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51.
将克隆的苜蓿花叶病毒中国分离株(AIMV—Ch)RNA23′端cDNA重组到植物表达载体pROKⅡ中,用三亲融合法导入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404,采用叶圆片法转化普通烟草,诱导再生小植株.经卡那霉素抗性筛选和PCR检测,证明AIMV RNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中. 相似文献
52.
根据中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis ) EST序列信息设计引物,用RT-PCR方法,从经热休克处理的中国明对虾的肝胰腺RNA中克隆到长2090 bp的hsc70 cDNA序列,包括长1956 bp的完整编码序列(complete CDS)及部分5’端和3’端非翻译区(5’UTR 和3’UTR)。PCR及测序结果分析显示hsc70 cDNA的1~547 bp碱基所对应的基因组序列可能含有内含子,548~2090 bp碱基所对应的基因组序列不含内含子。根据编码序列推导出相应的652个氨基酸,与其他真核生物HSP70家族成员进行同源性比较,发现中国明对虾HSC70与虹鳟(Oncorhynchus mykiss) HSC71、人(Homo sapiens) HSC70、家鼠(Mus musculus )HSP70、烟草天蛾(Manduca Sexta )HSC70的相似性分别是85.9%、85.9%、85.8%、85.4%,表现出较高的保守性。表达分析显示,hsc70 mRNA在中国明对虾正常肝胰腺、肌肉、眼柄、血细胞、心脏、卵巢、肠和鳃等组织存在,并呈组成性表达;受到整体热休克后的对虾肌肉组织hsc70 mRNA水平(以β-actin mRNA水平为内标)与对照组没有显著的差异。 相似文献
53.
胡萝卜根特异表达水通道蛋白基因DcRB7的分离及其启动子功能分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从胡萝卜胚cDNA文库中分离得到一条完整的cDNA片段, 序列分析表明属于水通道家族新成员, 并与烟草根特异性表达TobRB7基因高度同源, 因此命名为DcRB7. Northern杂交分析表明DcRB7在根中特异性表达. 利用反向PCR技术, 分离获得了DcRB7基因上游约650 bp的片段. 将此片段与含有GUS报告基因表达载体进行重组构建后, 以农杆菌介导转化烟草获得相应的转基因植株. 在对转基因烟草的GUS表达特性进行了组织化学鉴定和荧光定量分析后发现, 该调控区段能指导GUS基因在烟草根中优势表达, 并表现出干旱诱导的特性. 相似文献
54.
植物NAD+-依赖型异柠檬酸脱氢酶(NAD-IDH)是一多功能酶. 以拟南芥生态型“Columbia gl1”及甘蓝型油菜三系“陕2A”, “陕2B”和“垦C1”的叶片为材料, 采用RT-PCR方法成功地从每种植物材料中分别克隆了3种NAD-IDH不同亚基基因. 同源性搜索发现, 来源于油菜的克隆基因是新基因. 将克隆基因的功能蛋白编码区整合到pMID1多克隆位点, 构建表达重组体, 均能在体外翻译系统中高效地表达出特异目的蛋白. 亚基0, 亚基1和亚基2基因转录本加入到含终浓度为36 μg/mL的二硫键异构酶的体外翻译系统, 体外表达产物中检测到NAD-IDH酶活力. 不同基因种类及转录本分子比的体外表达产物的酶比活力比较表明, NAD-IDH由3种亚基组成, 缺一不可, 缺少亚基0是致命的, 缺少亚基1或2中的任何一个对酶活力的损伤是严重的. 同时发现, 来源于陕2A和陕2B的亚基1基因转录本中存在碱基缺失现象, 从而发生移框突变或无义突变, 使突变亚基不表现正常亚基1功能, 导致油菜品系间叶片NAD-IDH酶比活力存在差异. 相似文献
55.
