转基因烟草分析COP1亚细胞定位及各结构域的功能

植物体内存在着非常精巧的光信号调节系统以适应外界光环境的变化，COP1蛋白是这个调节系统中介导光信号转导的一个关键因子。利用从豌豆克隆的COP1的cDNA，根据豌豆COP1的蛋白结构设计了4种不同的结构域基因片段，构建了这4个片段及COP1全基因与GFP融合基因的植物表达载体，通过根癌农杆菌分别转化烟草。利用由原核表达的GFP－COP1融合蛋白制备的抗体和GFP基因片段制成的放射性探针，通过Southern和免疫印迹实验证实各种外源融合基因在转基因烟草中均获得了组成型的变化，发现：（1）烟草内源COP1的分子量为76ku，在各器官组成型存在，光照条件对其含量影响不大；（2）COP1的细胞核定位域在其核－质分配的调节中起着关键作用。含有核定位域的目的蛋白在叶表皮细胞中的亚细胞定位受光调节，而在根细胞则组成型定位于细胞中；（3）Couiled-coil域对COP1的功能十分重要，而锌指结构域起辅助作用；（4）WD－40重复结构域起着关键作用，但单独的WD－40重复结构域不影响光形态发生；（5）过量表达COP1不仅导致烟草地上部分光形态发生受抑制，而且还导致短的簇生根发生。相反，过量表达不含WD－40重复结构域的COP1则促进地上部分光形态发生，并导致根部伸长，但无侧根。COP1－COP1相互作用不仅可以在细胞核中发生，而且可在细胞质中发生。这一实验系统为今后深入研究COP1的结构与功能打下了一个良好的基础。     

布鲁菌wzt基因的原核表达及生物信息学分析

利用PCR技术克隆wzt基因并对其进行了原核表达,采用SDS-PAGE和Western Blotting进行了检验,运用Clustalx1.83和Mega5.0进行了同源性分析,在此基础上,利用Discovery Studio 2.5软件进行了结构预测,探讨了wzt基因表达产物的分子基本特征.结果表明:本研究克隆了756bp的目的片段,经原核表达得到了相对分子质量约28 000的目的蛋白,该蛋白经HisTrapTMFF亲和层析柱纯化以及Western Blotting鉴定,证明为具有His标签的外源蛋白;系统树分析表明,布鲁菌wzt蛋白属内高度保守;结构分析表明,其具有8个α螺旋、7个β折叠片层结构域.     

抗朊病毒药物筛选模型的研究进展

通过抗朊病毒药物筛选模型来筛选治疗以疯牛病为代表的朊病毒疾病的药物是目前国际上研究热点.结合作者正在进行的抗朊病毒药物筛选的研究,主要介绍了国际上流行的几种抗朊病毒药物筛选模型的原理与方法以及研究最新进展.     

海洋放线菌代谢产物、非核糖体多肽、腺苷化结构域研究进展

概述了海洋放线菌代谢产物、非核糖体多肽、腺苷化结构域的研究进展.     

计算机辅助的豆壳过氧化物酶分子序列分析

从生物信息学角度 ,利用生物大分子数据库 (GENEBANK、SWISS PROT和PDB)及软件技术 (DNASIS和PROSIS)对豆壳过氧化物酶分子进行了序列分析及结构预测 ;通过与其它植物及真菌来源的过氧化物酶的比较研究 ,分析了结构保守性与功能域的关系 ,从分子水平探讨了植物过氧化物酶超家族的活性位点局部保守序列、折叠模式及序列结构域特征 .     

牛朊病毒正常成熟蛋白的高效表达和二级结构分析

利用ＤＮＡ重组技术,将牛朊病毒正常成熟蛋白基因插入表达载体ｐＥＴ３０ａ,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＥＤ３）中高效表达。将表达产物（包涵体）用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解,用阳离子交换柱纯化,纯化产物复性后,进行质谱、圆二色谱（ＣＤ）以及Ｆｏｕｒｉｅｒ变换红外光谱（ＦＴＩＲ）分析。结果表明,所得牛肼病毒正常成熟蛋白的分子量为２３６３０ｕ,其二级结构主要由α螺旋构成,含少量β折叠。     

Pax3a基因Homeobox domain结构域敲除斑马鱼的跨代遗传观察

目的:检测Pax3a的Homeobox domain结构域敲除后斑马鱼基因型和表型的稳定性.方法:利用CRISPR/Cas9技术双靶点整体敲除斑马鱼中Pax3a的Homeobox domain结构域,并建立F0代和F1代敲除斑马鱼.同时比较靶基因敲除的基因型和表型跨代遗传的影响.结果:两年的跟踪观察显示F1代Homeo...     

大豆中NBS类抗病基因同源序列的分离与鉴定

植物抗病原克隆研究对于植物抗病育种和抗病机制的理解具有重要意义。根据预测结构域可将已知植物抗病基因分为4类,其中以NBS（nucleotide binding site)结构域为主。NBS结构域包括P环（激酶1a)、激酶2a和激酶3a。这为利用同源技术克隆植物抗病基因提供了可能。根据烟草抗花叶病毒N基因和拟南芥抗丁香假单孢杆菌RPS2基因设计兼并引物,从大豆抗花叶病毒品种科丰1号的基因组中扩增获得358个克隆,鉴定出4个能读的且与抗病基因NBS结构域同源的片段：KNBS1,KNBS2,KNBS3和KNBS4.Southern杂交表明NBS类抗病基因在大豆中为多拷贝家族;RFLP分析将KNBS4定位于F连锁群,而NBS2则与大豆抗花叶病毒基因Rsa的SCAR标记同位于J连锁群。Northern分析表明KNBS2类在大豆的根、茎和叶中为低丰度组成型表达,这为最终克隆大豆抗病基因打下了基础。