荧光淬灭法研究黑豆凝集素Ⅰ微环境与构象的关系

用KI、CsCl和丙烯酰胺对黑豆（Glycine max var.）凝集素Ⅰ(GMLⅠ)进行内源荧光淬灭研究.天然黑豆凝集素Ⅰ在280 nm波长激发下显示λmax为339 nm的内源荧光发射光谱,表明凝集素荧光生色基团位于相对疏水的环境中;3种淬灭剂对GMLⅠ的荧光淬灭属于动态淬灭机制.GMLⅠ分子的生色基团Trp残基对中性淬灭剂丙烯酰胺的可接近程度为100%,而对阴离子淬灭剂KI的可接近程度为81.6%,对阳离子淬灭剂CsCl的可接近程度为52.8%,表明GMLⅠ中大部分Trp残基位于分子表面或近表面,只有小部分包埋于分子内部的疏水性环境中,并且Trp残基周围所处微环境带正电荷的比例比带负电荷的比例高.     

表达雪花莲外源凝集素基因的油菜转基因植株的获得

利用农杆菌素LBA4404（pCAMBIA3300RG)转化优良甘蓝型油菜恢复系W723的下胚轴节段.pCAM-BIA3300RG含有Rssl启动子引导的雪花莲外源凝集素基因（gna）和CaMV-35S启动子引导的除草剂抗性基因（bar）。经过两轮除草剂（2.5mg/L bialaphos）筛选（两周/轮）,除草剂抗性再生芽被传入生根培养基中生根,对根系旺盛生长的植株中所含gna基因进行PCR分析,PCR分析证实了这些植株确为转基因植株,利用Western印迹法对随机选择的5株含gna基因的转基因植株的分析发现,其中4株表达了gna基因。目前正对这些表达gna基因的转基因植株进行后代遗传分离分析。     

黑木耳凝集素的分离、纯化及抗肿瘤活性研究

黑木耳是常见的食用菌,不仅营养丰富,还具有众多的生物活性。近年来对黑木耳多糖研究较多,对于其他成分研究较少,因此,本文利用(NH_4)_2SO_4沉淀和亲和层析的方法提取到黑木耳凝集素,对其性质和抗肿瘤活性进行了初步探讨。结果表明,黑木耳凝集素耐酸,不耐碱,不具备热稳定性,具有糖特异性;对肺癌(A549)和乳腺癌细胞(MCF-7)都有抑制性。此研究为今后黑木耳凝集素的活性研究提供基础。     

菜豆愈伤组织的诱导效果及其凝集素水平分析

以‘Bean Saint esprit a oeil rouge’‘Bean White rice’‘97-5架豆’为材料,以菜豆组培苗的子叶、茎、叶作为外植体,分别在添加不同浓度激素(2,4-D、6-BA、KT)配比的MS培养基中进行培养,观察其愈伤组织诱导情况,并选取长势较好的愈伤组织进行凝集素水平测定。结果表明:3个菜豆品种的子叶、茎、叶愈伤组织的适宜培养基均为MS+3 mg/L 2,4-D+0. 5 mg/L 6-BA+0. 5 mg/L KT。‘Bean Saint esprit a oeil rouge’的子叶与叶愈伤组织中菜豆凝集素的凝集活力最高,为0. 27 HU。因此,使用‘Bean Saint esprit a oeil rouge’的子叶或叶为外植体,在MS+3 mg/L 2,4-D+0. 5 mg/L 6-BA+0. 5 mg/L KT中进行培养可提取较多的菜豆凝集素,为进一步研究基于菜豆凝集素的生物农药提供了试验基础与数据支持。     

正常人和不育患者精子膜上凝集素受体的数量与部分性质

应用＾１２５Ｉ－ＣＫＬ对正常人和不育患者精子膜上凝集素受体进行研究的结果表明，不育精子膜上凝集素受体的差异，可能是不育的原因之一。     

用酶标凝集素检测胃液中的胃蛋白酶

采用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＡＬＬ，通过夹心酶联法检测各种胃病患者胃液中的胃蛋白酶。结果：胃蛋白酶在正常组（１５例）、胃炎组（２８例）、十二指肠溃疡组（２５例）、胃溃疡组（２５例）及胃癌组（１３例）中的含量无显著性差异。但胃液ｐＨ值≥５的胃蛋白酶含量明显高于ｐＨ值＜４的酶含量。表明胃粘膜屏障的局部缺陷使之对胃蛋白酶抵抗能力下降，可能与消化性溃疡的发生关系更为密切。     

花椰菜(Brassica oleracea var.botrytis L.)凝集素的细胞凝集和糖抑制作用的研究

花椰莱(Brassica oleracea var. botrytis L.)凝集素能凝集兔、大鼠和小鼠的红细胞,其中对兔的红细胞的凝集活性最高,最低凝集浓度为0.68μg/ml。但不凝集我们所测试的其它16种红细胞。浓度为0.1mg/ml时,花椰菜凝集素也能凝集小鼠艾氏腹水瘤细胞,S_(180)肉瘤细胞,大鼠W_(256)肿瘤细胞、人的MGC_(80-3)胃癌细胞、小鼠和大鼠的脾脏淋巴细胞、骨髓细胞以及牛精子细胞,而不凝集人的Hela细胞。该凝集素对免的红细胞的凝集活性可被L—鼠李糖和D—树胶醛糖所抑制,最低抑制浓度分别为33.3m mol/L和16.7m mol/L。     

牛精细胞膜上凝集素受体的分离及其测定方法

应用非离子型去垢剂Brij58增溶牛精细胞获得的膜蛋白,经VBL-Sepharose4B亲和柱层析分离,可获得在PAGE、SDS-PAGE中均呈现单一蛋白带的VBL受体.其亚基分子最为46500d.牛精细胞经Brij58增溶的膜蛋白经用~(125)I标记,再经VBL-Sepharose4B亲和柱层析,也能获得~(125)标记的凝集素受体.经测定,用亲和层析法获得的凝集素受体,保持了原有的生物学活性.     

一种新的室温燐光法及其分析应用

提出一种新的4代树枝状分子（4G—D）-曲拉通-100X（Triton-100X）燐光标记试剂．基于Triton-100X-4G-D标记的麦胚凝集素（WGA）的产物（Triton-100X-4G-D—WGA），能与碱性燐酸酶（ALP）发生两种（直接法和夹心法）特异性亲和吸附反应（AA），其AA的产物仍然保持4G-D室温燐光的优良性质，且AA产物的△Ip值与ALP的含量成线性关系，据此建立了Triton-100X-4G—D标记麦胚凝集素-亲和吸附固体基质室温烧光法（AA—SS—RTP）测定痕量ALP的新方法．该方法的检出限为0．20ag spot^-1（直接法，对应浓度：5．0×10^-18 mol L^-1）、0．14ag spot^-1（夹心法，对应浓度：3．5×10^-18 mol L^-1），灵敏度高，重现性和精密度好．直接法和夹心法用于血清中ALP含量的测定，与漳州市中医院ELISA法临床检测的结果相吻合．