表达结核分枝杆菌休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白

利用大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pDE22,构建能够表达结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis, M.s）。采用聚合酶链反应（PCR）方法,从MTB H37Rv基因组DNA中扩增MTB休眠相关抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段并克隆入pMD18-T载体,序列测定正确后分别亚克隆入大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pDE22,将重组载体pDE22-Rv2031c-Rv2626c电穿孔导入M.s,42℃热诱导表达目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western-blot分析。利用PCR方法扩增获得MTB休眠相关抗原Rv2031c和Rv2626c基因片段,大小分别为435bp和480bp,基因测序与Genebank公布的基因序列完全一致。SDS-PAGE分析结果表明重组载体pDE22-Rv2031c-Rv2626c电穿导入M.s后能够特异性表达目的蛋白,大小约为35kDa,与理论值相符。Western-blot鉴定结果表明抗Rv2031c和抗Rv2626c的单克隆抗体均能够与目的蛋白发生特异性的反应,大小相一致。成功构建表达MTB休眠相关抗原Rv2031c-Rv2626c融合蛋白的重组M.s,并命名为Rv2031c-Rv2626c-rM.s,为其用于结核新型疫苗的研究奠定了基础。     

重度子痫前期患者与正常足月妊娠妇女外周静脉血中可溶性HLA-G水平比较研究

为测定重度子痫前期患者与正常足月妊娠妇女外周静脉血浆中可溶性HLA-G的含量,探讨HLA-G在子痫前期发病中的意义,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定33例重度子痫前期患者及33例正常足月妊娠妇女外周静脉血中可溶性HLA-G水平.重度子痫前期组外周静脉血中可溶性HLA-G水平为24.04±16.01 U/mL,正常妊娠组为38.38±22.15 U/mL,两组比较,差异有统计学意义(P﹤0.05).说明重度子痫前期患者外周静脉血中可溶性HLA-G水平较正常足月孕妇明显降低,提示HLA-G水平的降低与子痫前期发病有关.     

表达抗PD-1抗体的溶瘤病毒在结肠癌腹腔移植瘤模型中的抗肿瘤作用

为了研究表达小鼠抗PD-1抗体(VT1093M)的溶瘤病毒对结肠癌腹腔移植瘤模型的抗肿瘤作用,利用BALB/c小鼠成瘤的小鼠结肠癌CT26-luc细胞株建立了结肠癌腹腔移植瘤模型。接种后第8天进行分组,设置生理盐水(normal saline, NS)组、病毒VT09X组和VT1093M组,每组5只,注射剂量为2.5×10⁷ pfu/250μL,NS注射250μL,每隔一天注射一次,共注射5次。末次注射后6 d,脱颈处死小鼠,提取外周血中CD45⁺细胞和腹水细胞,进行体外杀伤实验。治疗组初次出现荧光消失后第13天,进行再挑战实验。结果表明,造模实验确定最佳接种条件为200μL的2.5×10⁶个/mL细胞悬液;药效实验中,VT09X组和VT1093M组较NS组具有明显的肿瘤抑制效果,VT1093M组治疗期间出现肿瘤消失情况,较VT09X组抑瘤效果明显,但差异无统计学意义;再挑战实验中,VT1093M组均未出现肿瘤再次生长;在体外杀伤实验中,注射病毒组的外周血CD45⁺细胞在靶效比为1∶40时对CT26...     

1,25(OH)_2VD_3在过敏原特异性免疫治疗花粉过敏哮喘中的应用

以1,25(OH)₂VD₃为佐剂制备软叶针葵花粉变应原疫苗,以小鼠致敏哮喘模型为研究对象进行特异性免疫治疗.通过检测小鼠气道高反应性、血清中特异性抗体、细胞因子以及肺组织病理学切片等指标对治疗模型的构建进行评价,探讨1,25(OH)₂VD₃在过敏原特异性免疫治疗花粉过敏哮喘免疫机制中的作用.结果表明:以1,25(OH)₂VD₃为变应原疫苗能有效抑制花粉特异性IgE的产生和Th2细胞因子IL-4分泌,促进封闭性抗体IgG2a产生和Th1细胞因子IFN-γ的分泌,增加耐受性细胞因子IL-10生产,使Th2反应向Th1反应转变.1,25(OH)₂VD₃在花粉过敏性哮喘治疗中能大幅提高过敏原特异性免疫治疗的疗效.     

