葡萄球菌核酸酶R型N端片段:SNR141的晶体生长及初步晶体学分析

葡萄球菌核酸酶(SNase A,EC3.1.4.7)由149个氨基酸残基组成(分子量16.807ku),不含巯基和二硫键,它水解DNA和RNA的磷酸酯键并释放出3’-磷酸单核苷酸和二核苷酸SNase A最初从金黄色葡萄球菌中得到,随后这个酶的基因被克隆并在若干表达体系中进行表达.它的晶体结构已在高分辨率测得,结构表明它唯一的色氨酸残基(W140)包埋在一个疏水环境中.SNase A一直作为研究酶学、蛋白质热力学稳定性以及肽链折叠动力学的     

应用PCR—SSCP技术从显微切割的人染色体17q11—12探针池批量分离单拷贝片段的研究

将ＤＮＡ单链构象多态（ＳＳＣＰ）检测的原理，应用于“显微切割的人染色体１７ｑ１１—１２探针池”批量分离单拷贝片段，取得了很好效果。从筛选出的７４个次级单拷贝中有效地鉴定出３７个非同源的单拷贝片段。这比传统的仅限于长度比较而确认的非同源单拷贝片段（１２个）多出２５个．其中部分已经ＤＮＡ测序证实。结果提示：采用ＳＳＣＰ技术区分相似分子量单拷贝片段的同源性，可显著地提高从“显微切割探针池”分离和克隆非同源单拷贝片段的效率。本文还将一部分单拷贝片段作为探讨，与人基因组ＤＮＡ的限制性片段作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，结果均只显示单一杂交带，说明单拷贝ＤＮＡ片段的结论是可靠的。     

用dystrophin cDNA1－7的三个亚探针检出四个新的TaqⅠ限制性片段长度多态

报道在ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因内新发现四个ＴａｑⅠ限制性片段长度多态，用ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎｃＤＮＡ１—２ａ检测到的ＴａｑⅠ等位片段是４．０ｋｂ（Ａ１）和３．３ｋｂ（Ａ２），用ＣＤＮＡ２ｂ—３检测到的ＴａｑⅠ等位片段是７．２ｋｂ（Ａ１）和６．８ｋｂ（Ａ２）。用ｃＤＮＡ５ｂ—７检测到两对新的ＴａｑⅠ等位片段，分别是１０．０ｋｂ（Ａ１）和８．４ｋｂ（Ａ２），以及２．５５ｋｂ（Ｃ１）和１．６ｋｂ（Ｃ２）片段。在４５个ＤＭＤ／ＢＭＤ家系的基因检测中，这四对新的等位片段，在部分家系的上下代传递中分别呈孟德尔遗传学分离。它们的实际观察杂合体频率依次是：０．２９，０．０７，０．０４和０．１８，预期杂合体频率是０．２０，０．０６，０．０２和０．２０。这些新的ＴａｑⅠ限制性片段长度多态，已在杜氏肌营养不良症家系的遗传连锁分析及致病基因携带者的诊断中，显示出较高的；临床应用价值。     

纳米银颗粒增强聚合酶链式反应长片段DNA反复扩增的特异性

基因操作者经常需要把数量稀少的DNA样品进行反复扩增以供进一步研究之用.在反复扩增过程中,上一次扩增产物当作下一次扩增的模板使用.对于较短的DNA片段(几百个碱基),一般反复扩增不会遇到特别的困难;但是较长DNA片段(几千到几万个碱基)的反复扩增一般会极大地降低聚合酶链式反应(PCR)的特异性.实验中发现,当扩增较长片段基因时,在常规PCR热循环体系中添加粒径平均为70 nm的银颗粒,使反应体系纳米银颗粒浓度达到0.1～1.2μg/μL,可以在一定程度上保持PCR反复扩增反应的特异性.其机理之一可能是常规PCR反应体系在添加了纳米银颗粒后改善了溶液的导热性能.     

