆菌生长代谢无抑制作用、硫酸酯多糖ＦⅢ对大肠杆菌的生长有一定的抑制作用。     

恩诺沙星药物对几株禽源致病性大肠杆菌的药？…

利用畜禽专用氟喹酮类抗菌药－恩诺沙星对禽源致病性大肠杆菌采用试管法和纸片法进行了体外药敏试验。结果表明,不同厂家生产的恩诺沙星药物：百病消,普杀平,恩诺沙星对大肠杆菌Ｏ２的ＭＩＣ分别为０．１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ;ＭＢＣ分别为０．２μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ。对大肠杆菌Ｏ７８的ＭＢＣ均为０。恩诺沙星新配溶液和放置一月后的药液对大肠杆菌Ｏ２的ＭＩＣ为０．２     

Visualization of protein RecR in Escherichia coli by fluorescent labelling

RecR protein, a functional equivalent of Rad52 in eukaryotes, plays a critical role in the RecF pathway of homologous recombination in Escherichia coli. By constructing and expressing the recR-yfp hybrid gene, the distribution of the RecR-YFP fusion protein was visualized in E. coli by fluorescent microscopy. Our results showed that RecR proteins can be localized predominantly in the nucleoid region of E. coli. By measuring the UV resistance of a recR mutant carrying the recR-yfp gene in the plasmid, the expressed RecR-YFP was found to be functional in improving the UV resistance of the recR deficiency strain.     

rhBMP-6的表达和纯化

骨形态发生蛋白(bone　morphogenetic protein，BMP)—6属于转化生长因子(transforming growth fac-tor)—β超基因家族，在骨的形成中具有重要作用，并受雌激素选择性上调．本研究利用RT—PCR从人胎盘组织中扩增BMP—6成熟肽的DNA片段，克隆到pGEx—5x—1中，构建GST—BMP6融合蛋白表达载体pGEx—BMP—6，转化E.coli DH5a．克隆质粒转化的工程菌，经IPTG诱导4h后，高效表达GST—BMP6融合蛋白，在SDS—PAGE上出现一新蛋白带，分子量约为42kD，约占总蛋白的25％，表达产物以包涵体形式存在．菌体超声破碎，经0．3％N—十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解包涵体，离心后的上清液加入0．6％　Triton　x—100整合SKL，然后利用谷胱甘肽Sepharose—4B亲和层析纯化．结合GST—BMP6的介质经洗涤、xa因子酶切得到纯度达95％的rhBMP—6蛋白。