SDS在HCV基因工程抗原包被中的应用研究

在间接ELISA法检测HCV抗体过程中,通过使用含有十二烷基硫酸钠（SDS）的包被液对HCV基因工程抗原固相化,发现使用SDS提高了HCV间接ELISA法诊断试剂检测的阳性标本和阴性标本的偏比,改善了反应模式,为改善HCV-ELISA法诊断试剂的质量提供了有效途径.     

甲醛不同染毒剂量对小鼠免疫功能的影响

为了研究甲醛(formaldehyde,FA)染毒剂量对机体免疫功能的影响规律,小鼠分别以40、400 mg/kg剂量吸入FA 14 d后,接种传染性法氏囊疫苗(infectious bursal disease virus,IBDV),进行体重、脏器系数、淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)和体液免疫水平的检测。结果为FA吸入40 mg/kg染毒小鼠体重下降最显著,肺脏的脏器系数极显著减小,NK细胞对靶细胞的杀伤能力显著下降,c AMP水平显著升高,IBDV特异性抗体水平受到显著抑制。结果表明FA吸入性染毒对肺脏损伤严重、抑制IBDV抗体水平;高剂量染毒与低剂量染毒相比其抑制机体产生体液免疫影响更大,导致免疫功能紊乱、产生较强的免疫毒性影响。     

微波对不同浓度EDTA骨脱钙的影响

目的:探索微波在持续高沸状态下对不同浓度EDTA骨脱钙的影响;方法:对不同浓度的EDTA脱钙液进行恒定功率处理,常规制样染色。结论:持续高沸状态下EDTA脱钙与单纯室温相比无明显差异,采用10 EDTA液进行骨组织脱钙效果理想。     

基于铜配合物和抗体共固定修饰电极的甲胎蛋白安培免疫传感器

研制基于甲胎蛋白抗体（Ab-AFP）和巯基丁二酰胺铜(II)(CuL)共固定修饰金电极(Au| Ab-AFP/Al2O3/CuL)的免疫传感器,用于测定人血清中AFP抗原水平.该免疫传感器是利用自组装和溶胶凝胶技术,将AFP抗体分子固定在CuL自组装修饰金电极表面制备而成.电极表面的CuL具有电活性,对H2O2有良好的电化学还原催化.当该免疫传感器在含AFP样品的溶液中于28 ℃温育30 min后,AFP抗原与Ab-AFP抗体分子的免疫结合物导致CuL的电子传递被部分阻碍,使CuL对H2O2 电催化还原     

“神七”搭载超抗原菌种

神舟七号载人飞船搭载了沈阳协合集团超级抗原生物菌种。经过空间搭载的生物菌种可利用太空的特殊环境,如太空微重力、交变磁场、宇宙射线、剧烈温差、高真空等因素,增强菌种的活性和表达量。     

不同规格刺参的非特异性免疫活性研究

同一养殖池塘不同规格刺参的非特异性免疫活性为:小规格刺参的体腔细胞数和体腔液的溶细胞活性显著大于大规格刺参（P< 0.05）;随着刺参的生长,小规格刺参的溶菌酶活性逐渐增加,但与中、大规格的刺参没有显著性差异;其他免疫指标包括吞噬杀伤、COP、ACP及NOS活性等都与体重呈正相关,但差异不显著．结果表明,不同规格刺参的非特异性免疫活性虽有差别,但并不影响其生长．