珍稀濒危鸟类褐马鸡mtDNA的分子克隆及序列分析

利用改进的SDS裂解、氯仿:异戊醇抽提的方法提 取了褐马鸡肌肉基因组DNA,通过PCR扩增的方法特异性扩增了褐马鸡线粒体(mtDNA)控制区(D-loop)全序列片段,PCR产物经凝胶回收纯化后与载体pGEM-T Easy相连,然后转化感受 态细胞DH-5α,在含X-gal、IPTG的氨苄LB平板上筛选阳性克隆,重组质粒经PCR和琼脂糖 凝胶电泳检测后,对目的片段进行测序.结果表明,经PCR特异性扩增出的褐马鸡线粒体控制区全序列碱基数为1 237 bp,用Blast程序进行检索比较表明此扩增序列与GeneBank中发表的褐马鸡线粒体控制区序列同源性高达99%,且具有鸟类线粒体的标志性序列.     

动物线粒体基因组全序列测定的研究策略

动物线粒体基因组全序列测定是近年来生物学研究中的一个热点。科学技术的发展,对动物线粒体基因组全序列测定的研究策略也产生了深远的影响。在此对几种在动物线粒体基因组全序列测定中常用的几种策略进行了综述,并对其优缺点进行了比较分析。     

格氏束腰蟹(Somanniathelphusa grayi)的线粒体基因组序列测定和基因顺序进化研究

格氏束腰蟹(Somanniathelphusa grayi(Alcock,1909))(=Parathelphusa(Parathelphusa)chongi Wu,1935)是一种分布于中国云南和印度Moung Sal的束腰蟹属淡水蟹物种.本文使用高通量测序技术首次获得了该物种的线粒体基因组近全长序列,测定的线粒体基...     

太行山猕猴种群mtDNA遗传多样性研究

2007年11月～2008年2月,利用非损伤性取样法,在太行山猕猴国家级自然保护区采集到3个地理单元、5个野生种群猕猴个体的粪便样品,并从22份样品中提取到DNA,在此基础上,分析和探讨了野生太行山猕猴种群的遗传多样性状况及种群遗传结构.结果表明:①在341 bp的mtDNA控制区序列中发现11个变异位点,其中转换和颠换的位点分别为9个和2个;②在3个地理单元中,共定义了9种单倍型;③AMOVA分析结果表明,88.02％和11.03％的遗传变异分别发生在各地理单元间和各种群间,而地理单元内的各种群间的遗传变异仅占0.95％,且济源、焦作和新乡3个地理单元间存在着显著的遗传分化(P＜0.01),无共享单倍型;④济源黄楝树种群具有最多的单倍型数(3),最高的单倍型多样性(0.833),最高的核苷酸多样性(0.002 93)和最高的平均核苷酸差异数(1.000).因此,从保护物种基因多样性的角度考虑,建议自然保护区管理部门将该种群列为优先保护单元.     

叶酸修饰pH响应壳聚糖衍生物胶束的制备及性能表征

制备了叶酸（FA）、胆固醇琥珀酸单酯（CHS）共修饰的羟丙基壳聚糖衍生物（CHS-HPCHS-FA）,该衍生物在水中能够自组装形成粒径为200~400nm的胶束。研究了疏水片段CHS的取代度对胶束的临界胶束浓度、粒径、载药及释药性能的影响,分析了胶束pH响应控释药物的机理,结果表明,疏水片段取代度高的产物,其临界胶束浓度较低,形成的胶束粒径较小,载药效率较高。体外溶出结果显示,载药胶束在pH5.5条件下释药速率明显比pH7.4条件下更快,体现了pH响应控释药物的效果。体外细胞毒性实验结果表明,胶束的生物相容性较好,且叶酸修饰的载药胶束可增强肿瘤细胞的摄取,细胞毒性明显增大。     

Sojucktang induces apoptosis via loss of mitochondrial membrane potential and caspase-3 activation in KLE human endometrial cancer cells

Sojucktang （SJT） has long been used for the treatment of endometrial diseases in Korea. However, the mechanisms responsible for the SJT-induced apoptosis in endometrial cancer cells remain unclear. In the present study, SJT was demonstrated to show cytotoxic effect and induce apoptotic cell death via mitochondrial regulation in KLE endometrial cancer cells. Linderae Radix, Glycyrrhizae Radix, Zedoariae Rhizoma, Trogopterorum Faeces and Agelicae Gigantis Radix were found to be the potent constituent herbs of SJT to significantly decrease the viability of KLE cells by a tetra zolium salt （XTT） assay. Apoptotic bodies were observed in SJT-treated KLE cells by 4′-6-diamidino-2-phenylindole （DAPI） and TdT-mediated-dUTP nick-end labeling （TUNEL） assay. SJT also increased sub-G1 DNA contents of the cell cycle undergoing apoptosis in a dose-dependent manner. Furthermore, it was observed that SJT activated caspase-3 and cleaved poly （ADP-ribose） polymerase （PARP）, and decreased mitochondrial membrane potential in a dose-dependent manner. Taken together, this study shows that SJT exerts anti-tumor activity against KLE endometrial cancer cells via mitochondrial dependent apoptosis induction.     

