反义性：进展和前景

在各种细胞系及组织中,利用DNA和RNA序列抑制基因活性近来已引起人们相当浓厚的兴趣,该方法将使人们更好地理解抑制基因在特殊生物学进程中的作用,不管怎样,有些研究的目标已瞄准了癌症病因学或病毒基因组中的关键基因(致癌基因),例如,人类免疫缺陷病毒的继发性感染。随后,该技术可能成为新的治疗方法,它的原理为:DNA或信使RNA的碱基序列,即有意义链,被互补的反义链作为目标结合,由此形成的杂交链不论在DNA水平,还是在RNA水平,均将抑制基因的活性,根据遗传密码的碱基配对原则(腺嘌呤配胸腺嘧啶,鸟嘌呤配胞嘧啶),在序列中选择正确的碱基,然后形成唯一的一条杂交链。类似这样的过程在原核生物中似乎天然存在,在真核生物中可能也发生,如有的细菌基因利用反义信息来调节基因表达。     

两种无尾两栖类的体细胞银染色研究

本文是用银染色技术对中华大蟾蜍（Ｂｕｆｏｂｕｆｏｇａｒｇａｒｉｚａｎｓ）和黑斑蛙（Ｒａｎａ．ｎｉｇｒｏｍａｃｕｌａｔａ）的骨髓细胞．肠组织细胞染色体的核仁组织者，进行了观察．结果如下：１．两种动物带有银染色阳性核仁组织者染色体的数目均为１—２条．２．银染阳性的核仁组织者（Ａｇ－Ｎｏｒｓ）出现部位是在染色体的次缢痕区．其中中华大蟾蜍的Ａｇ－Ｎｏｒｓ位于Ｎｏ．６染色体长臂之未端，黑斑蛙位于Ｎｏ．１１的长臂近着丝点区．３．有Ａｇ－Ｎｏｒｓ联合现象．     

尾矿废弃地微生物天然产物研究进展

微生物新结构天然产物资源一直是天然有机领域的研究热点.但是,一些独特生态环境来源的微生物及其天然产物尚未引起广泛关注.作者就美国蒙大拿理工学院在柏克利露天矿坑湖丝状真菌代谢产物中分离得到的化合物,以及本实验室在云南个旧锡尾矿土壤微生物分离得到的化合物进行类型及活性的总结,并对尾矿废弃地微生物代谢产物研究进展及前景进行简要阐述,为寻求新结构天然产物资源提供参考.     

啤酒废酵母中RNA和β-(1,3)-D-葡聚糖的综合提取

为实现RNA和β(1,3)-D-葡聚糖的综合提取,通过碱-酶提取法和优化稀碱提取条件,研究了温度、NaOH质量分数对RNA提取的影响.结果表明:温度为100℃,NaOH质量分数为4％时,提取率为7.65％,纯度为70.24％.进一步比较中性蛋白酶和碱性蛋白酶对β-(1,3)-D-葡聚糖提取的影响,发现中性蛋白酶得到的产物较多,纯度较高,实验结果为进一步的工业化生产奠定了基础.     

沉默白细胞介素10基因对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染的影响

为了研究藏猪免疫细胞中IL-10基因表达抑制后对RNA病毒感染及其免疫应答的影响,本实验构建和筛选了抑制猪IL-10基因表达的shRNA干扰分子及其表达载体,并以新型的壳聚糖接枝聚乙二醇和聚乙烯亚胺修饰分子(CS-N-PEI-PEG)通过离子交联法进行分子包装,制备DNA-壳聚糖纳米分子,体外转染藏猪免疫细胞,观察猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)诱导免疫细胞IL-10基因的表达及其增殖感染水平.实验结果表明:与未转染纳米分子或者纳米分子不表达shRNA的空白对照组相比较,shRNA实验组的IL-10基因表达在24～72h内明显抑制(P<0.05),免疫细胞中PRRSV的增殖水平显著下降(P<0.05);同时IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ基因的mRNA水平明显升高(P<0.05).这些提示IL-10的shRNA转染能使免疫细胞的抗感染能力显著增强,甚至可完全抑制PRRSV的复制.     

靶向TTF-1的siRNA腺相关病毒载体组装验证

为了解决靶向TTF-1的siRNA导入肺腺癌细胞的问题,设计了3条靶向NCI-H1975细胞TTF-1基因的siRNA,并将其分别构建到腺相关病毒上.在293细胞中装配病毒,收获病毒原初液后进行超滤浓缩、层析柱纯化,测定病毒滴度.重组病毒感染肺腺癌细胞系NCI-H1975,通过Western-Blot实验检测siRNA效果,利用凋亡实验验证细胞生物学效应.Western-Blot实验测得siRNA有较好的干扰效果,凋亡实验测得肺腺癌细胞NCI-H1975产生了凋亡,从而证明具有感染性的靶向TTF-1的siRNA腺相关病毒载体组装成功.     

Expression and self-assembly of Heterocapsa circularisquama RNA virus-like particles synthesized in Pichia pastoris

Heterocapsa circularisquama RNA virus(HcRNAV) is the first single-stranded RNA virus to be characterized that infects dinoflagellates.The ability of HcRNAV coat protein(HcRNAV CP) to self-assemble into virus-like particles(VLPs) in vitro suggested that heterologous expression was possible,and that the VLPs might be ideal nanocontainers for the targeted delivery of genes and chemicals.In this paper,we report the expression of a codon-optimized HcRNAV 109 CP gene in Pichia pastoris and the production of self-assembled HcRNAV VLPs using large-scale fermentation.The HcRNAV 109 CP gene was synthesized according to the codon preference of P.pastoris and cloned into a pPICZA vector.The recombinant plasmid pPICZA-CPsyns was transformed into P.pastoris by electroporation.The resulting yeast colonies were screened by PCR and analyzed for protein expression by SDS polyacrylamide gel electrophoresis.After large-scale fermentation,the yield of HcRNAV CPsyns reached approximately 2.5 g L 1 within 4 d.The HcRNAV VLPs were purified using PEG precipitation followed by cesium chloride density gradient ultracentrifugation,and were subsequently analyzed using UV spectrophotometry and transmission electron microscopy.Fluorescence dye-labeled myoglobin was loaded into the cages of the HcRNAV VLPs and the encapsulation was confirmed by fluorescence spectroscopy.The results point to the possible utilization in pharmacology or nanotechnology of HcRNAV VLPs produced by P.pastoris fermentation.