多聚酶链式反应应用于带入Ⅸ因子cDNA的转基因小鼠的初筛

在转基因小鼠的制备中,对于所导入外源DNA的检测一般采用DNA-DNA分子杂交法.由于它具有敏感性和可靠性高等优点,故它在转基因小鼠的研究中是不可少的.然而,这种方法在实际应用中也有一些缺点,如操作复杂、工作量大、实验周期长、DNA样品量大以及放射性同位素来源的时间限制等,这些都给转基因小鼠的制备带来了一定的困难.我们在人凝血IX因子(Clotting factor IX)转基因小鼠的制备中,将多聚酶链式反应(Polymerase chainreaction,PCR)技术应用于转基因小鼠的初筛,并与Southern杂交结果进行了比较.结果表明这种方法是可行的,其最大的优点是提高了效率,缩短了实验周期.     

T7启动子促发下的人尿激酶原在大肠杆菌中的高效表达

将人工全化学合成的尿激酶原（ｐｒｏ－ｕｒｏｋｉｎａｓｅ）ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＥＴ３ｄ中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ＬｙｓＳ，经ＩＰＴＧ诱导，获得了占菌体总蛋白１８％的高表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定，表达产物主要为单链尿激酶，并且在菌体内基本以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性，从ＩＬ培养基中可获得３０００００单位的活性尿激酶原。     

真核细胞转录的分子机理——2006年诺贝尔化学奖述评

2006年度诺贝尔化学奖授予了美国斯坦福大学医学院的结构生物学教授科恩伯格,表彰他在研究真核细胞转录分子机理方面的贡献.科恩伯格在真核细胞转录调节控制分子机制方面的研究中取得了突破性进展.他将现代生物化学技术和结构测定结合起来,在原子水平重建酵母RNA聚合酶以及一系列和模板DNA、产物mRNA、底物核酸、调节蛋白功能有关的复合物,从而使真核细胞转录的机理得到全面、深刻而清晰的阐述.     

不明原因的病毒性脑炎PBMCs BDV p24 基因片段检测

目的:检测不明原因病毒性脑炎(VE)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中博尔纳病病毒(Boma Disease Virus,BDV)p24基因,探讨BDV感染的病毒性脑炎患者临床特征.方法:用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应(FQ-n RT-PCR)方法检测病毒性脑炎患者及正常体检者PBMCs中BDV p24基因片段,同时用β-肌动蛋白(β-actin)作为内参照,总结出临床特征.结果:52例病毒性脑炎PBMCs标本BDV p24基因片段FQ-nRT-PCR检出率13.46%(7/52),拷贝数＞102kb/μl.对照组30例正常体检者均为阴性(0%,0/30),经比较两者间阳性率差异有显著性(P＜0.05).BDV p24阳性脑炎患者主要以精神行为异常为临床特征.结论:贵州省遵义市部分病毒性脑炎的发生与BDV感染有关,主要以精神行为异常为临床特征.     

纳米银颗粒增强聚合酶链式反应长片段DNA反复扩增的特异性

基因操作者经常需要把数量稀少的DNA样品进行反复扩增以供进一步研究之用.在反复扩增过程中,上一次扩增产物当作下一次扩增的模板使用.对于较短的DNA片段(几百个碱基),一般反复扩增不会遇到特别的困难;但是较长DNA片段(几千到几万个碱基)的反复扩增一般会极大地降低聚合酶链式反应(PCR)的特异性.实验中发现,当扩增较长片段基因时,在常规PCR热循环体系中添加粒径平均为70 nm的银颗粒,使反应体系纳米银颗粒浓度达到0.1～1.2μg/μL,可以在一定程度上保持PCR反复扩增反应的特异性.其机理之一可能是常规PCR反应体系在添加了纳米银颗粒后改善了溶液的导热性能.     

实时定量聚合酶链反应的研究及应用(综述)

实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RQ-PCR）是综合PCR、分子杂交和酶动力学的一种新技术，它根据荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy translation,FRET）的原理进行。目前已经成功地开发出TayManTM、molecular beacon probe、amplifluor technologies、LightCycler和single-labeled probe几种相关的技术，并广泛地应用于病毒学、遗传性疾病和肿瘤等方面的诊断检测。实验研究表明：RQ－RCR作为一种快速、准确的核酸检测方法，在临床及生物学研究方面均具有相当的实用价值。     

应用TD-PCR技术和限制性内切酶技术鉴定猴B病毒

从DNA水平上鉴定猴B病毒,并区别人单纯疱疹病毒(HSV-1);用PCR技术对猴B病毒和HSV-1进行扩增,并用限制性内切酶技术对扩增产物进行酶切,对PCR扩增产物和酶切产物进行电泳;电泳结果显示猴B病毒和HSV-1的PCR扩增产物为128 bp,酶切后,B病毒能产生72 bp和56 bp片段,而HSV-1不能产生酶切产物;该方法能较好地鉴定猴B病毒,同时也将有密切抗原关系的HSV-1区分开来.     

探讨人细小病毒B19与异位妊娠的关系

无菌留取85例异位妊娠妇女和43例妊娠无异常孕妇血清，用聚合酶连反应(PCR)检测的人细小病毒B19DNA，在异位妊娠组中人细小病毒B19DNA有20例阳性，阳性率为23．53％。正常对照组中，人细小病毒B19DNA有2例为阳性，阳性率为4．51％，用x^2检验，x^2＝6．47，P＜0．05，2组有显著性差异。由此总结，人细小病毒B19感染可能是异位妊娠的原因之一。     

亚甲基蓝介导的电化学传感界面PCR鼠伤寒沙门氏菌检测方法

文章研究一种可用于快速检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的方法,通过在聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增体系中加入嵌入式氧化/还原指示剂亚甲基蓝可以实现对扩增产物的电化学检测。文中所提出的基于丝网印刷电极的电化学检测方法可在120 min内完成对鼠伤寒沙门氏菌的检测,线性范围为3×10¹～3×10⁷ CFU/mL,且不受牛奶基质影响。该方法快速、简便、特异性好,有望应用于食源性致病菌现场快速检测。     

卵形鲳鲹神经坏死病毒基因组的分析及其特异性检测引物的筛选

从海南发病的卵形鲳鲹中分离到一株病毒,经测序分析,推测该病毒为神经坏死病毒.提取病鱼脑部、眼部总RNA,并用其反转的cDNA为模板,分段克隆出RNA1和RNA2片段,测序后通过拼接获得其基因组,命名为GPNNV(Golden Pompano Nervous Necrosis Virus).系统进化树分析结果表明,GPNNV属于RGNNV基因型.为了获得GPNNV特异性强、灵敏度高的检测引物,本研究基于GPNNV的RNA2保守区设计了9对检测引物,然后通过普通PCR及实时荧光定量PCR技术,筛选出1对最佳引物,可以检测到病毒含量为10copies·μL-1的样本.采用筛选出的引物,在病鱼组织中进行检测,结果表明该引物可以准确检测出感染病毒性神经坏死病毒的样本,具有较高的实际应用价值.以上结果可为卵形鲳鲹神经坏死病毒病的诊断提供有效的方法,对卵形鲳鲹神经坏死病毒病的预防具有重要意义.