GHRP-scu-PA-32K突变体的构建、表达及纯化产物的部分性质研究

在scu-PA-32K的cDNA分子基础上经定点突变,在N端紧接Leu¹之前引入编码GHRP四肽的寡核苷酸序列(GGTCATAGGCCT),构建了GHRP-scu-PA-32K的突变体cDNA。将它克隆到表达载体pCM-βneo中,与pCMβ-dhfr共转染CHO/DHFR-细胞。筛选到的稳定表达株在无血清培养基的表达量为580IU/(106细胞·24h)。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物,SDS-PAGE显示为单一蛋白条带,分子量为33kD,质谱法测定分子量也为33kD。经血纤维蛋白平板法测定比活为150000IU/mg蛋白。对血纤维蛋白的亲和性,突变体为scu-PA-32K的4.5倍。     

重组人生长激素在毕赤酵母中的表达研究

通过单因素分析和正交实验法优化高密度发酵培养基和诱导条件,根据优化结果指导发酵罐发酵.得到改良BSM培养基的最佳配比为甘油30g/L、酵母粉14g/L、K2SO4 13g/L、MgSO4·7H2O 11g/L、CaSO4 0.3g/L、PTM1 4.4mL、0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH＝6.5);得到摇瓶培养最佳诱导条件为种龄24h,诱导时间30h,甲醇浓度2%,pH6.3～6.9.瑞士Bioengineering公司L1523型发酵罐发酵结果显示,细胞光密度(OD600)达到294,rHGH表达量最高达到0.54g/L.     

金雀异黄素对小鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖、迁移和黏附的影响

利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法、细胞划痕实验和细胞黏附实验等研究了金雀异黄素对小鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖、迁移以及与血管内皮细胞黏附的影响;利用免疫荧光实验观察了金雀异黄素对B16BL6细胞中微管和肌动蛋白分布的影响.结果表明,与对照组相比,金雀异黄素可以抑制B16BL6细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞的黏附,影响B16BL6细胞中肌动蛋白的组装,但不影响细胞中微管的组装.这些结果提示,金雀异黄素抑制B16BL6细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞的黏附可能是通过诱导细胞中肌动蛋白的重排来实现的.     

亚种间杂交水稻不同充实度籽粒胚乳细胞和淀粉粒的扫描电镜观察

本文对不同充实度籽粒胚乳细胞和淀粉粒进行了电镜观察。结果表明：饱满粒横断面上胚乳细胞呈辐射状排列，淀粉粒为规则的多面体形状；半饱粒横断面上胚乳细胞辐射排列不明显，两侧细胞数目少且充实不好；秕粒断裂后看不到完整的胚乳细胞，淀粉粒形状不规则，棱角不分明。     

几种栽培灵芝菌丝体生长营养条件之初探

通过三种栽培灵芝品种菌株在不同碳源、氮源及不同种配方的母种培养基上的生长实验 ,筛选出适合其生长的最适碳源、氮源和最佳培养基配方 .试验结果表明 :三种栽培灵芝菌株菌丝体在玉米粉、可溶性淀粉、蔗糖、葡萄糖、乳糖和麦牙糖这几种碳源中 ,以玉米粉为最适碳源 ;在花生饼粉、酵母膏、蛋白胨等几种氮源中 ,以花生饼粉为最适氮源 .并表明在PDA培养基中添加蛋白胨和大量元素对菌丝体生长均有促进作用 ,且其影响效果可以累加 .     

乌苏里蝮消化道5-羟色胺免疫活性细胞的分布与形态学观察

应用5—羟色胺特异性抗血清，对乌苏里蝮(Gloydius ussuriensis)消化道内分泌细胞进行了免疫组织化学定位。结果表明：5—羟色胺(5—HT)免疫活性细胞在乌苏里蝮消化道各段都有分布，其中幽门部5—HT免疫活性细胞分布密度为最高，食管部最低，同时对其分布型的原因、形态和功能相适应的特点进行了讨论。     

外源性H2S通过调节β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达对PC12细胞APP／Aβ代谢的影响

目的观察外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）的调节作用,进而探讨其对淀粉样前体蛋白／β-位淀粉样蛋白代谢途径的影响。方法用硫氢化钠作外源性H2s供体,实验设空白对照组、NaHs50μmol／L组、NaHS100μmol／L组和NariS200μmol／L组,按分组浓度处理PC12细胞24h后,RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1 mRNA及蛋白表达,并用Western blot法继而检测APP代谢过程中关键蛋白APP、C99、C83表达变化,EusA法检测细胞培养液中AB40和AB42水平。结果NaHS在实验浓度范围内从基因与蛋白两个水平上呈剂量依赖性下调BACE1表达,并下调C99、Ap40和Ap42蛋白表达,上调C83蛋白,各NaHS组分别与对照组比较,差别均有统计学意义（P〈0．05）,而对APP蛋白表达没有影响,各组间比较差别无显著性（P〉0．05）。结论外源性H2s具有通过调节PC12细胞BACE1表达下调APP／Aβ代谢的作用。     

银杏细胞悬浮培养及其黄酮类物质生产

探讨了银杏细胞悬浮培养过程中诸多因子对细胞生长率和黄酮类化合物含量的影响，结果表明：液体培养基以N6＋NAA（1.6-1.8) BA0.5为最好；最适接种量为2.5g-3.0g／瓶（鲜重），最适pH值为6.0-6.5，附加MES效果更好；碳源以40％葡萄糖进行细胞培养的30％蔗糖进行黄酮生产较好；细胞生长和生产黄酮的激素、碳源等培养条件不同，激素类以NAA（1.6-1.8) BA0.5进行细胞培养、以GA0.5 KT1.0进行黄酮生产最佳，附加黄酮前体物PLA可提高黄酮产量，放线菌素－D不适合黄酮类药用物质生产。     

一种遗传算法的细胞跨膜信号传递调控模型

分析了跨膜信号传导传导稳态模型以及电生理实验数据局限性，针对生理情况下随机刺激和响应的特点，采用遗传算法优化模型动力学参数，结果与大量实验数据能较好地符合。