N-乙酰-D-氨基葡萄糖的研制

研究了以氨基葡萄糖盐酸盐(GAH)为原料、乙酸酐为酰化剂制备了N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)。着重考察了反应时间、酰化剂量、pH值以及溶剂极性对N-乙酰化反应的影响。同时通过一系列的纯化处理，得到了NAG精制品。研究结果表明：反应时间影响较小；当NH2和Ac20的摩尔比为1：4，在吡啶为溶剂的碱性环境下N-乙酰化反应得率较高，达70％。NAG精制品的结构通过红外图谱、熔点等进行确证。     

D-氨基葡萄糖盐酸盐对小鼠淋巴细胞增殖及相关基因表达的影响

研究D-氨基葡萄糖盐酸盐( GAH)对小鼠淋巴细胞c-fos mRNA,NF-kB mRNA,p38 MAPKmRNA表达的影响,并在分子水平上进一步探讨GAH对小鼠淋巴细胞增殖的作用机制.利用RT-PCR法检测GAH作用后小鼠淋巴细胞c-fos mRNA,NF-kB mRNA,p38 MAPK mRNA表达水平的变化...     

柱前衍生高效液相色谱-质谱法测定血浆中的氨基葡萄糖浓度

采用柱前衍生高效液相色谱-电喷雾质谱法(HPLC-ESI-MS)测定了人血浆中的氨基葡萄糖浓度.该方法以氨基半乳糖为内标,用丙酮沉淀蛋白后,加入5 μL三乙胺和10μL异硫氰酸苯脂后,在60℃的恒温水浴中反应1 h,用氮气吹干、流动相溶解后于离心机上以12 000 r/min离心5 min后进样20μL分析;以甲醇与水作流动相,经过Ultimate-XB C18柱(4.6 mm ×250 mm,5μm,Welch Materials)在梯度模式下分离后1:4分流,以0.2 mL/min的流速进质谱分析.实验结果表明:氨基葡萄糖的回归方程为Y=6.70×10-4X+1.11×10-2(r2=0.996),在0.10～5.00μg/mL范围内线性关系良好;最低定量限为0.10 mg/L;氨基葡萄糖和内标的萃取回收率分别为88.3%～92.1%和85.2%;日内、日间精密度的RSD值分别为<6.0%、<5.0%,稳定性的RSD<7.5%.所建立的方法准确度好、灵敏度高、稳定性好,适合于血浆中的氨基葡萄糖的含量测定.     

Cyclobacterium qasimii脱乙酰酶的异源表达及酶学性质

氨基葡萄糖因具有丰富的生物活性而被广泛应用,但目前其工业化生产均需利用浓酸在高温条件下进行脱乙酰反应;因此,需要寻找一种环境友好的生物催化法来取代酸水解法脱乙酰基。筛选并得到了来源于卡西氏菌Cyclobacterium qasimii的脱乙酰酶(CqCBDA),并将其成功地在大肠杆菌表达系统中进行了异源表达,且其具有较高水平的可溶性蛋白表达量。纯化后重组的CqCBDA具有N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶活性,比酶活力为11.5U/mg,最适温度为40℃,最适pH值为7.6,在低于40℃的条件下展现出较高的热稳定性。CqCBDA在酶解法生产氨基葡萄糖过程中具有较大的应用潜力,研究结果可为酶法绿色制备氨基葡萄糖提供理论参考。     

产物类似物对南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

以南美白对虾为材料,分离提纯N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶,研究产物NAG及产物类似物glu、gal、fru等对该酶催化水解pNp-β-D-GlcNAc活力的影响.抑制强度次序为NAG＞gla＞glu＞suc＞fru.研究抑制作用动力学,结果表明NAG对酶的抑制作用表现为反竞争型,其抑制常数KIS为11.4 mmol/L/;gal、glu、fru对酶的作用表现为竞争型抑制,抑制常数KI分别为0.709、0.747和2.94 mol/L;suc对酶的抑制作用表现为非竞争型,抑制常数KI=KIS=2.58 mol/L.     