急性运动中骨骼肌线粒体氧化应激机制研究

以SD大鼠3级递增负荷跑台运动为实验模型,分别选取安静态和运动45,90,120,150 min为实验观察点,测定其骨骼肌线粒体活性氧(ROS)生成、脂质过氧化水平(MDA)和UCP-3mRNA及蛋白表达.实验结果表明:运动过程中ROS生成呈先上升后下降的趋势,运动120 min时达到峰值,运动150 min时下降并具有显著性,其中运动45,90,120,150 min时均较安静时显著性升高;线粒体MDA含量总体呈上升趋势,但变化无显著性;运动过程中UCP-3mRNA和蛋白表达水平总体呈上升趋势,其中UCP-3mRNA在运动90,120,150 min时均较安静时呈显著性升高,而蛋白表达水平相对滞后一个时间段,在运动120,150 min时较安静时呈显著性增高.运动中线粒体ROS生成显著增加,但MDA水平无明显变化,这可能是运动中抗氧化能力提高,足以清除线粒体产生的过多ROS所致.运动中UCP-3表达的增加减少了线粒体ROS生成及其引发的氧化损伤.在ROS大量生成的情况下未发现线粒体有明显的脂质过氧化损伤,提示ROS在运动中可能具有重要的生理意义,而不仅仅是造成损伤.     

内蒙古春秋战国时期古绵羊线粒体DNA分析

为了探讨中国绵羊的起源,对内蒙古凉城县小双古城和板城墓地春秋战国时期24个古绵羊进行了DNA分析,分别扩增并测序了线粒体DNA控制区271 bp和细胞色素6基因300 bp序列.系统发育树和中介网络图结果显示,中国内蒙古地区古绵羊存在3个含有不同频率的单倍型类群A(73.9%),B(17.4%)和C(8.7%),细胞色素b基因的分析结果显示这3个母系世系的分化时间远早于动物的驯化时间,这揭示了中国绵羊有3个不同的母系起源.研究还发现中国古绵羊群体与中国现代绵羊群体的遗传距离最近,并且二者之间的遗传结构极为相似,这表明2500年以来中国绵羊的遗传结构就已经趋于稳定,并对现代绵羊的基因贡献起着非常重要的作用.     

Study of the selective effect on cells induced by nanosecond pulsed electric field with the resistor-capacitor circuit model

A resistor-capacitor (RC) circuit model is proposed to study the effect of nanosecond pulsed electric field on cells according to the structure and electrical parameters of cells. After a nanosecond step field has been applied, the variation of voltages across cytomembrane and mitochondria membrane both in normal and in malignant cells are studied with this model. The time for selectively targeting the mitochondria membrane and malignant cell can be evaluated much easily with curves that show the variation of voltage across each membrane with time. Ramp field is the typical field applied in electrobiology. The voltages across each membrane induced by ramp field are analyzed with this model. To selectively target the mitochondria membrane, proper range of ramp slope is needed. It is relatively difficult to decide the range of a slope to selectively affect the malignant cell. Under some conditions, such a range even does not exist.     

基于多重长PCR靶向捕获测序技术的高同源SNP鉴定

为建立一种高同源区段的单核苷酸多态性(SNP)基因分型技术,通过构建本地Blast对SNP所在的200和400 bp区段进行同源性评估,并筛选出高同源区段的SNP。利用第一轮多重长PCR(polymerase chain reaction)捕获329个样本的9个高同源区段SNP所在的长片段,使用纯化后的第一轮PCR产物作为模板进行扩增子建库测序,检测样本共得2 928个SNP位点信息,测序成功率高达98.885 6%。利用Hardy-Weinberg(HWE)法则计算试验研究的9个高同源区段SNP位点的基因频率(p值均大于0.05,符合HWE法则),并与NCBI(national center for biotechnology information)中千人基因组数据库中获取的基因频率相比对,发现二者单碱基基因频率一致(误差限<0.15)。研究表明,利用多重长PCR靶向捕获技术结合二代测序技术为高同源区段的SNP分型提供一个准确、快速、大样本检测方案。