蜡状芽孢杆菌Bc-05菌株纤溶酶的酶学性质

对蜡状芽孢杆菌Bc-05茵株的发酵上清液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析所获得的纤溶酶进行性质研究.结果表明:经纤维蛋白平板法检测该酶有直接水解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用,最适作用温度37℃,最适pH=8.0,在pH=8.0条件下25℃和37℃放置24 h酶活力仍保持77.52%和78.96%,该酶体外对兔血凝块有明显的溶解作用;Ca2+,Mn2+离子对该酶具有激活作用,而Cu2+,Fe3+完全抑制其纤溶活性,PMSF,EDTA和DTT对该酶有抑制作用,说明活性中心含有二硫键、金属离子和丝氨酸;测其N端10个氨基酸序列为NH2-Val-Thr-Pro-Thr-Asn-Ala-Val-Asn-Thr-Gly,与其他生物来源的纤溶酶相比较没有同源性.     

重组蛋白对工程菌的保护作用

为考察重组蛋白对强氧化剂环境中工程菌的保护作用,分别在含百草枯及维生素K3（VitK3）的强氧化剂和不舍强氧化剂的培养基中培养重组蛹虫草超氧化物歧化酶菌株和对照菌株并诱导表达．测定菌体密度（A600）及菌体内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的酶活变化。结果表明：重组菌株对百草枯和VitK3引起的生长抑制作用具有抗性．百草枯和VitK3对重组蛋白的表达没有影响．重组菌株的A600、SOD酶活力明显高于对照菌株．CAT酶活力略高于对照菌株。说明外源基因在E．coli中的高效表达提高了菌体抵抗自由基引起的损伤的能力。     

纸基检测方法研究进展

随着现代检测技术的简约化、快速化、低成本的发展趋势,基于纸的各类检测方法应运而生.纸作为一种新的检测载体,既能满足传统检测方法的基本要求,还具备了便捷、成本低、检测时间短、适合户外及发展中国家实验室需求等优点.近年来纸基检测发展迅速,在酶联免疫吸附测定法、微流控检测、电传感器、荧光检测、核酸检测等方法中应用广泛.分析并梳理纸基检测方法在以上领域存在的不足,展望其在蛋白质检测、生物标志物筛查和临床诊断中的应用前景,对后续研究具有重要意义.     

影响蒜素后续降解反应的因素

为了在提取和保存过程中提高大蒜制品中蒜素的含量,进行了蒜素后续反应的稳定性和蒜氨酸酶对蒜素后续反应影响的研究.以蒜素为检测指标,乙醇提取新鲜去皮大蒜中的蒜素,分光光度法测量蒜素含量.研究了不同温度、真空度和光照等因素下对蒜素后续降解反应的影响,提取蒜氨酸酶,研究了蒜氨酸酶对蒜素后续降解反应的影响.研究表明:低温、真空及遮光条件下进行蒜素的提取或保存,蒜素比较稳定,降解缓慢;蒜氨酸酶会催化蒜素的降解反应,随着加酶量的增加,降解反应速度增加.     

苏氨酸磷酸裂解酶SpvC的结构基础与催化机制的分析

沙门氏菌的致病蛋白SpvC属于一种全新的被称为苏氨酸磷酸裂解酶的蛋白酶家族一员.苏氨酸磷酸裂解酶可以特异性识别丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激活位点的磷酸化苏氨酸和酪氨酸(pTXpY)模式,并不可逆地去除磷酸化苏氨酸的磷酸基团,使反应后的MAPK成为不可激活状态.SpvC的这种性质可以阻断宿主细胞免疫信号通过     

能源植物大米草的预处理及全组分酶水解研究

以大米草为原料,研究高温热水预处理方法和酶添加量、水解工艺等对水解效率的影响.研究表明,当酶添加量为3.6%,反应时间为72 h时,还原糖得率最高.通过XRD、红外光谱和扫描电镜等手段表征,进一步揭示了预处理效果.     

微粒子酶免疫检测法测定血中FK506的浓度

为探讨微粒子酶免疫检测法（MEIA）测定全血中FK506浓度的可行性和准确性,采用微粒子酶免疫检测法,对血样中的FK506浓度进行检测。用本法检测的血液FK506浓度的结果,其回收率、精密度等均符合要求。说明微粒子酶免疫检测法用于全血中FK506的浓度测定,操作简便、快速、自动化程度高,适用于临床大量样品的测定。     

微孔板化学发光酶免疫分析法定量检测肿瘤标志物CA72-4的方法学研究

建立了一种高灵敏、高特异检测人血清中肿瘤标志物CA72-4的微孔板化学发光酶免疫分析法. 采用双抗体夹心反应模式, 以过氧化氢(H₂O₂)-鲁米诺(luminol)化学发光体系作为检测体系, 以辣根过氧化物酶作为标记物, 测定简便、快速. 对几种物理化学参数, 如温育条件、抗体包被条件、酶标记物稀释度和发光反应时间进行了考察和优化. 结果显示方法的线性范围为0～200 U/mL, 相关系数0.9995, 检出限为0.18 U/mL, 批内、批间变异均小于10%. 检测CA72-4的临床低值血清回收率为98.5%, 高值血清回收率为101.3%, 显示了良好的准确性. 与人体血清中常见肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP), 癌胚抗原(CEA), CA24-2, CA19-9, CA15-3无明显交叉. 为了验证该法用于构建临床诊断试剂盒的可行性, 对所用试剂进行了37℃下的7 d热稳定性考察, 各技术指标与4℃放置7 d无明显差异. 对50例临床血样进行了测定, 并与进口酶联诊断试剂盒测值呈良好相关(r² = 0.9383). 这些结果均表明该方法稳定、可靠、实用, 可以满足商品化试剂盒的开发, 在临床CA72-4检测及癌症辅助诊断中具有较高的应用价值.     

白毒鹅膏菌胞外漆酶的部分酶学性质研究

从威海市玛珈山上获得白毒鹅膏菌,在对其产酶条件研究的基础上,研究了pH值、温度、无机离子对白毒鹅膏菌漆酶活性和稳定性的影响,测定了漆酶的Km值。结果表明：Ba^2＋、Cu^2＋、、SO4^2-离子对漆酶有激活作用,而Ag^2＋、Cl^-、Fe^3＋离子则有抑制作用,该酶最适pH为4.6,在pH 5.0-5.4表现出较强的稳定性;最适反应温度为20℃,低于60℃时有较好的热稳定性;以邻联甲苯胺为底物的表观Km值为66.7μmol/L。     

化学-酶法串联一锅合成R-γ-氨基酸

为开发简易高效的手性γ-氨基酸合成方法,采用烯丙基胺作为起始底物,在脂肪酶催化下利用酯化动态动力学拆分得到光学纯的烯丙基酰胺,再与α,β-不饱和酸进行一锅烯烃复分解反应制得相应的手性γ-氨基酸.