烟草NtCDC48基因的克隆及功能分析

利用裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）系统从烟草BY-2悬浮细胞中分离得到了NtCDC48 cDNA序列， 全长2729bp，包括74bp的5′端非翻译区，2427bp的开放阅读框以及228bp的3′端非翻译区，可读框编码808个氨基酸，推导蛋白含有两个典型的ATPase模块（aa：245—374；518—646）. 在烟草悬浮细胞中过量表达NtCDC48能显著提高烟草BY-2细胞的有丝分裂指数，并导致纺锤体微管列阵的两极结构由相对集中转换为极端弥散状态. NtCDC48GFP融合蛋白在细胞周期M期的亚细胞定位结果表明，NtCDC48随细胞周期进程发生有规律的变化.这些结果表明NtCDC48在植物细胞有丝分裂进程中发挥着重要作用.     

阿德福韦抗乙肝病毒感染治疗动力学模型

基于阿德福韦(Adefovir dipivoxil)与安慰剂治疗180余位HBeAg阴性的慢性乙型肝炎(CHB)患者国际联合研究的临床数据,以及Nowak等人提出的不带效应细胞的乙肝病毒(HBV)感染模型,提出了一个由两个系统组成的数学模型, 模型对CHB患者的阿德福韦治疗效果提供了一种可能的解释, 特别是可以解释为什么患者血浆中病毒数目在停止免疫治疗后会迅速反弹. 该模型对长期的疗效做出预测:血清HBV DNA接近中位数的患者需要延长治疗时间到5.6 a,以清除CHB患者体内的HBV. 本研究提示:将血清DNA小于500 copies·mL-1作为评价疗效的标准过于粗糙.     

根特异性表达顺式激活序列在转基因烟草中的功能分析

高等植物基因在各组织中的特异性表达需通过组织特异性启动子的调控。根是植物体的重要器官，其特异性基因的表达和调控对研究植物的生长和发育具有重要意义。通过对烟草根特异性表达基因TobRB7启动子的分析，成功分离了包含顺式激活序列 的不同长度的片段RSF1和RSF2。将RSF1和RSF2以不同方向与含有GUS编码基因的表达型载体进行重组后，以农杆菌介导转化烟草获得相应 的转基因植株。在对转基因烟草的GUS表达特性进行组织化学鉴定和荧光定量分析后发现，TobRB7启动子具有双向启动子功能，并均表现出根组织特异性。结果表明，在－823至＋70bp区域存在正反不同方向的根组织特异性调控元件，该启动子片段在反向插入和较短区域内有较强的根组织特异性表达调控功能。     

研制安全病毒疫苗

主要研究内容 早期生产小儿脊髓灰质炎病毒疫苗所用猴肾原代细胞曾发生SV40病毒传播,近年患者使用人脑垂体制备的人生长激素曾传播疯牛病,人类输血及使用血源产品曾传播艾滋病病毒.诸如此类的报道近年在媒体并不鲜见,人们不禁对使用原代细胞的安全性问题产生了担忧.自人类二倍体细胞(HDC)成功用作病毒活疫苗细胞培养基质以来,异种动物传代细胞系(CCL)用作生物制品及生物工程产品细胞培养基质的重要性进一步显示出来,它必将加快传代细胞系用作病毒活疫苗培养基质的步伐.     

转番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因烟草植株的培育及其抗虫特性分析

将分离的番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因cDNA序列tin2和含有一个109bp内含子的基因组DNA序列tin2i,分别构建成植物表达载体pBCT2和pBT2.然后通过农杆菌介导转化烟草叶片外植体,获得了两类转基因烟草植株.分子生物学检测和胰蛋白酶抑制剂活性分析结果表明,tin2序列和tin2i序列都能够在转基因烟草中正确表达.抗虫活性检测结果显示,转tin2i序列的烟草植株的抗虫活性高于转tin2序列的烟草植株,推测这可能与tin2i序列中内含子的存在有关.     

8-羟基喹哪啶固相萃取光度法测定烟草中的铁

研究了8-羟基喹哪啶与铁的显色反应,在pH为8.0的氯化氨-氨水缓冲介质中,乳化剂-OP存在下,8-羟基喹哪啶与铁反应生成31稳定的蓝紫色络合物,该络合物可被Wate Plus-C18固相萃取小柱萃取富集,小柱上富集的络合物用乙醇为洗脱剂洗脱后用光度法测定,在乙醇介质中,络合物最大吸收波长λmax=595nm,ε=7.85×103L@mol-1@cm-1.铁含量在0.1～5.0μg/mL内符合比尔定律,方法用于烟草样品中痕量铁的测定,结果令人满意.     

朊蛋白构象变化机制的初步探讨

PrP^c的二级结构发生变化导致部分α－螺旋转变为β－折叠而产生PrP^sc，是导致神经退行性疾病的主要原因。蛋白质多肽链被氧化损伤为自由基，其二级结构发生变化，我们通过量子化学方法b3lyp/6-3lg^**计算出抽氢反应的焓变，以此确定氧化损伤的位点和构象的变化。计算发现，Cα-H键的断裂焓（BDE）较小，易抽氢，且形成的Cα－H自由基导致二面角Φ和Ψ发生明显的变化。这对于解释朊病毒的致病机理和错误折叠很有意义。     

H2O2诱导烟草悬浮细胞的凋亡

烟草悬浮细胞经不同浓度的过氧化氢处理发现 ,当用 6mmol L的H2 O2 处理时从形态学上可观察到明显的染色质凝聚 ,细胞质皱缩和细胞核解体等现象 ;DNA电泳结果显示发生凋亡的细胞基因组DNA被降解形成明显的DNA梯状条带 ,从而表现出典型的细胞凋亡特征 .其他高浓度的处理也有以上特征 ,但细胞坏死数目也相对增多 ,因此本研究认为 6mmol L的H2 O2 处理 2 4h能够非常有效地诱导烟草悬浮细胞的凋亡 .     

从废次烟草中提取茄尼醇的新工艺研究

茄尼醇是一种重要的医药原料。本文介绍了一种从废次烟草中提取茄尼醇的新的工艺路线，用价廉易得的PE溶剂代替现有生产工艺上常用的正已烷溶剂，可提高茄尼醇的提取率和溶剂回收率，降低生产成本。     

烟草叶细胞植株再生的研究

在一定的培养条件下 ,将无菌苗叶块接种在含有 0 .5mg/LNAA的MS基本培养基上 ,可诱导出愈伤组织 ;在 0 .0 5mg/LNAA 1.5mg/L 6 BA的MS培养基上能分化出芽 ;在 0 .1mg/LIAA的MS培养基中能形成根 .作者在文中还讨论了烟草叶细胞脱分化和再分化与植物激素、蔗糖和培养材料的关系 .