Cloning and expression of ophc2, a new organphosphorus hydrolase gene

The amino acid sequences of N-terminal and internal peptide of OPHC2, purified from Pseudomonas pseudoalcaligenes strain C2-1 in our lab, are determined. The full-length organphosphorus hydrolase gene ophc2 is cloned by PCR using the degenerate primers designed according to the sequences and future inverse PCR. The ophc2 gene is 975 bp long with G C content of 63%, comprising one open reading frame encoding a polypeptide of 324 amino acids with a molecular weight of 36 kD. The nucleotide sequence of ophc2 shows low homologies with those organphosphorus hydrolase genes deposited in GenBank, one of which exhibits the highest homology of 46.4% with ophc2. The organphosphorus hydrolase protein expressed in E. coli bears normal bioactivity.     

茶叶中水胺硫磷、亚胺硫磷、甲基对硫磷和伏杀硫磷农药残留的高效液相色谱法测定

建立了茶叶中4种有机磷农药──水胺硫磷、亚胺硫磷、甲基对硫磷和伏杀硫磷残留的高效液相色谱测定方法.在45℃加温条件下用乙酸乙酯-正己烷(1◇1,by vol.)混合溶剂提取待测目标物、活性炭层析柱净化,用10.0 mL乙酸乙酯-正己烷(6◇1,by vol.)淋洗待测组分,以Eclipse XDB-C8色谱柱、乙腈-水混合液梯度洗脱分离、二极管阵列检测器测定.结果表明,上述4种农药在6.5 min内能很好地分离;样品中添加的待测组分能定量回收,回收率89.0%~108.0%,相对标准偏差为1.89%~5.96%(1.0μg/mL,n=5),检出限分别为:水胺硫磷9.82μg/kg、亚胺硫磷7.88μg/kg、甲基对硫磷2.19μg/kg、伏杀硫磷0.72μg/kg(dm).     

甲基对硫磷诱发大鼠肝细胞内钙浓度升高的初步机制研究

应用激光扫描共聚焦显微镜观察甲基对硫磷(M ETHYLPARATH ION,MP)对正常大鼠肝细胞株(BRL)内游离钙浓度([CA2 ]I)的影响。实验结果表明,在正常生理盐溶液(N-PSS)中,MP能引起细胞内的钙升高,并呈浓度依赖性;在无钙生理盐溶液(0 CA2 -PSS)中,400 PMOL/L MP不显著改变细胞内的钙浓度。用不同的非选择性阳离子通道阻断剂(300ΜMOL/L GD3 ,2 MMOL/L SR2 ,2 MMOL/L N I2 )作用于由MP引起的钙升高时,发现均能有效地抑制钙升高,其中N I2 的抑制效果最为明显。同时MP引起的钙升高的时程远远大于ATP的作用。以上结果显示,MP对BRL细胞胞内的CA2 具有升高作用,此作用可能是MP激活非选择性阳离子通道,并最终导致细胞膜上的其它钙离子通道开放。     

甲基对硫磷分子印迹整体柱的制备及其在固相萃取中的应用

以甲基对硫磷为模板分子,采用原位逐步聚合法制备了具有良好识别性能的分子印迹聚合物(MIP)整体柱,系统考察了甲基对硫磷与其结构类似物在该柱上的选择性分离富集特性.用聚合物整体柱固相萃取了蜂蜜中的甲基对硫磷.结果表明,聚合物整体柱对模板分子产生了印迹效应,对甲基对硫磷有明显的选择性.本文以采用C18色谱柱,以甲醇-水(体积比为85:15)为流动相,流速为1.0mL/min,吸收波长为270nm,可在15分钟实现甲基对硫磷的测定.     

土壤中腈水解酶产生菌的快速筛选

为了从土壤中快速筛选具有腈水解能力的微生物,建立了以苯酚一次氯酸盐比色法(又名Berthelot比色法)检测96孔板反应产物中氨离子浓度为基础的腈水解酶酶活快速分析方法.用该法从土壤样本中筛选获得了9个酶活力较高的菌株.用HPLC方法定量检测9个菌株对对羟基苯甲腈的转化率,证明苯酚-次氯酸盐比色法微孔板分光光度计的测定结果与HPLC结果对应良好,转化率最高为49.9%.经16s rDNA鉴定,菌株分别属于金黄杆菌属、芽胞杆菌属、葡萄球菌属、寡养单胞菌属等.     

羊柴根瘤中ATP酶活性的超微结构定位

作者用透射电镜,观察了羊柴根瘤中宿主的细胞和细菌在发育中ＡＴＰ水解酶的分布及变化。结果表明,ＡＴＰ水解酶活性反应的磷酸铅沉淀粒,分布于宿主细胞壁外表面,质膜,胞间隙,细胞质,细菌周膜和拟菌体等部位,尤其在胞间隙中有大量的ＡＴＰ水解酶并有泡状分泌物。     

免疫金法快速检测食品中的甲基对硫磷

为了建立一种快速、简便的甲基对硫磷残留的检测方法,方便批量样品的初筛,本研究采用了竞争抑制免疫层析原理,研制出了一种甲基对硫磷的免疫金试纸条.结果表明:该试纸条检测限为10 μg/kg、检测时间为7min,与其他有机磷类药物交叉反应小,可用于多种食品样本的检测,且样本检测限为50 μg/kg.结论:该方法操作简便、灵敏度高,可实现对食品样品中甲基对硫磷残留的快速检测.     

哺乳动物中的可溶性环氧化物水解酶*

哺乳动物中的可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)是一种集N-末端磷酸酶活性和C-末端水解酶活性于一体的同型二聚体酶.它对异生物质具有解毒功能,并参与多种生理调控过程,在血压控制和激素调节方面发挥着重要作用.本文从哺乳动物sEH的分子结构、催化机理以及功能等方面做一概述.     

发状念珠藻中麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因的克隆和序列分析

从发状念珠藻(Nostoc flaglliforme)中克隆出麦芽寡糖基海藻糖基水解酶MTHase的基因TreZ,对该基因核苷酸序列测序表明开读框全长1848 bp,编码的蛋白质有615个氨基酸.根据基因序列预测的TreZ氨基酸序列具有MTHase的催化功能保守区.发菜TreZ和TreY与点形念珠藻(Nostoc punctiforme)的TreZ和TreY有很高的同源性.结果初步表明:可以从发状念珠藻中克隆到麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因TreZ,为进一步研究海藻糖代谢在发状念珠藻抗逆机理的工作奠定了理论和实验基础.