PCR扩增HBV x基因特征序列检测乙肝病毒DNA

提出了通过扩增特征序列检测乙肝病毒DNA的新方法．根据乙肝病毒DNA保守区的特点,利用Primer Premier 5.0设计出乙肝病毒x基因的特异性引物,并在以血清DNA为模板的聚合酶链反应体系中进行扩增,由此检测待测血清中是否存在乙肝病毒DNA．实验结果表明,该方法较传统的酶联免疫法灵敏,可以检测出酶联免疫法所检测不到的乙肝病毒,具有与免疫印迹一样的准确度;通过与以乙肝病毒s基因为靶序列的PCR反应体系比较,发现乙肝病毒x基因比s基因在序列上更为保守,更适合做乙肝病毒DNA检测的特征序列．     

马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因5′上游调控区的分离和序列分析

利用单一特异引物聚合酶链反应技术，将马铃薯ＤＮＡ中天冬氨酸蛋白酶抑制剂家族一成员的５′上游区分离，并克隆进ｐＵＣ１８质粒ＳｍａＩ位点中．用３２Ｐ中标记的单一特异引物──ＰｒｉｍｅｒＡ为探针，经斑点杂交得一阳性克隆．ＤＮＡ测序获得含有马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因５′上游区的插入物的核苷酸序列．从这序列结构中见到ＴＡ富含区，并发现典型的调控序列ＴＡＴＡ和ＣＡＡＴ．此上游序列与国外所得到的天冬氨酸蛋白酶抑制剂的上游区相比较在序列和ＴＡＴＡ及ＣＡＡＴ盒的位置上有着很大的不同．     

聚合酶链反应诊断男性淋菌性尿道炎

用淋球菌聚合酶链反应诊断男性淋菌性尿道炎，６１例患者中９例作分泌物培养和ＰＣＲ，培养阳性２例，ＰＣＲ阳性５例；５２例先取尿道拭子作培养，后取始段晨尿作ＰＣＲ，培养阳性１例，ＰＣＲ阳性１８例．培养总阳性率４．９２％，ＰＣＲ总阳性率３７．８％，两者有显著性差异．笔者认为晨尿淋菌ＰＣＲ可作为一种敏感方法用于本病的诊断．     

中国首次成功克隆流感病毒复制基因

哈尔滨医科大学对流感病毒体内具有复制功能的蛋白质RNA聚合酶基因的克隆，日前在哈尔滨获得成功。     

桑树萎缩病类菌原体的PCR检测

通过聚合酶链反式反应，用多对引物探讨了桑萎缩病类菌原体的分子检测。     

肌动蛋白与染色体改构复合物BAF和转录因子NF1/CTF之间的联系

肌动蛋白(actin)是一种高度保守的蛋白质,存在于所有真核细胞中,参与细胞分裂、运动、迁移、形态的维持、生长等多种重要生理活动.染色体改构复合物BAF和转录因子NF1/CTF是基因转录活动中的两个重要的因子,参与了基因的转录活动.通过免疫电镜和免疫共沉淀实验,证实了肌动蛋白是染色体改构复合物BAF的组成部分,和转录因子NF1/CTF参加了由RNA聚合酶II介导的基因转录活动.     

信息放大显型技术—应用与前景

信息放大显型(Message Amplification phenotyping:MAP-Ping)是在 PCR(polymerase Chain Reaction)基础上发展起来的分析微量细胞中 mRNA 表型的新技术。此法灵敏快速、简便省时,已广泛用于生物、医学研究和癌症及代谢性疾病的诊断。是具有广阔应用前景的新技术。本文对其基本原理技术要点,应用现状和前景作了介绍。     

模板甲基化水平对鼠肝RNA聚合酶体外转录活性…

利用＾３Ｈ－ＵＴＰ同位素参入法，研究了大鼠肝细胞ＲＮＡ聚合酶在核内外的转录活性。结果表明：在细胞核内的转录活性明显低于在无核抽提物中的转录活性。利用自身的ＤＮ模板，优于利用外加的ＤＮＡ模板。并比较了没ＤＮＡ甲基化水平的模板对ＲＮＡ聚合酶体外转录活性的影响。发现模板的甲基化水平与其体外转录水平呈反相关。     

聚合酶链反应检测脐血及乳汁中乙型肝炎病毒DNA

应用聚合酶链反应(PCR)技术对乙肝病毒(HBV)血清学指标一项或多项阳性的产妇检测其脐血及乳汁中乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV—DNA)。31名产妇共采集脐血标本20份,乳汁标本31份,有脐血标本者同时有乳汁标本,另11人仅有乳汁标本。检测结果:脐血中HBV—DNA阳性8例,阳性率40％;乳汁标本中HBV—DNA阳性11例,阳性率35.5％;脐血、乳汁双阳性4例,占20％。其中抗原阳性组检出率脐血46.5％,乳汁26.66％。结论:乙肝病毒可以垂直传播,也可通过乳汁传播;抗原阳性者传染性强于抗体阳性者;任何一项HBV血清学指标阳性均可能在脐血及乳汁中检出HBV—DNA。     

Klenow大片段聚合酶及T4DNA聚合酶在构建重组质粒中的应用

利用大肠杆菌Klenow大片段聚合酶5＇→3＇聚合酶活性和T4DNA聚合酶3＇→5＇外切酶特性构建植物高效表达载体pBLT35Svp4-ST.用pUC18-435S中的T35S启动子取代植物表达载体pBLG-VP4-ST中的双35S启动子,通过Klenow大片段的聚合酶活性对植物表达载体pBLG-VP4-ST中的HindⅢ3＇凹端补平,再利用T4DNA聚合酶外切酶活性将质粒pUC18-435S的四倍35S启动子即T35S中的SacⅠ3＇凸端削平.在T4DNA连接酶作用下将一端为平端,另一端为BamHⅠ的粘性末端的四倍35S启动子定向连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中取代原有的双35S启动子,转化并筛选阳性克隆.结果经PCR和酶切鉴定证实,四倍35S启动子成功连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中.