t(8;21)相关急性髓系白血病受累蛋白ETO中NHR3与NHR4结构域的寡聚化

在急性髓系白血病中, t(8;21)染色体易位占12%~15%, 这种易位造成AML1-ETO融合蛋白. 随着AML1-ETO融合蛋白在白血病中发病作用的研究进展, 目前人们对ETO蛋白的功能有了深入的认识. ETO蛋白含有4个与Nervy蛋白同源的结构域(NHR 1~4). 其中NHR1结构域与果蝇TAF110因子同源; NHR2为二聚化结构域, 并能募集mSin3A/HDAC; NHR4结构域含有2个锌指结构, 它在ETO与N-CoR/SMRT/HDAC之间的相互作用中起关键作用. 而有关NHR3结构域的功能尚不清楚. 为了探讨NHR3结构域能否介导寡聚化, 克隆并纯化了该结构域. 通过分子筛凝胶排阻层析、动态光散射分析及晶体溶解后SDS-PAGE电泳, 结果显示NHR3结构域是一个紧密四聚体. 为研究NHR3和NHR4结构域的聚合性, 克隆并纯化了NHR3+4结构域(即NHR3和NHR4结构域). 通过分子筛凝胶排阻层析与蛋白非变性凝胶电泳, 结果表明NHR3+4结构域在溶液中能够形成二聚体. NHR3和NHR4结构域参与寡聚化作用的生物功能可能在于: (ⅰ) 以聚合体的形式募集核共抑制复合物; (ⅱ) 通过NHR2, NHR3和NHR4结构域的共同作用来稳定ETO蛋白的二聚体状态, 从而有利于ETO蛋白稳定募集核共抑制复合物. 这些有关NHR3和NHR4结构域参与寡聚化的功能推测及在白血病中的发病作用非常值得进一步探讨.     

KIF4A尾部结构域与不同结构DNA的相互作用

在有丝分裂期的细胞中,染色体驱动蛋白KIF4A的染色体定位对细胞分裂进程影响显著,KIF4A的羧基端尾部是参与调控其染色体定位的主要结构.为了探究KIF4A结合DNA的特性,利用细菌表达KIF4A尾部功能域蛋白KIF4A-C278,并应用纯化后的蛋白分别与线性双螺旋DNA和超螺旋DNA结合.实验结果显示,KIF4A-C...     

胰蛋白酶处理对大豆下胚轴质膜H+-ATPase的影响

以大豆下胚轴为材料,采用蔗糖密度梯度法制备高纯度质膜微囊,研究了胰蛋白酶处理对质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的影响。     

胰蛋白酶处理对大豆下胚轴质膜H~+-ATPase的影响

以大豆下胚轴为材料 ,采用蔗糖密度梯度法制备高纯度质膜微囊 ,研究了胰蛋白酶处理对质膜H+ ATPase的影响 .结果表明 ,温和胰蛋白酶处理可刺激ATPase的水解活性 ;并且发现酶切处理可以提高PNPP的水解活性 ,当PNPP浓度在 10 30mmol·L- 1范围内 ,PNPP水解活性提高2 1% 2 8% .动力学分析表明 ,酶切处理后PNPP水解的Km值也由 2 .6 6降低到 1.4 4mmol·L- 1;同时发现酶切处理降低了钒酸钠对ATPase的抑制效应 ,显示胰蛋白酶处理可能改变了磷酸酶结构域的结构而影响ATPase的催化效应 ,暗示C 末端调节着磷酸酶结构域的结构和功能 .     

P185c—erBb—2胞外区结构域在大肠杆菌BL21中的表达分析

以PET－HT为表达载体,探讨在大肠杆菌BL21中高效表达P185c-erBb-2胞外区结构域蛋白的最佳条件,经SDS－PAGE与软件分析,确定其最佳表面时间为3h,当菌液密度为0．7时,所表达的蛋白含量最高,而PTG在一定浓度范围内对表达含量不产生影响。     

冷休克蛋白及冷休克反应

冷休克蛋白是从真细菌中发现的，它不仅作为ＲＮＡ分子的伴侣蛋白，同时还与细菌的多个生理过程有着密切的联系，如：对低温的适应、细胞生长的控制、营养胁迫等．冷休克蛋白引起冷休克反应的分子调控发生在转录和翻译两个水平上．     

大鼠核糖体28S RNA中Sarcin/Ricin结构域在高压力下的稳定性

在２１００ｂａｒ高压力下,大鼠核糖体２８ＳＲＮＡ中的Ｓａｒｃｉｎ／Ｒｉｃｉｎ结构域是稳定的,同时还说明在高压力下,ＲＮＡ－Ｎ－糖苷酸仍保持水解Ｓａｒｃｉｎ／Ｒｉｃｉｎ结构域的活力。     

人红细胞生成素受体膜外结构域在大肠杆菌中的融合表达及其纯化

将插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｂｅ的人红细胞生成素受体ｃＤＮＡ,用ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶解,分离得到的基因片段,插入到经ＥｃｏＲＩ和ＲａｍＨＩ消解的表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ中,得到了重组表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ＨＥＰＯＲ。生组质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ｈＥＰＯＲ含有ｔｑｃ启动子,ＥＰＯＲ膜外结构域基因５’端与谷胱甘肽转移酶编码基因融合,阳性重组子在大肠村菌中经ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ｈＥＰＯＲ,重组表达菌裂解     

应用天然蛋白质片段构建蛋白质分子机器的初步尝试

根据对蛋白质分子结构可塑性和结构重组的理解,本文介绍了如何以来源于不同蛋白质的功能片段和人为设计的多肽片段为部件,组装出一组多结构域融合蛋白。在体外和体内实验中,这些多结构域融合蛋白表现出了我们所期待的特定功能。它们将有可能发展成为一系列新型抗菌和抗肿瘤药物。与现用药物相比,它们的效力更高,靶向性更强,更为安全。它们有可能会很快地代替现用药物,为人类创造更好的福祉。而以这些雏型为基础,则有可能构建出具有更理想功能的蛋白质分子机器。     

“朊病毒”的定名可以沿用

将 ｐｒｉｏｎ的中文名称为“朊病毒” ,自 2 0世纪 80年代起见国内诸文献 ,至今已被广泛使用。用今天的标准来衡量 ,“朊病毒”的用法也许有瑕疵 ,但并非十分不妥。按照“尊重约定俗成”的定名原则 ,笔者赞成继续沿用“朊病毒”的定名。科学技术在不断发展 ,我们对ｐｒｉｏｎ的认识也不断深入。然而一个名词一经广泛使用 ,只要不产生歧义 ,不导致与其他名词相混淆 ,一般不应轻易改变。当初曹天钦先生建议使用“朊病毒”的定名 ,是经过深思熟虑的 ,十多年后的今天 ,尽管已经提出“构象病”(ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｄｉｓｅａｓｅ)的理…