混合稀土常乐对Wistar大鼠肾脏影响的实验研究

研究了长期口服混合稀土常乐对肾脏功能的影响.将120只雌、雄各半的Wistar大鼠平均分为对照组和2、5、20 mg/kg 3个剂量的给药组,连续以灌胃方式给药90 d,第91 d取血清,测试肌酐(碱性苦味酸法测试)、尿素氮(尿素酶电导法测试)、尿酸(终点法测试)和钙(离子选择电极法测试),用SPSS10.0软件对肌酐、尿素氮、尿素、钙的含量和尿素氮/肌酐比值进行one-way ANOVA方差分析.研究结果显示:①尿素含量:雌、雄两性大鼠差异均不显著(P>0.05).②尿素氮含量:雄性大鼠,2 mg/kg组的含量比对照组极显著增多,而20 mg/kg组比对照组极显著降低(P<0.01);雌性大鼠,5 mg/kg和20 mg/kg组均比对照组极显著降低(P<0.01),同时,2 mg/kg组雌性大鼠比雄性大鼠的含量显著降低(P<0.05).③肌酐含量:雌性大鼠和雄性大鼠与对照组相比差异均不显著(P>0.05).④钙含量:雄性大鼠各剂量组均比对照组极显著增多(P<0.01),雌性大鼠2 mg/kg组比对照组含量显著性增多(P<0.05).⑤BUN/CRE比值:雌、雄性大鼠在5 mg/kg和20 mg/kg组均比对照组极显著降低(P<0.01),2 mg/kg组的雌性大鼠比同剂量组的雄性大鼠极显著性降低(P<0.01).     

锯缘青蟹胚胎发育过程中几种水解酶活力的比较研究

测定了锯缘青蟹胚胎发育过程中九个发育期的四种水解酶比活力。结果表明，蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶在青蟹的整个胚胎发育过程中均有活力，１－８期活力低但较稳定，纤维素酶则到胚胎的第八期才表现出活力。临孵化前的第九期，胚胎的掾酶活力有所提高，而其余三种水解酶活力则有显著提高，表现为开口摄食饵料作准备。胚胎水解酶活力的高低可作为幼体能否培育成功的一项良好指标。     

广谱降解有机磷农药的真菌酶解研究

从农药污染土壤中分离出的一株真菌具有广谱降解有机磷农药的能力.菌体培养物经硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-Sephrose CL6B柱层析纯化广谱有机磷农药水解酶.研究结果表明该酶为胞内酶,主要定位在细胞膜上.酶的最适反应温度为45℃,最适pH7.5,在50℃以下以及在pH6～9.5范围内活性稳定.Hg2 、Fe3 、对氯高汞苯甲酸、碘乙酸和N-乙基马来酰亚胺对该酶有强烈的抑制作用,而Cu2 、巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇、谷光甘肽和去污剂对酶有不同程度的激活作用.该酶不仅可以作用于含P-O键的有机磷农药;而且也能水解含P-S键的有机磷农药.以甲基对硫磷和内吸磷为底物的Km值分别为63μmol/L,256μmol/L;Vmax分别为306μmol·min-1,189 μmol·min-1;Kcat分别为1 102 s-1,610 s-1.     

高效液相色谱法测定磷酸肌酸钠及其有关物质

采用高效液相色谱法测定磷酸肌酸钠及其有关物质的含量,色谱柱为phenomenex Luna HILIC,乙腈-20 mmol·L-1磷酸氢二铵(pH为7.0)(77∶23)为流动相,流速为0.8 mL·min-1,检测波长为210 nm,柱温为35℃.结果表明:磷酸肌酸钠与其有关物质肌酸、肌酐在同一检测条件下能够完全分离,磷酸肌酸钠、肌酸、肌酐分别在0.06².24(r=0.999 9)g·L-1、0.052.24(r=0.999 9)g·L-1、0.05².10(r=0.999 9)g·L-1和0.052.10(r=0.999 9)g·L-1和0.05².04(r=0.999 9)g·L-1范围内浓度与峰面积呈良好线性关系,其平均回收率分别为磷酸肌酸钠97.8%,肌酸100.4%,肌酐96.1%,RSD分别为1.5%、1.3%、0.7%.该方法操作简便,灵敏度高,专属性强,可用于磷酸肌酸钠及其有关物质的测定.     