假单孢菌PKE117木素过氧化物酶的酶学性质及基因克隆

对纯化得到的假单孢菌PKE117的胞外木素过氧化物酶的酶学性质进行了初步研究,发现其最适pH为5.0,最适温度为30℃,以藜芦醇为底物,在25℃,pH3.0的琥珀酸钠缓冲液中与底物反应时的Km值为(0.277±0.0008)mmol/L,vmax为(0.049±0.001)mmol.mg-1protein.min-1。根据LiP已知保守序列设计引物,提取质粒,扩增得到一条199bp的DNA片段lip1和一条563bp的DNA片段lip2,序列比对结果显示与已报道的白腐真菌过氧化物酶基因的同源性不是很高。核苷酸翻译后的氨基酸序列比对结果发现,LiP1与Pycnoporus sanguineus的漆酶的同源性达到100%,与Mycobacteriumbovis的木素过氧化物酶的同源性达到80%;LiP2与Arabidopsis thaliana的过氧化物酶同源性达到100%,与Hordeum vulgare的过氧化物酶1同源性为75%。     

大豆启动功能片段的PCR检测

启动子在基因的表达调控中起着关键作用．已克隆到大豆的启动子，并保存于质粒pBI 10l的多克隆住点(HindⅢ和BamHI间)上．根据GenBank中质粒pBI10l、pBI 12l的全序列设计引物，来扩增这一启动功能片段．阴性、阳性对照都得到预期的泳带，但目的启动子带却与阴性带相同，说明质粒中的启动子片段在保存过程中已丢失．     

基于虚实结合的工业机器人实验教学探索与实践

以工程应用为导向,以提升技能为目标,结合工业机器人实验教学的需求,对当前实验教学的现状进行了分析,针对实验教学项目、实验教学模式、实验教学技术等方面进行了探索。提出了“3+3+2”、“虚实结合”、“片段化教学”等实验教学举措,构建了基础操作、技能方法和工程应用模块的工业机器人虚拟仿真实验教学单元,开设了搬运、焊接等实体实验教学项目。实践表明,拓宽了学生的专业视野,培养了学生在工业机器人工程领域的应用以及创新能力。     

极端环境下汽车运行工况的风洞试验对标分析

为比较环境风洞模拟极端环境下汽车运行工况的准确性,设计了实际路试与环境风洞的对标试验,采集了典型高温山区路段汽车的运行数据。通过运动学片段分割以及短行程分析法构造出车辆的行驶工况图。以运动学片段聚类结果所代表的汽车三种运行状态为基础,利用标准化均方误差方法和特征参数值的计算结果对两次试验中汽车行驶工况的关联性与差异性进行具体分析。结果表明：对标试验结果的关联性极强,其细微差异主要体现在第一类运动学片段上,并且频繁的加减速是汽车三种运行状态中对热管理系统升温影响最大的。可见,环境风洞的模拟结果基本上是准确有效的。     

单抗Fab片段与抗癌抗生素C1027偶联物对裸鼠移植人肝癌的治疗作用

抗人肝癌单抗3A5用氯化汞合木瓜蛋白酶消化,经SDS-PAGE、ELISA方法检测证实得到Fab活性片段。单抗3AS及Fab片段与抗癌抗生素C1027偶联,得到3A5-C1027和Fab-C1027偶联物。克隆生成测定对肝癌细胞具有极强的杀伤作用,C1027、3A5-C1027和Fab-C1027的IC50值分别为6.5 x10~(-16)、4.2×10~(-14)M和8.6×10~(-16) M。 Fab-C1027对人咽上皮癌细胞与靶细胞的杀伤活性相比,两者相差32倍,呈选择性杀伤作用。观察C1027、Fab-C1027对移植人肝癌裸鼠的治疗作用,其抑瘤率分别为59％和85％。在可耐受剂量下,C1027对人肝癌有明显的抑制作用,而Fab-C1027显示更强的抑制作用。