牛病毒性腹泻病毒GSTZ株E1基因原核表达载体的构建及表达

为研究牛病毒性腹泻病毒的囊膜糖蛋白E1的抗原性,参考了Oregon C24V BVDV毒株的基因组序列(AF091605.1),并设计一对特异引物(上游引物5’-CCC GGA TCC ATG GCC TCT CCC TAC TGT-3’,下游引物5’-GGG CTC GAG TTA CCC TTG TGC TCC TGT T-3’),利用RT-PCR从病毒基因组中扩增E1基因609 bp全长片段,测序结果表明,与C24V株核苷酸同源性达100%.扩增产物经BamHI和XhoI双酶切,亚克隆至原核表达载体,双酶切鉴定表明成功构建了重组表达载体pET-32a(+)-E1.重组表达载体转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,经SDSPAGE和Western-blot检测,成功诱导表达出25ku E1蛋白.实验结果为进一步研究BVDVE1蛋白的功能提供了参考.     

牛羊细粒棘球蚴病现场快速检测方法的建立及应用

建立了一种基于恒温隔绝PCR(Insulated isothermal PCR,ii PCR)技术现场检测牛羊包虫病的方法.结果显示,该方法只能检出细粒棘球绦虫,对多房棘球绦虫、肝片吸虫、细颈囊尾蚴、前后盘吸虫、日本血吸虫、金黄色葡萄球菌、伪结核杆菌无关病原不检出;检测下限为100个拷贝,重复性好.对55份牦牛源包囊样本和70份羊源包囊样本的检出率分别为61.8和4.3%,与文献报道的检测方法的符合率分别为100%;本研究建立的ii PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,从核酸提取到报告检测结果仅需1小时,操作方便,可现场使用,为牛羊包虫病的现场快速诊断提供有力的工具.     

牛小肠碱性磷酸酶部分性质研究

摘要：用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、EAE-32柱层析和Sephadex G-150 凝胶过滤,从牛小肠中分离纯化出牛小肠碱性磷酸酶（BIAP）.提纯倍数为50.69,比活力为48.87U/mg蛋白.酶液经SDS-PAGE呈现单一条带,且不含DNA核酸酶.该酶催化对硝基苯磷酸二钠（p-NPP）水解反应的最适pH值为9.7,pH小于6.5大于11.5均不稳定;最适温度为45℃,高于50℃不稳定.Km值为0.29mmol/L.45℃,pH9.7时最大反应速度（Vmax）为4.6μmol/(L•min).利用SDS-PAGE测定酶亚基的分子量为66KD. Mg2+、Mn2+和Ca2+对酶有不同程度的激活作用,Zn2+和EDTA对酶有抑制作用。随着Mg2+、Zn2+和EDTA浓度增加,270nm处紫外吸收值增加.     

效应物对牛肠激酶活性的影响

肠激酶(EK,EC 3. 4. 21. 9)是一种在基因工程产品中广泛应用的工具酶.以小分子荧光物质甘氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-β-萘胺(Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-β-naphthylamide, GD4K-β-naphthylamide) 为底物,采用荧光跟踪法研究了不同氨基酸、几种常用有机溶剂、EDTA、DTT等对牛肠激酶(BEK)活力的影响.结果表明:L-赖氨酸(L-Lys)、丙酮、EDTA、DTT对该酶的活性有较强的抑制作用,IC50分别约为25,50,50 和120 mmol/L.进一步研究了L-Lys与丙酮对BEK活力的抑制机理以及抑制类型,结果表明:L-Lys对该酶的抑制机理为可逆抑制,其抑制类型为竞争型抑制类型,其抑制常数KI为12.02 mmol/L.丙酮对BEK的抑制类型表现为不可逆抑制.     

