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111.
实时定量聚合酶链反应的研究及应用(综述) 总被引:2,自引:0,他引:2
实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)是综合PCR、分子杂交和酶动力学的一种新技术,它根据荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy translation,FRET)的原理进行。目前已经成功地开发出TayManTM、molecular beacon probe、amplifluor technologies、LightCycler和single-labeled probe几种相关的技术,并广泛地应用于病毒学、遗传性疾病和肿瘤等方面的诊断检测。实验研究表明:RQ-RCR作为一种快速、准确的核酸检测方法,在临床及生物学研究方面均具有相当的实用价值。 相似文献
112.
从DNA水平上鉴定猴B病毒,并区别人单纯疱疹病毒(HSV-1);用PCR技术对猴B病毒和HSV-1进行扩增,并用限制性内切酶技术对扩增产物进行酶切,对PCR扩增产物和酶切产物进行电泳;电泳结果显示猴B病毒和HSV-1的PCR扩增产物为128 bp,酶切后,B病毒能产生72 bp和56 bp片段,而HSV-1不能产生酶切产物;该方法能较好地鉴定猴B病毒,同时也将有密切抗原关系的HSV-1区分开来. 相似文献
113.
探讨人细小病毒B19与异位妊娠的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
无菌留取85例异位妊娠妇女和43例妊娠无异常孕妇血清,用聚合酶连反应(PCR)检测的人细小病毒B19DNA,在异位妊娠组中人细小病毒B19DNA有20例阳性,阳性率为23.53%。正常对照组中,人细小病毒B19DNA有2例为阳性,阳性率为4.51%,用x^2检验,x^2=6.47,P<0.05,2组有显著性差异。由此总结,人细小病毒B19感染可能是异位妊娠的原因之一。 相似文献
114.
文章研究一种可用于快速检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的方法,通过在聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增体系中加入嵌入式氧化/还原指示剂亚甲基蓝可以实现对扩增产物的电化学检测。文中所提出的基于丝网印刷电极的电化学检测方法可在120 min内完成对鼠伤寒沙门氏菌的检测,线性范围为3×101~3×107 CFU/mL,且不受牛奶基质影响。该方法快速、简便、特异性好,有望应用于食源性致病菌现场快速检测。 相似文献
115.
从海南发病的卵形鲳鲹中分离到一株病毒,经测序分析,推测该病毒为神经坏死病毒.提取病鱼脑部、眼部总RNA,并用其反转的cDNA为模板,分段克隆出RNA1和RNA2片段,测序后通过拼接获得其基因组,命名为GPNNV(Golden Pompano Nervous Necrosis Virus).系统进化树分析结果表明,GPNNV属于RGNNV基因型.为了获得GPNNV特异性强、灵敏度高的检测引物,本研究基于GPNNV的RNA2保守区设计了9对检测引物,然后通过普通PCR及实时荧光定量PCR技术,筛选出1对最佳引物,可以检测到病毒含量为10copies·μL-1的样本.采用筛选出的引物,在病鱼组织中进行检测,结果表明该引物可以准确检测出感染病毒性神经坏死病毒的样本,具有较高的实际应用价值.以上结果可为卵形鲳鲹神经坏死病毒病的诊断提供有效的方法,对卵形鲳鲹神经坏死病毒病的预防具有重要意义. 相似文献
116.
117.
118.
目的:通过端粒酶聚合酶链反应—酶联免疫测定(PCR—ELISA)和聚合酶链反应—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR—PAGE)方法检测血液肿瘤细胞株HL—60、K562、Raji的端粒酶活性,探讨其临床应用价值。方法:PCR—ELISA方法是将端粒重复序列PCR变性产物与地高辛标记且对端粒重复片段特异的探针杂交,杂交产物通过ELISA进行测定。PCR—PAGE法是将端粒重复序列PCR产物直接进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,通过硝酸银染色测定端粒酶活性。结果:在端粒酶PCR—ELISA方法检测中,PCR在25-35次循环之间,吸光度A值与循环次数呈线性关系,35-45次循环己达到平台期。PCR—ELISA法检测显示HL—60、K562、Raji细胞均表达高水平的端粒酶活性,吸光度A均值分别为2.362、2.336、2.145。对HL—60、K562、Raji细胞的端粒重复序列扩增的PCR产物直接进行PAGE电泳、银染均呈现3条以上间隔6bP的特征性阶梯状条带。结论:对端粒重复序列PCR产物可同时进行ELISA检测和PAGE—银染,两种方法均可用于恶性肿瘤的临床诊断,ELISA法更为灵敏而简单,且可相对定量。 相似文献
119.
PCR方法(Polymerase China Reaction),即聚合酶链式反应,又称体外基因倍增,它在分子生物学中有着广泛的应用。文中主要讨论了PCR技术在辅助构建跳跃及连锁文库(Jumping andLinking Library),染色体走步(Chromosome Walking),基因修饰(Rene Modification),重组PCR(Recombinant PCR),足迹法(Footprinting),进行克隆(Cloning)和亚克隆(Subcloning)诸方面的应用,同时指出了PCR技术存在的不足,尚有待于改进。 相似文献
120.