腺病毒载体介导的GFP在鸡胚成纤维细胞中的表达及RNA干涉

鸡胚成纤维细胞（CEF）是多种动物及人类病毒的易感细胞;也是研究鸡的基因组功能的理想材料．本试验的目的是研究非复制型腺病毒载体对CEF的转染效率及安全性;并建立在CEF细胞中进行RNAi的技术平台．采用GFP重组非复制型腺病毒载体（Ade-GFP）转染CEF细胞：结果证明0．1．2000 MOI Adv-GFP均可转染CEF细胞并表达GFP;转染后16h开始出现GFP阳性细胞：胞核与胞浆可见明亮的荧光：荧光细胞数量及荧光强度在24～36h达到高峰：以后逐渐衰减;约180h全部消失;转染效率最高为22.3％;形态学观察及流式细胞仪测定结果显示：Adv-GFP转染的CEF细胞未见细胞病变;多数转染组细胞活力不受影响：说明用Adv-GFP携带外源转染CEF细胞是安全可行的;用脂质体转染试剂转染化学合成的GFP-siRNA;成功地干涉了腺病毒载体介导的GFP基因在鸡胚成纤维细胞的表达：干涉效率为85％：证明了鸡胚成纤维细胞中存在RNAi机制：为进一步利用非复制型腺病毒载体递送siRNA在CEF细胞内进行RNAi的研究奠定了基础．     

腺病毒载体介导GFP基因在鸭胚和雏鸭体内的表达

本试验旨在探讨腺病毒在鸭胚和雏鸭体内的感染情况,为腺病毒作为外源基因载体在活体上进行RNA干涉奠定基础．将GFP基因重组腺病毒（Adv-GFP）静脉注射15日龄鸭胚和10日龄雏鸭,在感染后不N时间采集组织器官,制作冰冻切片,荧光显微镜观察GFP基因在鸭胚和雏鸭组织器官中的表达,结果发现,GFP基因在Adv-GFP感染后24-72h能在鸭胚肝脏及心肌细胞中表达,在感染后1-5d,GFP基因可在雏鸭肝脏、脾脏、腔上囊中稳定表达,本试验首次证明腺病毒作为安全的外源载体,可介导外源基因在鸭胚和雏鸭体内的靶器官中持续稳定表达,为在鸭上进行病毒病的基因治疗提供了基础数据．     

禽肺病毒分子结构研究进展

禽肺病毒与同属副黏病毒科的其他病毒在基因组成、排列顺序及分子结构上存在差异,对于转录调控方式、感染细胞中的表达及侵染宿主细胞的作用方式具有特异性．深入探讨APV的分子结构特异性,对于研究它的致病机制和研制其疫苗有着重要意义．     

FGFR2Ⅲc及其突变型腺病毒对小鼠乳腺癌作用的研究

目的:研究FGFR2Ⅲc及其突变型腺病毒对小鼠乳腺癌的作用.方法:确定腺病毒颗粒Ad、AdFGFR2Ⅲc及Ad-FGFR2ⅢcS252W感染4T1细胞的最佳MOI,并通过RT-PCR检测外源目的基因的表达.建立BALB/c小鼠的4T1乳腺癌模型,在此模型上原位注射重组腺病毒颗粒治疗17天,观察其对小鼠肿瘤的作用.结果:...     

禽网状内皮组织增生病毒gp90全长蛋白的原核表达、表达形式鉴定与纯化

该研究将禽网状内皮组织增生病毒gp90基因克隆至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定蛋白表达情况和蛋白表达.结果发现,将gp90基因连接表达载体转化宿主菌后,成功在大肠杆菌以包涵体形式表达.纯化的蛋白纯度超过90%.     

预防感冒也需“全天候”

感冒主要是由感冒病毒感染而引起的。据研究,90％以上的感冒是由病毒引起的,目前已发现可引起感冒的病毒有12种200余型,常见的有流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、合胞病毒、冠状病毒、腺病毒和肠道病毒等。     

禽多杀性巴氏杆菌X-73株ompH基因的克隆和表达

以禽多杀性巴氏杆菌国际标准株X-73基因组DNA为模板,采用PCR扩增得到编码信号肽除外的成熟外膜蛋白H的ompH基因,将ompH基因克隆至pMAL-p2X表达载体中,构建重组表达质粒pMAL-p2X-ompH,转化大肠杆菌BL21,用SDS-PAGE电泳检测IPTG诱导后的表达蛋白.DNA测序结果表明ompH基因片段大小为1 002 bp,与已报道的ompH基因的核苷酸序列完全相同、而SDS-PAGE结果显示表达分子质量约为78 ku,与预期的融合蛋白MBP-OmpH分子质量相符,表明成功构建出原核表达质粒并实现了目的蛋白表达,为进一步开展禽多杀性巴氏杆菌保护抗原的研究奠定基础.     

禽肠球菌病概述

肠球菌常存在于食品、环境中,是关系到公共卫生一种重要微生物.肠球菌可以感染多种动物引起发病.目前,已证实其多种致病因子的存在和作用.随着耐药菌株的不断出现,日益得到人们的关注.同时,有些种的肠球菌是具有益生活性的细菌,所以对其的研究更为深入.本文就肠球菌及其引起的禽类感染特性进行概述.     

不同血清型禽霍乱巴氏杆菌免疫的研究Ⅱ.免疫制剂的制备与检验

在试验研究基础上 ,应用发育鸡胚培养的禽多杀性巴氏杆菌 ,制备相应的灭活免疫原 ,加入油乳剂免疫增强剂 ,制备了相应的免疫制剂。通过对鸡做免疫接种后的感染保护试验 ,初步表明具有较好的免疫保护效果 ,从而为控制禽霍乱的发生与流行 ,提供了一种新型的免疫预防制剂     

携带p53和p21基因腺病毒转移载体的构建

构建携带p53和p21基因的重组腺病毒转移载体以研究p53和p21联合基因治疗效果.将p53cDNA克隆到转移载体pCMV5GFP替代gfp,得到pCMVp53,使其受到CMV启动子的调控;同时将p21基因克隆到pCMVp53,得到重组腺病毒转移载体pCMVp53/p21.得到携带p53和p21基因的重组腺病毒转移载体.