NGF诱导PC12细胞神经元样细胞分化

目的:建立PC12细胞的神经元样细胞分化模型,并探讨ERK蛋白在PC12细胞神经元样细胞分化中的可能机制.方法:以10、20、50 g/L的NGF(NGF溶于PBS,培养基中PBS的终浓度不超过2%)培养PC12细胞,应用倒置相差显微镜、显微镜测微尺及流式细胞仪鉴定PC12细胞的分化,以确定NGF使用剂量.运用免疫印迹检测不同浓度、不同作用时间时ERK蛋白在PC12细胞中的表达,并进行统计学分析.结果:随NGF剂量的升高,PC12细胞的体积、最长突起长度和突起数目均会增大或增多。统计学分析证明50 g/L的NFG作用48 h足以诱导PC12细胞的交感神经样改变。尽管ERK总蛋白水平在NFG作用前后无明显改变,但在NFG作用5 min后磷酸化的ERK蛋白水平即显著升高,达到峰值,并持续约1 h.50 g/L的NFG作用于PC12细胞48 h可使细胞发生明显的G1期阻滞.结论:PC12细胞可在NGF作用下出现交感神经样改变,并且细胞的分化程度依赖于NGF的使用剂量和作用时间.在NGF诱导的PC12细胞神经元样分化中ERK蛋白的磷酸化对NGF呈现剂量和时间依赖性,提示ERK蛋白在分化的早期发挥重要作用.     

Netrin蛋白家族的进化分析

神经突起生长导向因子(Netrin)蛋白家族是分泌型蛋白质,其通过与不同的受体相互作用,在神经发育过程中起轴突导向和细胞迁移中发挥着双重导向功能.本文分别对涉及到细胞相互作用的Netrin基因家族的起源与进化进行研究.以进化史不同阶段的代表物种作为研究对象,通过使用MEGA的邻接法和似释然法分别对Netrin基因家族构建系统发育树;使用PAML 4.7工具以核苷酸序列作为分析材料进行选择压分析,筛选出发生正选择作用的位点;使用DIVERGE3.0软件对Netrin氨基酸序列进行功能分化分析,筛选出Ⅰ型和Ⅱ型功能分化位点.     

细胞凋亡的分子机理

细胞凋亡是一种细胞自主性死亡现象,与维持生物体正常生理功能和一些疾病的发生密切相关.最近发现,细胞凋亡的主要原因是毒物、射线等死亡信号通过死亡诱导信号复合体直接激活一组被称为caspases的蛋白酶系统.同时发现,死亡信号还可通过线粒体和一些癌基因相关蛋自如Bcl-2、P53、PML间接影响caspases的活性.最终影响凋亡的发生.     

中药柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内VCR蓄积的影响

目的　测定中药柴胡(BupleurunChineseDC,BCDC)提取物对人肝癌细胞BEL 7402细胞内VCR蓄积的影响,以探索柴胡逆转BEL 7402细胞多药耐药的机制.方法　高效液相色谱法测定BCDC作用于BEL 7402后细胞内VCR蓄积情况的变化.结果　柴胡可使人肝癌细胞BEL 7402细胞内VCR浓度升高(P<0.01).结论　柴胡可以增加VCR在BEL 7402细胞内的积聚浓度,部分逆转BEL 7402细胞的MDR.     

人脐带静脉血管内皮细胞的体外培养及其凋亡的研究

本文从提取生长因子入手，建立人脐带静脉血管内皮细胞系，用电镜进行了细胞鉴定，然后用去除生长因子（FGF和胎牛血清）的方法诱导细胞凋亡，利用荧光显微技术、DNA凝胶电泳、电镜技术和流式细胞分光光度技术，研究了血管内皮细胞凋亡过程中超微结构和细胞周期的变化。发现去除生长因子3h后，在细胞发生明显的DNA片段化和形成凋亡小体的同时，细胞核与细胞质的超微结构发生了明显的变化，S期细胞显著减少，G1期无明显变化，G2细胞显著增多，说明用去除生长因子的方法诱导血管内皮细胞凋亡时，细胞从G2期脱离细胞周期进入凋亡程序，本文的人血管内皮细胞在体外的成功培养和对该细胞凋记的研究对深入研究其凋亡的分子调控机制具有重要的参考价值。     

