偏甘油酯脂肪酶PrLip的重组表达及酶学性质表征

偏甘油酯脂肪酶因其独特的底物偏好性具有广阔的应用前景。研究从食品安全菌娄地青霉的基因组中发现了一个假定的偏甘油酯脂肪酶prlip基因,通过全基因合成技术获得该酶基因序列,并构建了PrLip组成型表达的毕赤酵母基因工程菌。工程菌在30℃发酵培养60h,发酵活力达到22.26U/mL。利用阴离子交换层析法纯化,获得纯度大于90%的脂肪酶PrLip。酶学性质研究发现该酶的最适反应温度为45℃,最适反应pH值为7.0,40℃的半衰期为6h,水解及酯化反应证实PrLip是一种偏甘油酯脂肪酶。脂肪酶PrLip具有良好的温度耐受性及对大多数表面活性剂的耐受性,使其具有广阔的工业应用前景。     

纤维素分解菌——青霉和放线菌的分离选育研究

在平凉县的一蘑菇房里采集了用来种植蘑菇的潮湿木屑粉.用纤维素刚果红鉴别培养基初筛,根据水解圈与菌落直径之比大小和水解圈清晰度分离筛选出较多的产纤维素酶菌株,进一步通过测纤维素酶活力复筛,最终筛选出滤纸酶活力和羧甲基纤维素酶活力同时都较高的菌株2株,分别是27-3F (FPA:199.12U,CMCase activity:1181U)和27-1A(FPA:110.54U,CMCase activity:908.2U).经形态学鉴定菌株27-3F是青霉。菌株27-1A是为放线菌的链霉菌属.     

古尼虫草Cordyceps gunnii无性型菌丝体中天然VE提取工艺研究

首次报道了从古尼虫草Cordyceps gunnii(Berk.)Berk.无性型,古尼拟青霉P.gunnii菌菌丝体中提取VE的条件。研究结果表明,VE提取的最佳方案是,用无水乙醇作为提取剂,提取时间90分;石油醚为萃取剂,萃取时间为60分.在提取过程中加入VC和通入氮气进行保护十分重要.     

绳状青霉及其代谢产物浸铀研究

本文开展绳状青霉直接浸铀研究,探索培养温度、培养时间、接种量对铀浸出率的影响;同时开展绳状青霉代谢产物浸铀研究,探索不同pH值的绳状青霉代谢产物的铀浸出率。结果表明,当培养温度为35 ℃、培养时间为3 d、接种浓度为0.1%时,绳状青霉直接浸铀的铀浸出率为70.13%;当绳状青霉代谢产物的pH值为2.6时,铀的浸出率达到峰值,为82.58%。     

金属离子对青霉葡萄糖氧化酶的效应研究

研究了几种金属离子对青霉(Penicillium amagasakiense)葡萄糖氧化酶(简称GOD,EC.1.1.3.4)活力的影响.金属离子对酶活力的影响表明:Na+、K+、Ca2+、Pb2+、Mn2+等对酶活力基本没有影响;Al3+、Zn2+对酶有一定的激活作用;Ag+、Hg2+、Mg2+、Cd2+、Cu2+、Co2+等对该酶活力有不同程度的抑制作用.其中Ag+、Cu2+、Hg2+对酶的抑制作用较强,随着抑制剂浓度增大,酶活力呈指数下降,导致酶活力下降50%的抑制浓度为0.08、10.0 和31.25 μmol/L.进一步研究了Ag+的抑制动力学,结果显示:Ag+对酶的抑制作用为竞争性可逆抑制,抑制常数(KI)为0.065 μmol/L.该研究对青霉葡萄糖氧化酶的应用具有一定的参考价值.     

荨麻青霉(Penicillium urticae)原生质体的制备与再生

对荨麻青霉原生质体的高效制备以及再生方法进行了探索.结果显示荨麻青霉较为适合的原生质体制备及再生条件的组合:菌龄为28 ℃恒温下培养20～22 h,DTT预处理0.5 h,以7 mg/mL的纤维素酶,7 mg/mL蜗牛酶,5 mg/mL溶菌酶为混合酶,0.6 mol/L的NaCl作为渗透压稳定剂,28 ℃恒温酶解3.5 h,PDA高渗双层培养基再生.该组合制备原生质体形成量达到1.59×107～1.89×107/mL,其再生率达到16.24%～19.25%.     

篮状菌属蓝状菌组的两个中国新记录种

在系统调查我国蓝状菌(Talaromyces)物种资源的工作中,我们从贵州麻江县、山东青岛沿海滩涂和湖北随州大洪山的土壤中分离得到的三株蓝状菌,即AS1-1=AS3.16070、QD4-1=AS3.16071和SZ1-1=AS3.16072,采用传统分类学和分子系统学方法分别鉴定为安妮索菲篮状菌(T.annesophi...     

根癌农杆菌介导的丝状真菌简青霉遗传转化的研究

利用根癌农杆菌LBA4404介导,建立了丝状真菌简青霉(Penicillium simpli-cissimum)H5的遗传转化系统.潮霉素抗性筛选、PCR和Southern blot分子鉴定等结果表明:筛选获得的转化子能够稳定遗传,外源的T-DNA以单拷贝随机整合到简青霉的基因组中.实验初步研究了农杆菌浓度、乙酰丁香酮浓度和共培养时间等因素对转化效率的影响,经过优化后转化体系的效率可达50个转化子/105个孢子.农杆菌介导的遗传转化方法在简青霉上的运用,将为研究该菌的基因工程改造提供强有力的工具.     

产植酸酶青霉菌株的诱变研究

对产植酸酶的青霉菌株Ａ２进行了诱变研究。分别以ＨＮＯ２－ＵＶ和ＵＶ－５Ｂｕ复合处理，进行了二轮诱变筛选后，得到高于Ａ２５０％以上的变异株６株，其中Ａ２－ＵＶ５９－２０株的酶活达０．８１２±０．０１９ｕ／ｍｌ，为出发菌株Ａ２的二倍多。     

木质纤维素降解酶系的基础和技术研究进展

山东大学微生物学科从事纤维素降解研究已有五十多年的历史。在木质纤维素微生物降解机理研究的基础上,从自然界中筛选到一株能高效降解植物纤维类生物质的斜卧青霉菌株,并获得该菌的多株抗降解物阻遏纤维素酶高产突变菌株。最近,已完成了对多株斜卧青霉菌株的全基因组测序,正在利用系统生物学技术深入探讨其酶系组成和酶合成调控机理。选育出的高产突变株,已用于规模化生产工业用酶,并开发出玉米芯生物炼制生产纤维素乙醇技术。