一种适用于胡杨叶片非变性蛋白质提取的方法

为探索适用于胡杨叶片非变性蛋白质的提取方法,以采自内蒙古额济纳旗天然胡杨林中胡杨成熟叶片为材料,采用咪唑法、Bis-Tris法、Tris-HCl法和新构建的Tris-SSAD法4种非变性蛋白质提取策略,分别用于提取胡杨叶片蛋白质样品;随后进行第一维非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(1~(st)-DE:Native-PAGE)。相比之下,只有Tris-SSAD法获得了清晰、条带数目较多的Native-PAGE图谱,且结合第二维变性凝胶电泳(2~(nd)-DE:SDS-PAGE)可成功分离出较多蛋白质复合体亚基或相互作用蛋白质分子,证明了Tris-SSAD法非变性温和提取特性。研究建立并优化了适用于胡杨叶片的非变性蛋白质提取方法,为后续进一步分析蛋白质与蛋白质相互作用及蛋白质复合体功能提供了实验基础。     

胰岛素信号通路PI3K／Akt对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA水平的影晌

目的通过胰岛素和磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）抑制剂渥曼青霉素（wortmannin）对P13K／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（P13K／Akt）信号通路的激活和抑制作用,观察P13K／Akt信号通路对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACEl）mRNA水平表达的影响。方法20只sD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、胰岛素组和渥曼青霉素组,海马立体定向注射胰岛素和P13K抑制剂渥曼青霉素。逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测P13K／Akt信号传导下游蛋白Akt以及BACEImRNA水平。结果注射胰岛素的海马P13K信号通路下游信号分子：AktmRNA表达上调（分别较空白和阴性对照组P=0．047,P=0．002）,而BACElmRNA表达下调（分别较空白和阴性对照组P=0．004,P=0．01）。渥曼青霉素组的P13K下游信号分子AktmRNA表达明显被抑制（分别较空白和阴性对照组P=0．002,P=0．039）,同时BACEImRNA的表达较对照组上调（分别较空白和阴性对照组P=0．039,P=0．018）。结论胰岛素信号通路P13K／AM可以调节BACEl的转录水平参与阿尔茨海默病的发病机制。     

外源性H2S通过调节β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达对PC12细胞APP／Aβ代谢的影响

目的观察外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）的调节作用,进而探讨其对淀粉样前体蛋白／β-位淀粉样蛋白代谢途径的影响。方法用硫氢化钠作外源性H2s供体,实验设空白对照组、NaHs50μmol／L组、NaHS100μmol／L组和NariS200μmol／L组,按分组浓度处理PC12细胞24h后,RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1 mRNA及蛋白表达,并用Western blot法继而检测APP代谢过程中关键蛋白APP、C99、C83表达变化,EusA法检测细胞培养液中AB40和AB42水平。结果NaHS在实验浓度范围内从基因与蛋白两个水平上呈剂量依赖性下调BACE1表达,并下调C99、Ap40和Ap42蛋白表达,上调C83蛋白,各NaHS组分别与对照组比较,差别均有统计学意义（P〈0．05）,而对APP蛋白表达没有影响,各组间比较差别无显著性（P〉0．05）。结论外源性H2s具有通过调节PC12细胞BACE1表达下调APP／Aβ代谢的作用。     

不同浓度掺镁透钙磷石骨水泥修复骨质疏松家兔骨缺损及BMP-2表达的研究

健康家兔36只,进行骨质疏松造模后随机分为空白对照组、透钙磷石组(DCPD组)、掺镁6.67%组、掺镁26.67%透钙磷石组,在家兔双侧前腿桡骨中段制作骨缺损,术后每组动物分别于4、8、12周各处死3只,观察组织切片中BMP-2表达情况与X线片显示骨缺损修复状况。免疫组化结果显示同组不同时期比较,4周时BMP-2表达最高,8周时较4周时减弱,12周时阳性表达最弱。同一时期组间比较掺镁6.67%组阳性表达最强。在骨质疏松家兔桡骨骨缺损修复中,掺镁6.67%透钙磷石组成骨效果较其他组显著,同时期组间比较BMP-2阳性表达最强。     

慈菇中抗真菌蛋白分离纯化初步研究

植物在长期进化过程中,形成了一套天然的防御系统。其中植物抗真菌蛋白(antifungal protein,AFP)是主要成员之一,它对多种植物和人体病原真菌生长有抑制作用。本研究以慈菇(Sagittaria sagittifolia)块茎为材料,运用阳离子交换层析和葡聚糖G50凝胶过滤层析技术,结合活性追踪法,对慈菇中的抗真菌蛋白进行了初步分离纯化。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表明,纯化的抗真菌蛋白并不是单一的组分,至少有3个电泳条带,分子量集中在14.4~20.1 kD之间。纯化的抗真菌蛋白对烟草赤星病菌(Alternari alternata)的菌丝生长具有较明显抑制作用。     

凝胶阻滞试验分析铜绿假单胞菌LexA蛋白与其靶位点的特异性结合

目的：分析铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,PA）的LexA与其靶位点的特异性结合的特性。方法：以PCR法扩增PA的LexA基因,将其克隆于原核表达载体pET-22b（＋）,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,采用镍离子亲合柱层析和Superdex-75凝胶过滤层析分离和纯化目的蛋白,以含推定LexA结合位点的片段CTGTN27ACAG为探针,用凝胶阻滞试验检测LexA蛋白与探针序列结合的能力及特异性。结果：构建了pET22bLexA重组质粒,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25％,获得纯度大于95％的目的蛋白;CTGTN27ACAG能与LexA蛋白发生特异性结合。结论：推定LexA结合位点CTGTN27ACAG能与PA的LexA蛋白特异性结合,可能是LexA蛋白的结合靶位点。     

股指期货背景下对β系数的重新审视

本文首先回顾了风险度量系数β值的理论脉络和传统意义,进而讨论了股指期货的问世给资本市场可能带来的影响以及期指出现后β值在中国股市的实用价值变化,最后,在β值具有时变性的前提下,本文探讨了未来β值测量研究的方向。本文的结论认为期指的问世对资本市场的影响将是全方位的,因此对β系数的视点也需要相应调整,各种动态模型将更广泛地运用到β系数的测量中。     

浅议政府投资建设项目代建制管理模式

文章通过综述目前国内外的最新研究成果,认为骨骼肌纤维类型之间可以实现相互转变,可能与运动神经元的活动、运动神经的化学营养性作用、基因改变以及相关代谢酶活性的选择性增强等因素有关.     

尿素作饮料十点要注意

尿素中含氮,氮元素可以被丰、羊等反刍动物瘤胃中的细菌利用,合成菌体蛋白,菌体蛋白可以被动物消化吸收。因此,在饲喂半、羊等反刍动物时,用啄素代替部分蛋白质饲料,既经济,又实惠：但是在使用时应注意以下十点：     

柑橘衰退病毒柠檬分离物外壳蛋白基因原核表达及多抗血清制备

在云南发现的柑橘衰退病毒柠檬分离物对云南省德宏州的柠檬产业造成较大危害.通过用NdeⅠ和XhoⅠ对柑橘衰退病毒柠檬分离物外壳蛋白基因进行双酶切,定向插入到表达载体pET-28a中,并转化大肠杆菌BL21,经IPTG在28℃下诱导6 h后,SDS-PAGE电泳显示,在25 kDa处有特异表达谱带,回收特异蛋白带作为抗原免疫家兔,制备出特异抗血清.间接ELISA测得效价为1∶3000,并且与CTV具有良好的特异性反应.