溶酶体与某些生理及病理现象的关系

溶酶体是一种很重要的细胞器,因它含有约50种酸性水解酶,所以它与许多生理及病理现象有关。本文分别在“溶酶体与老年斑”等7方面的生理现象及“溶酶体与矽肺”等7方面的病理现象进行了报告。     

Rhodococcus rhodochrous tg1-A6腈水解酶催化3-氰基吡啶合成烟酸的研究

利用高产腈水解酶的菌株Rhodococcus rhodochrous tg1-A6催化3-氰基吡啶合成烟酸,实验结果表明,腈水解酶的最适底物浓度为130mmol/L,最适催化温度为55℃,最适pH值为pH7.0.经过15h连续补加底物3-氰基吡啶,反应体系中产物烟酸的浓度可达到165.2g/L.在产物浓度累积不高的情况下,菌体经过7批次(共67h)的催化,烟酸的最终质量浓度累计可达到529g/L.     

支链淀粉水解酶水解支链淀粉的特异氨基酸分析

【目的】通过对具有支链淀粉水解能力的环糊精水解酶的结构进行分析,探寻决定酶与支链淀粉水解相关的关键氨基酸残基。【方法】对底物特异性发生改变的环糊精水解酶cds1-3进行功能鉴定,并利用分子模拟方法对其底物作用特异氨基酸序列和空间结构进行分析。【结果】环糊精水解酶cds1-3具有特殊的底物作用方式,它水解支链淀粉的能力强于水解环糊精。cds1-3和ThMA的蛋白质序列只有30个氨基酸的差异,主要位于远离底物结合区域的蛋白质中段,与环糊精水解酶的底物通道聚集位置相近。【结论】环糊精水解酶cds1-3的功能鉴定及对其关键氨基酸进行序列和空间结构分析,为揭示大分子底物,特别是支链淀粉底物的水解方式提供新的切入点。     

黑曲霉固体培养在滇橄榄果渣中生产水解酶及其应用

本工作的主要目标是利用滇橄榄果机械榨汁后果渣（约50％）作为水解酶类产生茵黑曲霉（Aspergillus niger）生长培养的主要营养原料物,经固态发酵产生单宁酶、果胶酶及蛋白酶的可能性。固态发酵实验研究重点考察了上述3种酶的活性形成的时间过程,培养基选择及其优化参数试验。结果发现在3种酶的产生和培养基还原糖浓度间存在一种相关趋势,即在发酵的初始阶段,当有足量糖供给,测到了最高的酶促活性水平;与此相反,当还原糖几乎被耗尽时,3种酶的产生被完全抑制。固态发酵中单宁酶、果胶酶和蛋白酶活性在培养36h后达到最大值。结果表明,应用固态发酵生产3种酶具有一定优势;大米加滇橄榄果渣的培养基组成是合适有效的选择。该酶曲产品适用于处理滇橄榄果汁澄清,果酒的“去沉淀”。     

大肠杆菌O157中肽聚糖水解酶MpaA的克隆、表达、纯化及晶体学研究

采用分子克隆方法将来源于大肠杆菌O157的mpaA基因构建入pET-21b(+)表达载体.诱导MpaA蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中高效表达,通过Ni亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析三步法纯化得到高纯度蛋白.使用气象扩散法进行蛋白质晶体生长的初步筛选与优化,得到MpaA蛋白质单晶,并使用X射线衍射仪进行衍射数据的收集与处理.MpaA晶体分辨率为0.26 nm,属于P31空间群,晶胞参数为a=5.989 3 nm,b=5.989 3 nm,c=12.987 0 nm,β=90.000 °.MpaA晶体衍射数据的收集为后续结构解析和催化机制的阐明提供了基础.     

离子束介导大豆DNA的小麦低蛋白变异株系蛋白水解酶种类和活性分析

为研究离子束介导大豆DNA的小麦变异株系在3叶期的蛋白水解酶的变化,采用复性电泳对筛选出的低蛋白变异株系05-3-1和05-15-1,作不同pH条件下的蛋白水解酶酶谱分析,结果显示:在酸性和中性条件下,与对照相比,变异株系的2102、24 kD两条酶带活性较强,均多检测到183 kD一条新酶带;在碱性条件下,变异株系05-15-1少检测到160 kD的酶带.     

麦芽糖淀粉酶CDS 1-3在淀粉糖化过程中的作用分析

为探究多糖相互作用对淀粉糖化速率的影响，本研究使用较传统麦芽糖淀粉酶更具支链淀粉水解能力的麦芽糖淀粉酶CDS 1-3，将其与α-淀粉酶及糖化酶协同进行淀粉糖化，并对糖化液进行还原糖测定以及高效液相色谱分析。结果表明：反应到30 min时，CDS 1-3作用效果最明显，相比于Control组，CDS 1-3组糖化液的葡萄糖当量(Dextrose Equivalent,DE)值提高了4.51%。随着反应的进行，DE值提高速率降低。反应到60 min时，DE值提高了1.17%；反应到90 min时，DE值提高了2.12%。高效液相色谱结果显示，在整个反应过程中，CDS 1-3组葡萄糖和麦芽糖的产量始终高于Control组，说明CDS 1-3可有效加快木薯淀粉糖化速率，可应用于淀粉工业中。