本实验引物延伸合成人红细胞生成素信号肽序列;信号肽序列和人可溶性B淋巴细胞刺激因子(human soluble B Lymphocyte Stimulator,hsBLyS)基因重叠延伸拼接成融合基因;融合基因插入pcDNA3、pcDNA3.1、pEFneo质粒;信号肽引物设计时,突变同义密码,最终重组质粒成为分泌表达质粒;磷酸钙共沉淀将表达质粒和标志质粒pSV-dhfr,共转染CHO-dhfr^-细胞;选择培养液筛选,氨甲喋呤扩增表达,获稳定表达rhsBLyS细胞株;ELISA检测浓缩表达上清,结果表明:rhsBLyS表达量由0.13μg/mL上升至0.55μg/mL。 相似文献
56.
按大肠杆菌高表达序列设计的入干扰素α—2b基因的化学合成和克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人干扰素α—2b基因编码区的核苷酸序列,应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段,经互补片段分别退火和连接后,将完整编码区分两段分别克隆于pUC19质粒中,进行DNA序列分析,分别选取序列完全正确的两种克隆片段进行重组,获得了与设计序列完全一致的含有完整编码区的人干扰素α—2b基因。 相似文献
57.
水杨酸对菜豆不同器官抗氰呼吸诱导与交替氧化酶表达的比较研究 总被引:4,自引:0,他引:4
作者研究了水杨酸(SA)处理对菜豆幼苗不同器官抗氰交替途径容量(Valt)、实际运行活性(ρValt)与AOX表达量的影响。结果表明:SA未处理的菜豆幼苗不同器官中均存在抗氰呼吸,其中真叶的Valt和ρValt最高,其次是子叶,而下胚轴的最低;SA处理24h以后,均可使菜豆幼苗3种器官Valt与ρValt显著提高,但不改变三者抗氰呼吸活性的大小顺序。显然,SA对菜豆抗氰呼吸只起到诱导作用,并不改变它们不同器官间的呼吸特异性。Western杂交分析结果显示:菜豆不同器官Vah与ρValt的差异与AOX蛋白水平的变化相关,真叶中AOX的表达量最多,下胚轴的AOX表达量最少;SA处理时,诱导菜豆幼苗不同器官抗氰呼吸增高的程度与AOX合成表达量的增加一致,二者紧密相关。 相似文献
58.
59.
水稻RSSG8基因启动子与GUS融合基因的构建及在烟草中的瞬间表达 总被引:1,自引:0,他引:1
使用染色体步移(Genome walking)法,从籼稻(Oryza sativa subsp.indica)桂朝2号基因组中克隆到长度为471bp的水稻精细胞优势表达基因RSSG8的启动子片段R8PN,并进行了全序列测定和分析.该段序列中含有3个CAAT-box,6个Gobox和多种植物顺式作用元件,但没有发现典型的TATA-box,推测为一种特殊的启动子结构,为了鉴定RSSG8基因的基本启动子元件,将二条长度不同的5’端侧翼区缺失体(分别长471bp,260bp)定向插入载体pBI121中,取代原有的CaMV 35S启动子,构了驱动报告基因GUS的植物表达载体pRGUS1,pRGUS2,通过农杆菌介导的瞬时表达法转化烟草叶片和花粉,快速鉴定启动子片段中起关键作用的区域,结果显示两个缺失片段都能启动GUS的表达,可以初步判定这两个片段具有启动子功能。 相似文献
60.
分泌性表达人rPA毕赤酵母工程菌株的构建及发酵条件的初步优化 总被引:2,自引:0,他引:2
通过PCR扩增得到组织型纤溶酶原激活剂突变体Reteplase(rPA)基因片断,将该基因片断插入到含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列载体pPIC9K中,构建了重组表达质粒pPICgK/rPA,转化Pichia pastoris GS115宿主菌.通过比较转化子在MM和MD平板上的生长状况,筛选His^ Mut^s表型转化子.并在2.0mg/mL G418平板筛选得到多拷贝转化子GR10,GR11.摇瓶培养,甲醇诱导外源基因表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明重组蛋白分子量约39ku,能与特异性单克隆抗体发生免疫反应;体外气泡法测定rPA活性,结果显示重组蛋白具有较好的纤溶活性.通过正交试验,优化发酵条件,表达活性最高为1050IU/mL. 相似文献