小鼠脑内钙调神经磷酸酶内源底物的研究

钙调神经磷酸酶是哺乳动物脑内含量极丰富的唯一依赖Ca~(2+)及钙调素的磷蛋白磷酸酶.该酶(calcineurin,CaN)在脑外组织如精子细胞、淋巴细胞及肌肉组织中也有分布,但含量远远低于脑.CaN由18kD Ca~(2+)结合的调节亚基和61kD钙调素结合的催化亚基组成.除可与Ca~(2+)结合外,该酶还可与Mn~(2+),Ni~(2+),Co~(2+)等金属离子结合而影响其活性.CaN催化亚基已有至少5种cDNA同型物分别从大鼠、小鼠和人基因库中调出.这些基因型是从分别     

用快速蛋白液相层析（FPLC）法纯化文昌鱼酸性鳞酸酶

从厦门文昌鱼体内提纯了一种酸性磷酸酶，用快速蛋白液相层析法（ＦＰＬＣ）的Ｓｕ－ｐｅｒｏｓｅ１２柱和ＭｏｎｏＳ柱对其进一步纯化，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＦＰＬＣ的Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２柱鉴定为单一纯的酶制剂，它的分子量为５２０００，经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定该酶为二聚体。酶的提纯倍数为６１２．５２。     

几种家鸭血清无机磷含量及碱性磷酸酶同工酶的比较

对金定鸭,北京鸭及其余种大土北鸭血清无机磷含量和碱性磷酸酶同工酶谱的比较研究表明:雌金定鸭、?大土北鸭和雌北京鸭的血清无机磷含量分别为5.264mg/100 ml、4.730mg/100ml、3.305 mg/100ml,家鸭产蛋能力与其血清无机磷含量成正相关;金定鸭和大土北鸭的血清均含有四种碱性磷酸酶同工酶,而北京鸭血清只含有三种,根据大土北鸭的血清碱性磷酸酶同工酶性状部分地继承了金定鸭的遗传特征,推测碱性磷酸酶同工酶也是与家鸭产蛋性能相关的因素。     

金属离子Mn~(2+),Ni~(2+)和钙调神经磷酸酶的相互作用

钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN,EC 3.1.3.16)是目前所知的唯一依赖于钙/钙调素的磷蛋白磷酸酶.CaN全酶分子量为80ku,大亚基A(61 ku)是催化亚基,小亚基B(19ku)是调节亚基并且与钙调素相似.CaN的活性受多种二价金属离子的调节,Mn~(2+),Ni~(2+)就可以强烈激活CaN.由于Mn~(2+),Ni~(2+)与Ca~(2+)在原子半径、电荷等性质上十分相似,因此,研究它们与CaN的相互作用对于揭示CaN的催化调控机理以及生物大分子高级结构方面具有重要意义.本室已经纯化了CaN,并且利用电子顺磁共振(ESR)方法研究了Mn~(2+)与全酶及A,B亚基的结合.本文将AAS(原子吸收光谱)与ESR两种方法结合,进一步研究了Mn~(2+),     

Inhibition of Alkaline Phosphatase from Pearl Oyster Pinctada fucata by o-Phthalaldehyde： Involvement of Lysine and Histidine Residues at the Active Site

Alkaline phosphatase from Pinctada fucata was inactivated by o-phthalaldehyde （OPA）. The inactivation followed pseudo first-order kinetics with a second rate constant of 0.167 （mmol/L）^-1·min^-1 at pH 7.5 and 25℃. A Tsou＇s plot analysis showed that inactivation occurred upon formation of one isoindole group. The OPA-modified enzyme lost the ability to bind with the specific affinity column and the presence of substrates or competitive inhibitors protected the enzyme from inactivation. The results revealed that the OPA-reaction site was at the enzyme substrate binding site. Prior modification of the enzyme by lysine or histidine specific reagent abolished formation of the isoindole derivatives, suggesting that lysine and histidine residues were involved in the OPA-induced inactivation. Taken together, OPA inactivated the alkaline phosphatase from Pinctada fucata by cross-linking lysine and histidine residues at the active site and formed an isoindole group at the substrate binding site of the enzyme.     

钙调神经磷酸酶的Mn^2＋结合位点与调控

钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)是一种依赖于Ca~(2+)/CaM的磷蛋白磷酸酶,由催化亚基A和调节亚基B 1:1组成。其活力     

采用生物统计法优化光合细菌产类胡萝卜素条件的研究

对一株类胡萝卜素含量较高的紫色非硫细菌红杆菌属的7—1菌株采用生物统计学上的正交实验法,分别进行四因子3水平和五因子4水平的正交实验,获得类胡萝卜素产量相对较高的培养条件,以乳酸钠为碳源,谷氨酸钠为氮源,酵母青为生长因子,5mg/L MgSO_4,2mg/L Fe_2(SO_4)_3,1500～2000lx光照度,28—30℃,微好氧培养48h。在此条件下,7—1菌株的类胡萝卜素产量由21.9mg/g_(干菌体)提局到54.7mmg/g_(干菌体)。     

紫色红曲霉的微波诱变及其产红曲色素发酵条件的优化

以紫色红曲霉S1为出发菌株进行微波诱变,筛选出产红曲色素能力最高的突变株紫色红曲霉S1-29,其红曲色素值达3 240 U/g,比出发菌株提高了57%.针对菌株S1-29固态发酵培养产红曲色素的条件进行优化,添加不同的碳源、氮源以及无机盐,研究添加物对产红曲色素能力的影响,并进行正交实验,得到最佳发酵条件:在大米基质中添加葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁和磷酸氢二钾,使其质量分数分别为4%,6%,0.4%和0.3%,32 ℃培养11 d,菌株S1-29红曲色素值达到4 003 U/g,比优化前提高23.55%.     

黄鳝成体性腺组织生殖干细胞的体外培养及鉴定

通过黄鳝成体性腺组织的体外培养,探讨黄鳝成体性腺生殖干细胞体外分离培养与鉴定的方法.分离黄鳝性腺组织进行植块培养,倒置相差显微镜下观察细胞生长状况.利用H.E、油红O染色、碱性磷酸酶(AP)细胞化学染色等方法对培养细胞进行鉴定.黄鳝成体性腺组织原代培养3～5 d,可见组织周围有细胞迁出,并形成生长晕.15 d左右,生长晕直径可达3～3.2 mm,生长晕中的细胞主要包括:成纤维细胞、神经样细胞、类生殖干细胞三种类型.成纤维细胞呈不对称的长梭形,突起短而多,细胞核较浅,核仁明显,有2～3个核仁,是生长晕的主要细胞成分.神经样细胞具有放射丝状细胞突起,油红O染色呈阳性反应.类生殖干细胞呈圆形,单核或多核,核质比大,AP染色呈现出阳性反应.探索了适于黄鳝成体性腺组织体外培养的条件和方法,并对原代培养的细胞进行了初步鉴定,为进一步利用体外培养的黄鳝成体性腺生殖干细胞开展黄鳝性逆转分子机制研究奠定了基础.     

HRP和AP呈现束缚-浸水应激大鼠NTS儿茶酚胺能神经元Fos表达的效果比较

用辣根过氧化物酶(HRP)单酶先后标记Fos和酪氨酸羟化酶(TH),用二氨基联苯胺(DAB)增强剂和DAB分别呈色;以及同时用碱性磷酸酶(AP)和HRP双酶分别标记TH和Fos,再分别用5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)和氯化硝基四氮唑蓝(NBT)对TH和DAB对Fos呈色,比较免疫双标时两种不同酶标记显色方法...