职技高师类院校对口生源《牛生产学》课程教学模式的探索与实践

《牛生产学》是职技高师类院校动物科学专业的一门必修专业课,该课程的基本特征是集理论性、实践性和前瞻性于一体。鉴于职技高师类院校对口生源的专业知识结构和本底特点,为有效培养高质量的“双师型”人才,对《牛生产学》课程的教学方法、选择并优化其知识结构和教学内容等进行了探索与实践,并收到了预期成效。     

牛病毒性腹泻病毒牦牛株E0基因生物信息学分析及原核表达与抗原性检测

为研究牦牛BVDV E0蛋白的生物信息学及抗原性, 本研究对本实验室克隆并测序的牦牛病毒性腹泻病毒E0基因进行了生物信息学分析;同时用含有酶切位点、起始密码子、终止密码子的引物重新扩增E0基因, 并连接PMD18-T载体, 经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后, 将获得的E0片段克隆至PET-28A原核表达载体, 构建重组质粒并转入JM109.酶切、质粒PCR鉴定正确后转入rosetta(DE3)菌进行诱导表达.经SDS-PAGE检测结果显示目的基因获得了较高的表达, 表达的融合蛋白约33ku, 经western-blotting检测表明目的蛋白具良好的有抗原性.     

一种Schiff碱铜配合物对双氧水漂白的催化作用

水杨醛与牛璜酸以1∶1的比例在无水乙醇中反应,生成水杨醛缩牛璜酸席夫碱,再与C u（Ⅱ）金属离子络合,合成Schiff碱铜配合物,用红外光谱证实了其结构。通过＂正交试验法＂研究了该配合物对双氧水漂白棉织物的催化作用。实验对漂白后的棉织物的断裂强度、白度等指标进行了测试及分析,结果表明,该配合物对双氧水漂白有较好的催化作用。当配合物的浓度为0.4 g/L,pH=9,温度为60℃,时间为60 m in,此时棉织物的白度和断裂强度较好。     

牛体外受精胚胎移植的应用研究

探讨了利用牛ＩＶＦ技术,在国外生产纯种肉牛胚胎运用国内进行大批量移植后受体母牛的妊娠率及产犊情况,共移植受体母牛１５８头,妊娠率（９０ｄ）为２１．４％￣４８．５％,共计产纯种犊牛５５头,５￣８日龄胚移植给发情第７ｄ的母牛能够得到较高的妊娠率（４３．８％￣５０．０％）,受体母牛在前两交伯移植妊娠率（３０．０％￣３５．０％）,明显高于第三次（１５．４％）以后的妊娠高,研究结果证实,在国外生产的的占ＩＶ     

熊去氧胆酸的新合成路线和方法的研究

熊去氧胆酸原有合成路线是从牛、羊胆汁中提取牛胆酸作为原料,经多步复杂反应转化为鹅去氧胆酸的羧基进行甲酯化保护,再经Ｂｅｎｋｅｓｅｒ反应加氢还原得到熊去氧胆酸经,最后再进行脱甲酯处理,得到熊去氧胆酸,合成的路线、工艺复杂、产率低;新的合成路线是由鸡胆汁中直接提出提取鹅去氧胆酸,然后选用高专一性复合型催化剂,加氢还原合成熊去氧胆酸,整个合成过程不仅大大简化合成路线和工艺、降低了成本,而且使熊去氧胆酸,     

一种牛精子膜蛋白的纯化及在生殖中的作用

牛精子经ψ=0.5%的NP-40洗脱后,先经伴刀豆凝集素Con A(Concanavalin A)亲和层析分离,经SDS-PAGE电泳,得到相对分子质量Mr分别为32×103,26×103,20×103的3种与Con A结合的糖蛋白CBG(Con A binding glycoprotein).再将亲和层析分离所得蛋白成分经葡聚糖凝胶(Sephadex G-100)层析柱进一步纯化,得到Mr为26×103的单一成分.将26×103 CBG免疫兔后制得抗血清,经PAP免疫组织化学染色发现:26×103的CBG抗原主要分布于牛精子的顶体区,同时鼠精子表面也有同样分布,说明26×103的CBG抗原具有种同保守性.后将26×102的CBG免疫雌鼠,发现其产仔率由对照组的(8.5士2.6)只(n=12)减少到(4.3士1. 8)只(n=24),经t检验(不配对,单尾),二者间差异极显著(p＜0.001).本实验结果表明:26×103的CBG在精卵结合中可能发挥重要作用,并有可能开发为人工避孕疫苗.