绿色木霉CBHⅡ基因的克隆及在酿酒酵母中的表达

采用反转录聚合酶链式反应的方法从绿色木霉中克隆得到纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)的编码基因cbh2.将该基因片段接入酿酒酵母整合型表达载体pScIKP中,得到重组质粒pScIKP-cbh2.电转化酿酒酵母菌株,通过G418浓度梯度筛选出高抗转化子.采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测CBHⅡ蛋白的表达,并采用羧甲基纤维素糖化力法检测重组CBHⅡ的酶活.实验结果表明:该基因大小为1416bp,编码有472个氨基酸残基,并已将序列提交GenBank,登录号为 DQ864992.SDS-PAGE分析发现重组CBHⅡ成功分泌到了胞外,其相对分子质量约为70000.培养液中的酶活最高可达7.71U/mL,其作用的最适pH值为5.0,最适反应温度为65℃,且具有较好的热稳定性.     

多胺锌（Ⅱ）配合物对水解酶的模拟研究

研究了多胺配体二乙三胺（Dien)锌（Ⅱ）配合物作水解酶模型物催化对硝基苯酚醋酸酯（NA）水解的动力学。结果表明,水解速率遵循速率方程dC/dt=(kobs[ZnDien] kOH[OH]＋…)[NA],催化反应受酸碱平稀控制,催化机理与天然酶一致,显示了该研究设计的配体和锌酥中配位环境相似的特点。     

产肌酐水解酶菌株的分离、鉴定及产酶条件研究

研究分离到几株产肌酐水解酶的菌株,对所产酶的特性分析表明,菌株 42 1 表现较高的产酶性能且所产的酶具有高的热稳定性.对菌株42 1产酶发酵条件的研究表明,菌株 42 1 以酵母膏和玉米浆为氮源时表现较高的产酶性能,葡萄糖等容易利用的碳源的存在对酶的产生没有抑制作用.诱导物肌酐、肌酸、肌氨酸、氯化胆碱和尿素可以诱导酶的产生,Mn2+、Co2+对酶的产生有促进作用.     

恶臭假单胞菌PseudomonasJS-01的发酵动力学

利用自动控制发酵设备,首先进行分批发酵实验摸索恶臭假单胞菌PseudomonasJS-01的生长与代谢的基本规律,然后采用补料分批发酵的方法限制生长基质的浓度,测定了一系列（C     

黄精属植物种间蛋白质和蛋白水解酶的分析比较

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术和复性电泳(G-PAGE)技术对五种黄精属植物茎和叶的蛋白谱带和蛋白水解酶谱进行了分析。结果表明:(1)茎和叶的蛋白质和蛋白水解酶种类有很大差异;(2)它们的茎中均含有66.2、54.6、38.5、28、18.6kD蛋白质和肠、55kD的蛋白水解酶;(3)蛋白质和蛋白水解酶可作为黄精属植物的分类依据之一。     

水体及沉积物中碱性磷酸酶的研究进展

阐明了碱性磷酸酶在水体和沉积物生态系统中的作用，重点综述我国海湾和淡水湖泊水体及沉积物中碱性磷酸酶的研究状况。     

卡拉胶固定化Nocardia sp.生产L(+)酒石酸

采用卡拉胶包埋具有环氧琥珀酸水解酶活性的诺卡氏菌菌体用于生产酒石酸。固定化的最适卡拉胶浓度为20 g/L,菌体浓度为200 g/L,交联剂戊二醛浓度为5 g/L,固定化后的酶活回收率可以达到70%。高浓度的环氧琥珀酸对水解反应产生抑制作用,游离细胞的米氏常数(Km)为0.234 m o l/L,抑制常数(KI)为0.22 m o l/L,固定化细胞则分别为0.31 m o l/L和0.21 m o l/L。游离细胞和固定化细胞反应的最适pH分别为8.0和8.5。细胞固定化以后,耐热稳定性增强。30°C 0.2m o l/L的底物浓度下,摇瓶中连续转化25批,L( )酒石酸的转化率接近100%。     

有机磷水解酶的大肠杆菌细胞表面展示

PCR扩增来自黄杆菌ATCC27551的有机磷水解酶基因opd,直接与XcmⅠ酶切去除Ampr基因片段的pZXL-T连接,将opd克隆于锚定单元Lpp-OmpA编码序列下游,转化E.coliBL21(DE3).经抗性筛选、PCR鉴定和测序证实,成功构建了具有全细胞催化效应的大肠杆菌细胞表面展示工程菌.SDS-PAGE结果表明,工程菌能表达产生51 kD的融合蛋白.细胞表面展示的有机磷水解酶具有较高全细胞酶活性,用蛋白酶K消化处理重组菌表面蛋白可使其全细胞酶活降低90%.     

消毒牛奶在家用电冰箱内保存期及其营养成分的变化

作者对消毒鲜牛奶在20—25℃常温和家用电冰箱内0—4℃下保存期及其营养成分的变化进行试验研究,分别测试到存放48h内和6d内奶的酸度、比重、蛋白质,含脂率等营养成分指标的变化情况。结果表明,乙烯复合软包装消毒鲜奶在20—25℃常温下,只能存放24h。从0～48h,酸度由12.1°T增至28.41°T,蛋白质由3.90％下降到2.8％,脂肪由2.83％下降到2.27％,乳糖由4.23％下降到3.90％,比重的变化不大。在24h内细菌总数高24000个/ml。平均为10185个/ml,12h后出现大肠茵群,由平均183个/100ml增加到1362个/100ml。在24h时出现乳凝块,48h时产生气泡和嗅味。在0—4℃电冰箱内存放时,在第4天酸度由17.64°T急骤升到24°T,比重由1.0230升到1.0318。脂肪由2.95％下降到2.48％,蛋白质由3.05％下降到2.50％,乳糖由4.13％下降到3.88％。细菌总数由20800个/ml上升到129000个/ml。大肠菌群数由45个/100ml上升到2500个/100ml以上。从第4天开始,奶中发出酸臭味、出现凝块。在0—4℃家用电冰箱条件下,也只能存放2～3d。奶中嗜冷菌的大量存在是使牛奶变质的主要原因。     

不同小麦品种叶片衰老过程中谷氨酰胺合成酶和蛋白水解酶的活性变化

五个不同的半矮秆小麦品种在叶片自然衰老过程中,蛋白水解酶活性、可溶性蛋白含量、全N含量等方面没有显著差异,而只有谷氨酰胺合成酶(GS)活性过早的提高与秸杆N的残留量和产量有明显的负相关性.