应用酵母双杂交技术筛选与p53相互作用的蛋白质

应用酵母双杂交技术筛选与p53发生相互作用的蛋白质,有助于进一步阐明其在肿瘤发生、发展中发挥重要作用的调控机制。采用酵母双杂交技术,以p53C末端（62-393aa）作为诱饵筛选人乳腺cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质．并运用报告基因等实验提供的信息,经过重复验证排除假阳性以确定最后的阳性克隆。以p53C末端（62～393aa）作为诱饵最终筛选出了一个阳性克隆,经测序及生物信息学分析,这一个阳性克隆为：PIAS3（Protein inhibitor of activated stat3）。说明了PIAS3蛋白能与p53（62-393aa）发生特异性的相互作用。     

人CtBP2与CCNH相互作用的初步研究

CtBP2(E1AC-terminal binding protein 2)作为辅阻遏物与多种转录因子联系而参与到很多生物过程中,如细胞分化、凋亡、发育和肿瘤发生等,然而其中许多作用机制尚不明了.为了对CtBP2进行深入研究,利用高通量酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵,与含有1000个人肝基因克隆的酵母双杂交文库进行接合筛选获得了一个与它相互作用的猎物蛋白CCNH(Cyclin H).通过GST-pull down、免疫共沉淀和亚细胞共定位等实验进一步证明了这两个蛋白在体外和体内的相互作用.     

酵母生物多孔碳的制备及其对亚甲基蓝的吸附研究

以繁殖快速的酵母菌作为生物碳源,采用水热处理法、KOH高温活化法制备了对亚甲基蓝染料具有吸附效果的多孔碳材料,对该多孔碳材料进行了SEM、XRD、FT-IR和BET分析,并且对其吸附性能进行了研究.实验结果表明,pH增加和温度升高均有利于吸附的进行.当酵母多孔碳JM-800用量为10 mg、染料初始浓度为50 mg·L...     

酵母细胞麦角固醇的提取条件

通过对酵母细胞麦角固醇皂化提取条件的研究,并在不同的菌株上进行验证,以及与其他方法的对比,提出了对麦角固醇进行皂化提取的方法:即1 mL发酵液的离心沉淀物加2 mL 500 g/L的KOH和1.5 mL无水乙醇,85～90 ℃皂化3 h,麦角固醇提取效率较高.     

芽殖酵母Sik1蛋白在纺锤体定位中的功能

为了探究芽殖酵母蛋白Sik1在有丝分裂纺锤体定位中的功能,利用同源重组技术将SIK1的内源启动子替换成GAL1启动子,得到基因组位点过表达SIK1的菌株,同时使菌株表达GFP-Tub1,以便观察纺锤体;接着在12℃低温条件下培养细胞以促进双核细胞的产生,细胞经乙醇固定、DAPI染色后在荧光显微镜下观察细胞核分裂及纺锤体...     

密码子优化的植酸酶基因appA-P在毕赤酵母中的高效表达

根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子使用偏爱性,对Escherichia coli来源的高比活植酸酶基因(appA)全面地进行密码子优化,人工合成了植酸酶基因(appA-P),并将该基因克隆到毕赤酵母诱导型分泌表达载体pHBM905A上,获得重组质粒pHBM905A-appA-P,通过PEG1000转化法将线性化的重组质粒转化毕赤酵母GS115菌株,筛选得到一个高效表达植酸酶的重组菌株GS115-appA-P,在25℃摇瓶培养168 h后酶活力达到422 U/mL,该植酸酶最适反应温度为60℃,最适反应pH为4.5,在20~50℃、pH1.0~6.0范围内较稳定.     

肠道病毒71型外壳蛋白VP3在Pichia.pastoris酵母中的表达

利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法克隆肠道病毒71型SHZH98株外壳蛋白VP3基因,连接T载体,经序列测定后,构建酵母分泌型表达质粒pPIC9K/VP3,经序列测定证实-factor信号肽和VP3的序列和阅读框正确后,用SacI酶切使之线性化,电转化法将目的基因整合到宿主菌GS115基因组上;经转化子表型筛选和PCR分析鉴定后,甲醇诱导,筛选到5株高效表达VP3蛋白的工程菌株.ELISA实验表明:重组蛋白VP3具有较好的免疫原性.     

FMRP与TDG蛋白的相互作用

脆性Ｘ智力低下蛋白ＦＭＲＰ表达的缺乏可以导致最常见的遗传性智力低下疾病—脆性Ｘ综合征。用酵母双杂交体系筛选与ＦＭＲＰ相互作用的蛋白质,以期通过相互作用的蛋白质研究与ＦＭＲＰ相关的生化途径。从小鼠胚胎ｃＤＮＡ文库中得到一个与ＦＭＲＰ特异相互作用蛋白的ｃＤＮＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ号ａｆ１０２８５７）。该ｃＤＮＡ编码的蛋白与人的Ｇ／Ｔ错配ＤＮＡ胸腺嘧啶糖苷酶（ｈＴＤＧ）高度同源通过多种ＦＭＲＰ造反剪接异构体     

发酵型梨汁酒酿造工艺研究

梨是人们日常生活中的一种主要水果,将梨汁进行酿造,得到的梨汁酒既有酒的醇香又有梨的保健功能,对发酵型梨汁酒酿造工艺进行了研究,起始糖度20％左右,最佳发酵温度20℃,发酵液pH为5,发酵时间7d,该条件下发酵的梨汁酒颜色金黄,透光率高,口感较好．同时也对梨汁酒工业化做了展望．     

苹果白兰地生产工艺的研究

采用经试验所筛选的菌种，进行了分批发酵生产苹果白兰地的研究，选择了适宜的培养基配方和蒸馏方案，确定了较佳的生产工艺条件，对生产过程中酵母的分离进行了初步探讨。