灰树花多糖对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用

通过谷氨酸诱导PC12 细胞损伤,建立氧化应激损伤的体外模型,探讨灰树花多糖对细胞损伤的保护作用。试验分为对照组、谷氨酸模型组 （谷氨酸15 mmol/L）、治疗组 （灰树花多糖25、50、100、200 mg/L+谷氨酸15 mmol/L）。MTT法检测细胞活性;酶标仪检测抗氧化酶活性、抗超氧阴离子活力及丙二醛含量;ROS Assay Kit试剂盒检测活性氧水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率。灰树花多糖质量浓度为100 mg/L时,细胞的存活率最高（80.27% ± 0.82%）,过氧化氢酶活性最高（24.78 µmol•min^-1•mL^-1）,超氧化物歧化酶活性最大（21.42 µmol•min^-1•mL^-1）,谷胱甘肽过氧化物酶活性最好（48.62 µmol•min^-1•L^-1）,抗超氧阴离子活力最大（137.65 µmol•min^-1•L^-1）,MDA含量最小（0.92 nmol/mL）。当灰树花多糖质量浓度为200 mg/L时,活性氧的荧光强度与谷氨酸组比,达到极显著水平（P＜0.01）,抗超氧阴离子的活性升高。 MDA含量不同程度下降。随着灰树花多糖浓度的增大,细胞凋亡减少,与模型组相比具有显著性差异。灰树花多糖能抑制细胞凋亡,提高抗氧化酶活性和抗超氧阴离子的活性,减少活性氧和丙二醛的生成,对谷氨酸损伤具有一定的保护作用。     

灰树花栽培模式比较研究

为了分析覆土栽培、菌袋栽培和菌棒栽培三种栽培模式对灰树花出菇时间、单朵质量和生物转化率的影响,以覆土栽培、菌袋栽培和菌棒栽培模式为试验变量,分析试验变量对灰树花出菇时间及总产量的影响.试验结果表明:不同栽培模式对产量影响很大,覆土栽培模式产量最高,生物转化率达64.7%,但损耗较大;菌棒栽培模式产品形状最好、损耗最小.     

灰树花菌丝体中海藻糖提取条件的研究

研究采用正交试验法、微波辅助提取灰树花菌丝体中海藻糖的条件,并用蒽酮-硫酸法对灰树花菌丝体中海藻糖含量进行了测定。确定了海藻糖提取条件的最佳组合:提取液为三氯乙酸,提取温度为30℃,提取时间为45min,液料比为1∶25。     

采用动态热回流法制备莲花菌多糖

以莲花菌子实体为材料,采用动态热回流法制备莲花菌多糖。通过单因素试验和正交试验研究原料颗粒粒径、提取温度、溶液pH、液料比、溶剂回流率、提取时间对莲花菌多糖提取效果的影响,并将动态热回流法与传统热水浸提法进行比较。研究结果表明:动态热回流法制备莲花菌多糖的最佳工艺条件是:原料颗粒粉碎度为3 500μm,提取温度为95℃,溶液pH为6.5,液料比为6.5-1.0,溶剂回流率为15%,提取时间为90 min,在此条件下,粗多糖得率可以达到13.98%,比传统热水浸提法提高16.1%,提取时间比传统法减少了3/4,溶剂用量比传统法减少了7/8。该方法可用于莲花菌多糖的规模化制备生产,亦可为其他真菌多糖及相关产品的大规模工业生产提供借鉴。     

基质pH值对灰树花菌丝体增殖的影响

试验结果表明，在pH4．8－6．4范围内，菌丝体增殖较快，尤以pH5．6增殖最快，且对矿质养分（磷、钾、钙、镁、锰等）的吸收最高。     

灰树花液体培养工艺的研究

对灰树花液体培养工艺进行了系统的研究.通过单因子试验优化筛选了适于灰树花的液体培养基和摇瓶培养条件,结果表明,适宜的培养基组成为:玉米粉50g/L、皮20g/L、KH2PO41g/L、MgSO40.5g/L、VB10.01g/L.最适摇瓶培养条件为:培养温度25℃、摇床转速160r/min、pH值6.0、接种量10%、装液量120ml/500ml、培养时间6d、最高菌丝体干重达16.8g/L.     

