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381.
利用噬菌体T7RNA聚合酶在大肠杆菌(E.coli)中引导人… 总被引:1,自引:1,他引:0
我们将人尿激酶原因重组到含T7基因ψ10启动子的质粒中,用异丙基硫代半乳糖苷诱导,在大肠杆菌的BL21菌株中进行表达。经纤维蛋白平板测活法测得表达产物存在于包体中。经变性和复性处理后,表达量达每升培养液1600IU。用WesternBlot法鉴定表达产物为单一条带。分子量在43kDa左右,略低于天然54kDapro-UK这可能与E.coli中缺乏糖基化酶有关。 相似文献
382.
目的 检测肿瘤组织中 p5 3基因的突变率 ,探索其在肿瘤发展过程中的作用 .建立PCR SSCP检测 p5 3突变的常规方法 .方法 检测 32例癌组织和癌旁组织 .用盐沉淀制备样品DNA ,以p5 3基因exon7设计引物 ,用PCR SSCP结合银染色显示结果 .结果 32例肿瘤标本检出阳性 9例 ,阳性率 2 8.1% .4例癌组织和癌旁组织均为阳性 .其中 2 2例胃癌 ,检出 4例阳性 (占 18.2 % ) ,双阳性者 2例 .结论 p5 3基因突变在肿瘤中具有普遍性 ,癌组织和癌旁组织双阳性者 ,与肿瘤的扩散有关 .该检测方法简便易行 ,有助于对 p5 3基因突变的扫描检测 . 相似文献
383.
报道BMP-3及BMP-5在不同组织细胞中的表达.将人的神经母细胞瘤SK细胞的总RNA及人的脑、肝、胸腺、脾、胎盘及睾丸的总RNA反转录成cDNA作为模板,利用设计的编码BMP-3和BMP-5成熟蛋白的专一性引物分别扩增出相应的片段.PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果表明,BMP-3及BMP-5在不同组织细胞中表达类型不同. 相似文献
384.
以大白菜3411-7自交系为材料,使用PE公司生产的Thermal Cycler480型PCR仪,对影响大白菜RAPD扩增的因素进行了研究,确定了模板,Mg^2 ,dNTPs,引物和Taq DNA聚合酶的适宜浓度和最佳的循环次数。实验结果表明,在25μL反应体系中使用20-60mg的模板DNA,1.5-2.0mmol/L的Mg^2 ,0.15-0.25mmol/L dNTPs,0.8-1.0μmol/L随机引物,1.0-1.5U Taq DNA聚合酶,在94℃下预变性5min后执行94℃ 1min,37℃ 1min,72℃ 2min,35个循环,最后72℃再延伸5min的条件下,大白菜的RAPD扩增效果较好。 相似文献
385.
刘世明 《青海师范大学学报(自然科学版)》2005,(4):92-94
目的探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失多态性在高原汉族人群中的频率分布以及高原汉族人群和平原汉族人群的ACE多态性频率的比较.方法用聚合酶链式反应(PCR)法对高原地区汉族人群进行ACEI/D基因型的分析.结果高原地区汉族的ACE基因型频率分布是,Ⅱ型0.467、ID型0.40、DD型0.134,与平原汉族比较基因型频率无显著差异.结论高原汉族人群和平原汉族人群在ACE基因多态性的频率分布无明显的地区差异,与国外其它种族差异显著. 相似文献
386.
387.
滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX cDNA的克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法获得SYT-SSX的cDNA,克隆入PUCm-T载体后,在美国ABI DNA自动测序仪上以反向引物测序法进行核苷酸序列的测定,扩增出98bp的特异性片段,并筛选出阳性重组克隆质粒PUCm-SYT-SSX。获得的滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX的cDNA,为深入揭示滑膜肉瘤分子发生机理奠定基础,同时可进一步完成原核表达。 相似文献
388.
易自燃煤层煤巷自燃防治技术试验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以晓南矿707综采面实际情况,分析了易自燃煤层煤巷(高顶、高冒处及巷间煤柱)自燃产生的原因和特点,介绍了对煤巷高顶处,采用调风、导风等技术措施防止自燃的发生和蔓延,对巷道间煤柱则采取包帮、充填、压注凝胶等技术措施延缓和阻止了煤柱的自然,为矿井的安全生产,提供了易自燃厚煤层防治煤巷自燃技术措施。 相似文献
389.
从健康人外周血分离单核细胞,经LPS刺激后提取总RNA,用RT—PCR扩增hIFN-γ的cD—NA。将扩增产物克隆后进行序列分析证明,克隆的hIFN-γcDNA除存在2个序列多态性位点外,与天然的干扰素氨基酸序列完全一致。利用温控表达系统在大肠杆菌中实现了hIFN-γ的高效表达,表达的目的蛋白可占茵体总蛋白的55%。用5L和50L发酵罐放量生产的产物,经高效疏水色谱HPHIC直接复性和纯化得到了重组hIFN-γ纯品,其比活性与天然蛋白相近. 相似文献
390.
多种因素均能影响PCR反应的顺利进行,尤其是菌体中的各种杂蛋白以及在模板提取过程中混入的各种化学试剂,对TaqDNA聚合酶均有很强的抑制作用,本文以扩增细菌的16SrDNA为例,说明了这些成分对PCR的抑制,同时提出了克服不利因素的方法。 相似文献