苦荞类胰蛋白酶水解酶的纯化及部分性质研究

采用缓冲液提取、盐析、凝胶过滤及离子交换层析等方法，从苦荞种子中分离纯化出1种类胰蛋白酶水解酶，经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)测得其分于量为67kD，等电聚焦(IEF)测得等电点为6．3．该酶可以水解胰蛋白酶的底物BApNA，而且其活性不受苦荞胰蛋白酶抑制剂的影响．通过比较，苦荞中的胰蛋白酶水解酶在性质上与报道的甜荞BAPAase极为相似，可能属于同一类蛋白酶．     

gfp融合的甲基对硫磷水解酶基因mph在E. coli中的表达

依照大肠杆菌密码子的偏爱性将来源于Pseudomonas sp. M6的有机磷水解酶基因mph设计合成了新的有机磷水解酶基因,然后将其与GFP融合进行表达,构建一株具有全细胞催化活性的大肠杆菌工程菌.设计优化后所合成的mph-r基因全长927 bp,然后将基因克隆到p ET23a-gfp大肠杆菌表达型质粒上,成功构建了重组表达质粒p ET23a-gfpmph-r,转化大肠杆菌感受态Rosetta blue.经过诱导剂IPTG的低温诱导24 h后,收集细胞,通过SDS-PAGE和Western Blot检测融合蛋白的表达.实验结果显示,融合蛋白的表达量大大提高,且通过酶活分析测定,全细胞酶活达到了11. 2 U/m L.     

日本血吸虫蛋白水解酶对不同宿主血红蛋白降解作用的研究

日本血吸虫对终宿主—哺乳动物的选择性范围较广,但不同哺乳动物对血吸虫的相容性有所不同,本文就日本血吸虫蛋白水解酶(Hbase)对不同哺乳动物和非哺乳动物血红蛋白(HB)的降解作用进行了研究。结果证明,在相同条件下,日本血吸虫Hbase对其适宜终宿主人、牛、羊Hb的降解程度明显高于非适宜终宿主大鼠和非终宿主鸡。提示宿主对血吸虫的相容性与日本血吸虫Hbase对宿主Hb的降解能力有关。     

凝血酶活力影响因素的初步研究

为探讨凝血酶的最佳作用条件，提高其止血效果，以标准凝血酶为原料，在不同温度、pH值、Ca^2 浓度、底物浓度和酶浓度下研究其酶活性的变化。结果显示：凝血酶的最佳作用温度为37℃，最适pH值为7到9，最适Ca^2 浓度为0．01mol／L，纤维蛋白原浓度为0．1％，凝血酶浓度为1u／mL。     

阿特拉津氯水解酶基因的定点诱变和酶活力检测

阿特拉津氯水解酶(AtzA)是一种对除草剂的生物降解和环境净化有重要意义的酶．采用定点诱变方法将假单胞菌ADP株的atzA基因第832位碱基(鸟嘌呤)诱变成腺嘌吟，然后将其插入表达载体pET21b( )，并在大肠杆菌中表达．表达的蛋白特性研究表明：AtzA或AtzA—NK融合蛋白系水溶性蛋白，很容易通过Ni—NTA Magnetic Agarose Beads分离纯化．采用阿特拉津脱氯反应产生HCl而引起pH指示剂颜色改变的测定方法能方便地对其酶活力进行定量．酶活力结果表明，突变酶的比活力与假单胞菌ADP菌株的AtzA相比没有明显改变，暗示突变位点(第278位缬氨酸突变成甲硫氨酸)不是酶的活性中心或底物结合部位。     

铜离子抑制腺苷同型半胱氨酸水解酶的活性

利用 E.coli JM109菌株高效表达和纯化了重组人的 S-腺苷同型半胱氨酸（AdoHcy）水解酶.初步研究了铜离子对AdoHcy水解酶活性的影响.结果表明,Cu2 可以抑制酶的活性,其抑制能力随着Cu2 浓度增加而增大;Cu2 对 AdoHcy水解酶活性抑制是一个时间依赖的过程,其表观速率常数为（1.08±0.15）min-1.自然底物腺普（AdoHcy）的存在可以明显减弱 Cu2 抑制酶活性的能力。研究结果表明,Cu2 可能与酶的自然底物以某种类似方式竞争结合,从而抑制酶的活性.