灰树花子实体多糖和菌丝体多糖的比较分析

从灰树花 (Grifolafrondosa)子实体和菌丝体中提取分离得到子实体多糖F -D和菌丝体多糖M -D ,得率分别是 0 .5 9%、0 .31% ;F -D的糖、蛋白质含量为 6 4 .8%、15 .6 % ,M -D糖、蛋白质含量是 6 5 .9%、7.37% ;气相色谱分析单糖组成 ,F -D由岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖组成 ,各单糖的摩尔比为 0 .9:0 .5 :1.3:5 .0 :2 .9:10 0 .0 ;M -D由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖组成 ,各单糖的摩尔比为 5 .9:8.5 :3.2 :2 3.2 :6 .5 :11.7:10 0 .0 ;红外光谱图显示F -D和M -D约在 890cm- 1处有吸收 ,1H -NMR谱显示两者在 5mg/L以上均无吸收 ,13C -NMR谱显示两者在 10 5× 10 - 6 、86× 10 - 6 、和 71× 10 - 6 处均有吸收 ,提示F -D和M -D多糖中均存在 β(1→ 3)和 (1→ 6 )糖苷键。     

灰树花栽培过程中病虫害的综合防治

针对灰树花栽培过程中出现的主要病虫害,提出了以生态防治和生物防治为主的综合防治措施:一是农业生态防治,选用抗病虫能力强的优良健壮菌种,充分利用病虫害的生物学习性,合理安排生产季节,达到促菇抑病抑虫的防治目的;二是物理防治,依据病虫害生物学特性,利用简单工具和各种物理因素,如光、热、电、温度、湿度和放射能、声波等防治病虫害;三是生物防治,利用有益生物抑制或消灭有害生物.     

灰树花液体培养及其胞外多糖的实验研究

对灰树花(Grifola frondosa)菌丝体液体深层发酵条件进行了初步研究,在优化灰碳源和氮源等技术参数基础上,对发酵液中胞外多糖的形成规律进行了研究.研究结果表明,酵母浸粉和葡萄糖是灰树花生长较为适宜的碳氮源,发酵液中灰树花多糖含量最多可达9 g/L.     

天麻醇提物对灰树花胞外多糖单糖组成和生物活性的影响

天麻醇提物参与灰树花液体发酵体系,检测所得胞外多糖的单糖组成变化,研究天麻醇提物对灰树花胞外多糖生物活性的影响。利用高效液相色谱对4种胞外多糖样品进行单糖组成分析,采用小鼠巨噬细胞(RAW264.7)活化模型、人肝癌细胞(HepG 2)模型对灰树花胞外多糖生物活性进行检测。实验结果表明灰树花粗多糖样品主要由葡萄糖、甘露糖及少量的半乳糖等单糖构成;经纯化的胞外精多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖等单糖构成,单糖物质的量比依次为13.8∶3.9∶5∶3.7:1∶1.7,而添加天麻醇提物的胞外精多糖单糖组分物质的量比为12.7∶3.2∶5.6∶3.5∶1∶1.6。通过灰树花胞外多糖对小鼠巨噬细胞活化实验的结果可知,添加天麻醇提物的胞外精多糖对巨噬细胞有明显的活化作用,胞外精多糖、添加天麻醇提物制备的胞外粗多糖对巨噬细胞有一定的活化作用,胞外粗多糖对巨噬细胞无明确的活化作用。通过体外实验检测,4种多糖样品对人肝癌细胞HepG 2无抑制作用。添加天麻醇提物对灰树花胞外多糖单糖组分含量产生明显变化,但并未使灰树花多糖产生新单糖;添加天麻醇提物能提高灰树花胞外多糖对巨噬细胞的活化作用。