EE2和Flu影响斑马鱼精巢发育和精子发生的差异性机制

用150 ng·L-1环境雌激素乙炔基雌二醇(17α-ethinylestradiol，EE2)、300 μg·L-1环境抗雄激素氟他胺(Flutamide，Flu)单独处理以及150 ng·L-1 EE2与300 μg·L-1 Flu联合处理对斑马鱼(Danio rerio)雄性成鱼进行了30 d浸浴处理，并用组织学的方法检测了上述物质对斑马鱼精巢发育和精子发生的影响；同时，采用定量RT-PCR的方法研究了EE2和Flu影响斑马鱼精子发生的分子差异。组织学结果显示，EE2处理后斑马鱼精巢壁变厚，生殖细胞大量丢失；Flu处理后精子细胞数量下降，出现空腔，早期生殖细胞数量有增加的趋势；联合处理组斑马鱼精巢生殖细胞数量急剧减少，空腔化严重。定量RT-PCR结果显示，所有药物处理均能显著下调鱼类发育和繁殖相关转录因子基因(dmrt1、sf1)和生殖细胞标记基因(dmc1、nanos1)的表达(p<0.05)；EE2单独处理、EE2与Flu联合处理还能显著下调鱼类类固醇合成酶基因p450-11β、cyp19a1a、cyp17α1和cyp17α2的表达(p<0.05)，Flu单独处理只显著下调了p450-11β的表达水平(p<0.05)，表现出一定的分子差异。研究提示EE2、Flu及两者联合处理均严重干扰斑马鱼精子发生过程，导致生殖细胞数量明显下降；上述药物对斑马鱼类固醇合成及配子发生相关基因表达的影响既有相似之处，也有明显不同。
     

悬浮物对斑马鱼胚胎发育的影响

为探究水中悬浮物含量对斑马鱼(Danio rerio)胚胎发育的影响，挑选发育正常的斑马鱼胚胎分为CK组、T1组、T2组和T3组，分别在悬浮物质量浓度为0、10、100和1 000 mg·L -1的水体中培养168 h，每12 h记录胚胎孵化率和胚胎或仔鱼的死亡率，在实验进行72 h后统计仔鱼心率，在实验进行168 h后统计仔鱼畸形率，并于实验进行4、12、24和48 h后拍照观察胚胎的发育情况。结果显示：1) 与CK组相比，T1组、T2组和T3组斑马鱼胚胎的累计孵化率在实验进行60 h后有统计学意义上的下降(p<0.05)，且T3组的该项指标在实验进行72 h后直至实验结束均有统计学意义上的下降(p<0.05)；2) 在实验进行120 h后直至实验结束，T3组与CK组相比仔鱼的累计死亡率均有统计学意义上的上升(p<0.05)；3) 在实验进行72 h后，T1组、T2组和T3组与CK组相比仔鱼心率有统计学意义上的下降(p<0.05)；4) T3组与CK组相比仔鱼畸形率有统计学意义上的上升(p<0.05)；5) 与CK组相比，T1组、T2组和T3组的胚胎发育较为迟缓。研究结果提示水体中悬浮物质量浓度过高可导致斑马鱼胚胎发育迟缓、胚胎孵化率和仔鱼心率下降、仔鱼的死亡率和畸形率上升。     

EE2抑制斑马鱼雌性内源雌激素合成酶的表达

为探讨乙炔基雌二醇(EE2,17α-ethynylestradiol)诱导斑马鱼(Daniorerio)雌性成鱼卵母细胞发育障碍的机制,初步研究了斑马鱼雌激素和孕激素合成酶相关的基因P450c17-I、P450c17-II和cyp19a1a的组织表达模式和在滤泡发育过程中的表达模式,并用定量RT-PCR的方法对上述基因在EE2处理条件下的表达变化进行了检测。结果发现P450c17-I、P450c17-II基因均主要表达于斑马鱼雌雄性腺,而在滤泡发育过程中均呈不同程度下调趋势;EE2处理后雌性卵巢中P450c17-I和cyp19a1a基因表达均显著上升(p<0.05),而P450c17-II基因的表达则没有显著变化。研究推测EE2可能通过上调内源雌激素的水平抑制后期卵母细胞的生长发育。