籼型光温敏感核不育水稻“安农S—1”生化特征的初步研究 (Ⅱ)幼穗分化时期叶片及穗中三种同工酶动态分析

在幼穗分化过程中,特别是育性转换敏感时期,“安农S—1”可育株与不育株叶片中过氧化物酶、α—淀粉酶及苹果酸脱氢酶等三种同工酶,其酶带数目和酶带活性都存在着明显的差异.据此认为“安农S—1”发生育性转换与这些酶的变化有关.可育及不育穗中上述三种同工酶差异不明显,且它们对温度的敏感反应迟于叶片.     

从兔骨骼肌综合提取ALD等五种酶的研究

采用一种组合５’－ＡＭＰ亲和层析、离子交换层析、分子筛层析以及重结晶的方法，从经硫酸铵沉淀初步分离的四个兔骨骼肌酶组分中逐步分离和纯化出醛缩酶等五种医用酶。本方法提取的五种酶均具有高比活和高纯度。本方法提取成本低，操作简便，酶活回收率高，因此具有应用价值     

滇池高背鲫鱼早期胚胎发育期间苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶的分析

采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳技术，对滇池高背鲫鱼的成熟卵和胚胎不同发育时期的苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）同工酶的表达情况进行了比较分析，结果如下：１、在从未受精卵到肝形成期的整个发育过程中，ＭＤＨ持续地表达了五条酶带，即ＭＤＨ１－３、及ＭＤＨ７－８。始终持续表达的酶带，在发育过程中可能执行的是最基本的代谢功能，与细胞分化无关；２、随着胚胎发育的进展，在第Ｉ组胚胎，从肌肉效应期到血液循环期还出现了三条新的酶带，即ＭＤＨ－４，５，６。这可能反映了滇池高背鲫鱼种群内存在着ＭＤＨ基因和表达上的多态性     

懒猴和树的乳酸脱氢酶同工酶的研究

用聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳和光电扫描仪对懒猴和树的心、肌、肝,肾、肠、脾、肺、血的乳酸脱氢酶同工酶进行了分析,结果表明,除懒猴肝脏仅显示3条酶带和树血液显示4条酶带以外,两种动物所有被测的其它器官组织均有5条酶带;不同种的同一器官组织,同一物种的不同器官组织,各酶带的相对百分含量绝大多数都显著不同.表现了种属特异性和组织特异性.同时,计算了血清乳酸脱氢酶同工酶A、B亚基的相对百分含量,并与人、猴、小白鼠已知血清参数进行了比较,发现A亚基的百分比值:小白鼠>树(>懒猴>猴>人,表明亚基的百分含量与动物的进化有关.     

免疫球蛋白G-葡萄糖脱氢酶结合物的研究

介绍一种新的酶结合物的制备方法,研究了该结合物在酶联免疫吸附测定中的初步应用。通过2-亚氨硫杂戊烷的修饰反应,在葡萄糖脱氢酶、抗体(IgG)分子上分别引入新的游离巯基。巯基化的葡萄糖脱氢酶和免疫球蛋白G之间,通过双功能试剂二马来酰亚胺甲醚(进行)偶联,偶联产物由Sephacryl S-300柱层析纯化。按非竞争性固相双抗体夹心法,将精制的IgG-葡萄糖脱氢酶(A)结合物用于人白蛋白(Ⅰ),人甲胎蛋白(Ⅱ)和牛胰岛素(Ⅲ)的定量检测。在0～10 ng/mL范围内,Ⅰ和Ⅱ与A活性均呈良好的线性相关;但Ⅲ与A活性之间没有任何相应关系。     

底物及其类似物对葡萄糖异构酶有关光谱的影响

采用均一态葡萄糖异构酶为试样,在其与底物或底物类似物共存下,测定了UV谱、荧光光谱和CD谱。     

不同生长期瞬目虫(Glaucoma scintillans)的同工酶的比较研究

以无菌培养的原生动物纤毛虫瞬目虫(Glaucoma scintillans)为材料,比较它们对数生长期和衰老期的酯酶同工酶,酸性磷酸酶同工酶,苹果酸脱氢酶同工酶及乳酸脱氢酶同工酶的差异。结果表明在不同生活状态下,四种酶同工酶蛋白带有明显差异;对数生长期细胞的同工酶活力和数量明显高于衰老期细胞的同工酶的活力和数量。说明同工酶不但是生物体代谢的调节者,亦能作为生物衰老的一种指标。     

谷氨酸生产菌T6—13谷氨酸脱氢酶特性研究

本文对谷氨酸生产菌Te_(-13)谷氨酸脱氢酶的辅酶专一性、热稳定性、最适温度、最适pH、动力学参数和发酵过程中酶活力变化进行了研究。结果表明该酶属胞内酶,以NADP~+为专一性辅酶,脱氨反应的最适pH为9.5,酶的最适温度为35～40℃,酶的热稳定性试验表明50℃保温10分钟,残留活力为50%,60℃保温10分钟残留活力为4%,70℃下则完全丧失活力,对L—谷氨酸和NADP~+动力学参数分别为2.13×10.2mol/L和6.58×10~(-5)mol/L,AMP、ADP对脱氨反应有激活作用,ATP无影响。     

大肠杆菌葡萄糖脱氢酶基因的克隆与原核表达

克隆出大肠杆菌编码葡萄糖脱氢酶(PQQGDH)的 gcd 基因，构建了诱导型表达载体pET28a-gcd，转化大肠杆菌E. coli BL21后获得阳性克隆菌株BL21/pET28a-gcd。IPTG诱导后，经SDS-PAGE分析表明，该工程菌PQQGDH的表达量约为对照菌的18倍，约为18.2 mg/L，实现了高表达。此外，研究发现添加MgCl₂能提高PQQGDH的表达量。     

新型预苯酸脱氢酶基因的克隆和生物信息学分析

采用基于序列特异性直接测序策略,从所构建的碱性污染土壤宏基因组文库中分离得到一个编码预苯酸脱氢酶的新基因pdhE-1,并对新基因进行生物信息学分析和保守区域特征研究。结果表明,pdhE-1编码一个由287个氨基酸编码组成的多肽。在DNA水平上,该基因与来自新鞘氨醇杆菌属(Novosphingobiumsp.)的预苯酸脱氢酶相似性较高,为82%;在氨基酸水平上,与来自运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)的预苯酸脱氢酶序列相似性为65%,一致性为42%。新型预苯酸脱氢酶基因pdhE-1的克隆和生物信息学分析研究为进一步完成酶基因的功能鉴定奠定了基础。