丙酮对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力与构象的影响

以丙酮为效应物,研究其对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响,结果表明:该酶的剩余活力随着丙酮浓度增大而呈指数下降,当丙酮浓度达25%,酶的剩余活力仅为20%,说明丙酮对青蟹NA-Gase有明显的失活作用.导致酶活力丧失50%的丙酮浓度为7.5%.在较低丙酮浓度(＜10%)的失活是可逆的反应过程.动力学研究表明,该酶的失活过程属于混合型,并进一步测定游离酶(E)和酶底物络合物(ES)与丙酮的结合常数(K1和K1s),分别为4.06%和10.49%,K1＜K1s,说明底物存在对酶被丙酮的失活作用有一定的保护作用.应用荧光发射光谱研究青蟹NAGase经丙酮微扰后的分子构象变化情况,结果表明:丙酮对酶分子构象有显著的影响,酶的内源荧光强度随丙酮浓度增大而降低,说明酶分子中的生色基团Trp和Tyr残基的微环境发生了变化.     

含D-乙酰氨基葡萄糖和哌嗪的脲类化合物的合成及表征

以D-氨基葡萄糖盐酸盐为起始原料,经过羟基的乙酰化保护,得到2-氨基-1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃糖盐酸盐;然后在三乙胺存在下,与三光气、哌嗪衍生物"一锅法"反应,合成4种具有代表性的糖基哌嗪物质.产物结构均经FT-IR,1 H NMR和HRMS(ESI)确认.     

稀土-氨基葡萄糖-咖啡酸配合物的合成与表征

以氨基葡萄糖盐酸盐和咖啡酸为配体,用水与甲醇按３：１体积比的混合液作溶剂,合成了Ｌａ（Ⅲ）与Ｓｍ（Ⅲ）的三元稀土配合物。由元素分析得三元配合物的组成分别为Ｌａ２（Ｃ６Ｈ１３ＮＯ５）（Ｃ６Ｈ７Ｏ４）４Ｃｌ２和Ｓｍ２（Ｃ６Ｈ１３ＮＯ５）（Ｃ９Ｈ７Ｏ４）４Ｃｌ２利用红外光谱研究了其配位情况,结果表明氨基葡萄糖和咖啡酸同时参与了配位。     

血cTnI、CK-MB、尿NAG在窒息中的变化

研究新生儿窒息中血清中cTnI、CK-MB和血清、尿液NAG水平变化与临床意义.患者组用新生儿窒息的病儿54例(轻度窒息34例,重度窒息20例),分别于第1天和第7天取静脉血用于检测血清cTnI、CK-MB和血清、尿液NAG水平;对照组12例无窒息的新生儿.新生儿窒息组血清cTnI、CK-MB和血清、尿液NAG水平在明显高于对照组时,有统计学意义(P<0.05),而在两窒息组中,重度组比轻度组增高明显(P<0.05);新生儿窒息的两组在第7天时,血清cTnI、CK-MB和血清、尿液NAG含量均比相应的第1天明显减低(P<0.01).新生儿窒息易引起心脏和肾脏的损伤,血清cTnI和尿液NAG可作为新生儿窒息所致急性心、肾损伤的辅助诊断指标.     

D-氨基葡萄糖盐酸盐的研制

从龙虾壳（蟹壳）制备甲壳素,后者用盐酸水解,再纯化得到Ｄ－氨基葡萄糖盐酸盐。经实验研究表明其最佳工艺条件为：投料比为甲壳素：盐酸＝１：７（重量比）;盐酸浓度为３０％;水解温度为８０℃;水解时间为３．０～３．５ｈ;洗脱溶剂为乙醇;活性炭脱色,脱色温度为８５℃;脱色时间为０．８ｈ,依此工艺条件生产的新产品能够满足美国、日本等多个国家客户的要求,具有很好的经济效益和社会效益。