伊贝母细胞悬浮培养的研究

研究了伊贝母细胞悬浮培养过程中接种量、培养方式和激素浓度对细胞生长的影响；测得细胞生长周期为１９～２４ｄ；分析了培养液的ｐＨ、蔗糖浓度、电导率和Ｄｏ变化的原因。鉴定了悬浮培养细胞中含有生物碱，其总生物碱和西贝素含量均高于栽培鳞茎。     

玄武湖水、金川河水诱发的蚕豆根尖细胞微核

玄武湖、金川河分别是南京著名的风景地和重要的环城河流，多年来玄武湖、金川河的水质污染越来越引起人们的重视．南京市内不少工厂的工业废水及居民的大量生活污水流入其中，特别是有毒物质，包括酚、苯、汞、氰化物、直链烷基苯磺酸钠、有机磷等．这些物质对人体健康的远期效应倍受人们关注．为此对玄武湖水、金川河水引起蚕豆根尖细胞染色体损伤所产生微核的情况进行了研究，就二处水样对生物体的致突变性及对人体健康的潜在危害进行了讨论     

Synthesis of Ta C and Ta_2C from tantalum and graphite in the laser-heated diamond anvil cell

The pressure dependence of the onset of the formation of Ta C and Ta2 C from the elements has been investigated by in situ X-ray diffraction and pyrometry.Ta C has been synthesized by the reaction of Ta and graphite at pressures between 8.6 and 14.3 GPa and at temperatures up to 2,300 K using a laser-heated diamond anvil cell. The products were characterized by X-ray diffraction. Ta and graphite begin to react around 1,100 K at ambient pressure conditions, and the reaction temperature increases with increasing pressure. A linear extrapolation of these data is consistent with recent observations of the formation of Ta C at 90 GPa and 3,600 K. We show that diffusion of carbon into tantalum significantly changes the lattice parameter of up to 2 % in the pressure range of up to19 GPa. In some experiments, Ta2 C was formed concomitantly. The experimentally determined bulk modulus of Ta2 C is B0;exp：= 286（5） GPa. Other tantalum carbide phases were not observed.     

Behavior of MC3T3-E1 Osteoblast Cultured on Chitosan Modified with Polyvinylpyrrolidone

The physical and chemical properties of four kinds of modified chitosan materials made by blending chitosan with polyvinylpyrrolidone （PVP） were investigated. All four of these modified chitosan materials were hydrophilic with water contact angles ranging from 59°to 69°. Fourier transform-infrared spectra of the modified materials showed a new band at 1288 cm^-1, implying formation of a surface physical interpenetrating network structure. Enzyme linked immunosorbent assay results indicated that much less fibronectin was adsorbed on the modified materials than on only chitosan. The viability of MC3T3-E1 osteoblasts cultured on the materials was assessed by 3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl- 2H-tetrazolium bromide assay. The results show that adding PVP10000 into the chitosan promotes adhesion of MC3T3-E1 osteoblasts on the modified materials, but has no effect on cell growth and proliferation; while adding PVP40000 reduces cell adhesion, growth, and proliferation. The results suggest that the increased hydrophilicity of the material surface does not always improve its biocompatibility, which will influence the selection and design of biomaterials.     

GFP标记的GDNF重组腺病毒载体的构建和体内外表达

通过构建绿色荧光蛋白(GFP)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)共表达的腺病毒载体,讨论其在治疗脊髓和脑有关神经系统疾病的潜在应用价值,了解腺病毒载体在大鼠体内的分布及在体外分泌外源基因产物能力,并对其生物安全性作了初步考察,为GDNF重组腺病毒载体在临床和基础研究中的应用作了一定准备．