铜离子抑制腺苷同型半胱氨酸水解酶的活性

利用 E.coli JM109菌株高效表达和纯化了重组人的 S-腺苷同型半胱氨酸（AdoHcy）水解酶.初步研究了铜离子对AdoHcy水解酶活性的影响.结果表明,Cu2 可以抑制酶的活性,其抑制能力随着Cu2 浓度增加而增大;Cu2 对 AdoHcy水解酶活性抑制是一个时间依赖的过程,其表观速率常数为（1.08±0.15）min-1.自然底物腺普（AdoHcy）的存在可以明显减弱 Cu2 抑制酶活性的能力。研究结果表明,Cu2 可能与酶的自然底物以某种类似方式竞争结合,从而抑制酶的活性.     

酶催化过程的量子-经典力学研究进展

酶催化主要包括底物输运及其与活性位的结合、蛋白质限域环境中的化学反应以及产物释放等复杂的物理和化学过程,其中任一化学和非化学步都有可能决定酶的活性.通过量子/分子力学组合方法(QM/MM)计算和分子动力学模拟(MD),结合伞形采样,可以揭示酶催化过程的微观机理和底物输运的通道机制,分析底物进出口袋过程的热力学和动力学性...     

D-对羟基苯甘氨酸生产菌株的选育方法探讨

利用国际上通用的以底物--对羟基苯海因(HPH)为惟一氮源的培养基从69个土壤样品和3个水样中初步分离出238个菌株,然后利用双层琼脂法和微孔快速筛选法对分离到的菌株和实验室保藏的220多株茵进行反复筛选,最终获得D-海因酶阳性菌株54株.用茚三酮显色法及纸层析法从这54株茵中筛选到2株产N-氨甲酰水解酶的阳性菌株,从而获得了可同时产生D-海因酶(DHase)和D-氨甲酰水解酶(DCase)的菌株.     

蒙脱石KSF对甲基对硫磷的吸附研究

本文主要对蒙脱石KSF对甲基对硫磷的吸附情况进行了研究,研究了pH、离子强度对吸附的影响,甲基对硫磷的吸附符合Freundlich型吸附等温式.     

烤烟叶面微生物5种水解酶的产生、温度稳定性及其在烟叶人工陈化中的应用

研究了烤烟叶面微生物菌株5种水解酶（β 淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、果胶酶和蛋白酶）的诱导产生及其温度稳定性,结果发现培养基中分别添加0.2%的5种水解酶相应的诱导物,对所研究的烤烟叶面微生物菌株5种水解酶的产生均具有诱导作用.5种水解酶在60?℃时均不稳定,易失活;50?℃时,除果胶酶外,其他4种水解酶的温度稳定性较好.在对5种水解酶60?℃保温2?h过程中所取的样品测定酶活时发现,60?℃反应所得的酶活都高于各自酶活测定常规方法中所用温度反应所得的酶活.用烤烟叶面微生物及其产生的5种水解酶组合成6种不同配方,对2个品种的烤烟进行了为期6个月的人工陈化试验,结果是人工陈化2个月后试验样品评吸总分普遍高于对照样品.本研究为进行烤烟人工陈化以缩短烤烟自然陈化周期、改善烟叶内在品质奠定了基础.     

底物诱导和分批补料对巨大芽孢杆菌环氧化物水解酶生物合成的影响

从土壤中筛选得到的巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium)ECU1001所产环氧化物水解酶能高度对映选择性地水解外消旋缩水甘油苯基醚,在摇瓶和5L发酵罐中培养时初始产酶水平分别为11．0U／L和31．0U／L,通过添加底物诱导,可使摇瓶培养中酶量达到61．0U／L,在5L发酵罐中通过补料分批发酵,酶活可进一步提高到95．6U／L。     

淀粉水解酶在食品工业中的应用

淀粉水解酶是指一类能催化水解淀粉酶的总称,不同使用用途及生产目的使用的淀粉水解酶的类别也不相同,本文分别介绍了淀粉水解酶中的α-淀粉酶,β-淀粉酶,异淀粉酶,葡萄糖淀粉酶的作用机理、酶性质以及在食品工业中的应用情况,为生产中淀粉水解酶的应用提供一些参考。     

产M-海因降解酶系菌株的筛选及鉴定

从川西北高原温泉水样中分离得到一株具有M-海因水解酶系统的菌株MR1229,通过形态和生理生化特性研究,以及16S rDNA序列的测定和同源性比较分析,菌株MR1229初步被鉴定为Bacillus licheniformis.研究还表明菌株MR1229还具有与普通地衣芽孢杆菌不一般的生理生化特性:利用甘油产生二羟基丙酮;产糊精结晶;10%的NaCl条件下旺盛生长;12%的NaCl条件下微弱生长;61.5 ℃温度中微弱生长;pH5.0条件下微弱生长.     

绿豆环氧水解酶在硅基介孔材料上的固载及催化性能

从绿豆中提取粗酶并优化,活性测定反应条件,结果表明,在40 ℃、pH=7的条件下,酶反应活性最高。将来源于绿豆的环氧水解酶固载于多种硅基介孔材料上,考察了多种因素对固定化酶活性的影响。研究发现,以大孔径、表面疏水性的材料作为载体,采用共价方法固载酶,可以得到较高的酶固载率,同时固载酶表现出较高的催化反应活性,并且可以循环使用多次。     

绿色木霉纤维二糖水解酶Ⅱ基因的克隆及其在酿酒酵母中的高效表达

采用RT-PCR 的方法从目前最高效的纤维素酶产生菌之一的绿色木霉AS3.3711中克隆得到纤维二糖水解酶Ⅱ（CBHⅡ）的编码基因cbh2。序列测定和分析表明,该编码序列长1416 bp,编码472个氨基酸残基,与已公布的绿色木霉CICC 13038的cbh2仅在第263位存在一个氨基酸残基的差别（Gln替换为Pro）,而与里氏木霉VTT-D-80133的cbh2则完全同源。该序列已经提交GenBank,登录号为 DQ864992。利用信号肽预测软件SignalP 3.0发现该基因自身带有信号肽序列,其最大可能的切割位点在18和19位氨基酸残基之间。将该基因片段接入酿酒酵母高拷贝数整合型表达载体pScIKP中,得到重组表达质粒pScIKP-cbh2。经酶切线性化后电转化酿酒酵母AS2.489菌株,通过G418浓度梯度筛选出高抗转化子。转化子经蛋白电泳分析,发现该基因的信号肽序列能够被酿酒酵母识别,因此重组CBHⅡ成功分泌到了胞外。但可能由于酿酒酵母表达系统的过度糖基化作用,重组CBHⅡ比出发菌绿色木霉的CBHⅡ分子量要高许多,并且可能因为过度糖基化作用位点不同而形成了不同大小分子量的表达产物。转化子经CMC糖化力法测定酶活,发现该重组CBHⅡ酶活性并没有受过度糖基化作用的影响,最高可达7.71 U/mL,比大多数报道的要高。其作用的最适pH值为5.0,最适温度为65 ℃,且具有较好的热稳定性。