用合成多肽免疫制备抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的研究

介绍一种用合成的多抗原肽免疫动物来制备与天然人心肌肌钙蛋白Ⅰ特异反应的单克隆抗体新方法。从人心肌肌钙蛋白ⅠＮ端，根据多肽分子氨基酸的亲水性值选出了ＰＡＰＡＰＩＡＡＡＳＳ１１个氨基酸片段。将它用有八位点的赖氨酸核连接成多抗原肽后，以它为抗原用Ｒｉｂｉ佐剂进行免疫。将小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，获１１株抗此多肽的杂交瘤细胞株。对其中７株属于ＩｇＧ亚类的细胞进行了ＥＬＩＳＡ分析，发现这７株细胞均与天然的人心肌肌钙蛋白Ⅰ呈特异性反应，而不与人骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ发生交叉反应。利用３Ａ２细胞株所分泌的单克隆抗体对急性心肌梗塞患者、手术患者和正常人的血样进行了ＥＬＩＳＡ检测，证明它只对心肌梗塞患者血清发生阳性反应。获得了较为满意的结果。此细胞株所分泌的抗体有望用于心肌梗塞临床检测。     

基于三甲基醌的近红外荧光探针用于心肌黄酶的检测及生物成像研究

心肌黄酶是动物组织中常见的一种蛋白酶,它能阻止各种自由基引发的超氧阴离子的产生,从而保护细胞免受损伤.由于心肌黄酶在多种肿瘤组织中过度表达,使得其成为早期肿瘤诊断及治疗的重要生物标记物.利用荧光传感技术的高特异性、高灵敏度及可实时原位检测的特点,设计合成了一种基于三甲基醌的近红外荧光探针MITZ 1.该探针在还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸存在的条件下与心肌黄酶通过专一性反应释放出荧光团,溶液在770 nm处荧光值增加了近5倍,通过明显的荧光信号响应检测出体系内心肌黄酶含量的变化.由于MITZ 1具有选择性高、毒性低和检测限低等特点,该探针被成功应用于肿瘤细胞（HeLa）和秀丽隐杆线虫内源及外源性心肌黄酶的生物成像检测.     

雌激素对心肌Nrf2及GST和GCL的影响

雌激素的抗氧化作用与核转录相关因子(Nrf2)信号分子及其Nrf2/ARE信号路径有密切关系.Nrf2/ARE在调节机体抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶的表达过程中起着非常重要的作用.利用原代培养心肌细胞缺氧/复氧模型,在雌激素预孵化条件下,研究了雌激素对谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)表达及Nrf2核转移的影响,结果表明:雌激素能够明显增加GST和GCL的表达,促进Nrf2核转移.雌激素通过促进Nrf2入核及GST和GCL的表达发挥抗氧化作用.     

中等强度耐力训练后心肌损伤标记物及能量代谢通道变化的机制研究

探讨了中等强度耐力训练后大鼠心肌损伤标记物心肌肌钙蛋白、脑钠肽和能量代谢通道哺乳动物雷帕霉素靶蛋白和AMP依赖的蛋白激酶信号通路变化的作用机制.利用健康雄性SD大鼠60只,随机分为耐力运动组和对照组,建立大鼠耐力运动型心肌肥大模型.使用免疫组化结合计算机图像处理技术,对心脏形态结构以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的分布和表达进行观察和测定;使用real-time PCR技术,对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白和AMP依赖的蛋白激酶的mRNA表达进行测定;使用ELISA检测方法,对大鼠血清心肌肌钙蛋白T、心肌肌钙蛋白I、脑钠肽的表达进行测定.8周中等强度耐力训练后:E组大鼠心脏组织未见形态学病理性改变;E组大鼠的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白免疫反应阳性面积和光密度显著上调(P0.05);E组大鼠AMP依赖的蛋白激酶的mRNA表达未见显著改变,而哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的mRNA表达显著上调(P0.05);E组大鼠心脏血浆脑钠素、血浆肌钙蛋白T和肌钙蛋白I表达升高,但未见显著变化.结果表明:8周中等强度耐力训练导致的耐力训练型心肌肥大未发生心功能恶化和慢性心衰;训练后心肌肌钙蛋白和脑钠肽表达升高并不能直接反映心肌细胞坏死和心功能恶化,其变化应是由心脏形态结构功能重塑造成的;8周的中等强度耐力训练未造成大鼠心肌细胞能量环境的改变;中等强度耐力训练中,心肌哺乳动物雷帕霉素靶蛋白和AMP依赖的蛋白激酶信号通路的表达与骨骼肌存在显著差异.     

SHR血压升高前后心肾脑VEGF的变化

运用免疫组化SP法及计算机图像分析技术,对SHR大鼠幼年(6周,n=15)、成年(12月,n=15),以及正常血压对照组大鼠京都Wistar(Wistar-Kyoto,WKY)幼年(6周,n=10)、成年(12月,n=10),4组大鼠心肌、肾脏、大脑切片VEF蛋白的表达水平进行了定量分析;探讨了自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensiverat,SHR)血压升高前后心肌、肾脏、脑内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平的变化及其意义;发现在4组大鼠心脏各部、肾小球内、大脑皮质等处均观察到散在分布的VEGF免疫反应阳性细胞,阳性反应物呈棕色颗粒状,位于胞浆中。12月龄SHR组表达水平较其它三组均高(P<0.05),阳性细胞数多且灰度值低(P<0.05);而6周龄、12月龄WKY及6周龄SHR三组间表达水平差异无显著性(P>0.05)。结果表明随着成年SHR大鼠血压的升高,心肌、肾脏、脑内VEGF蛋白的表达水平上调,可能是对高血压所致的靶器官缺血缺氧的一种代偿反应,对微血管的新生和存活有积极意义。     

干细胞与心肌再生

由于成年心肌细胞通常不能再生,严重的心肌损伤会导致心肌不可逆的重构坏死, 从而发生心功能失调. 干细胞再生治疗为心肌再生提供了很好的策略. 为了寻找合适的干细胞类型, 促进心肌再生, 有效改善心功能, 需要更好地了解心肌修复和再生的分子基础. 已有研究发现多种干细胞可促进心肌再生. 描述了骨髓干细胞的促血管新生及心肌分化的能力在心梗治疗中的作用, 还讨论了心脏侧群干细胞以及诱导型多能干细胞在心肌再生中的作用和分子机制. 所阐述的最新数据有利于拓展干细胞治疗的有效潜能及临床影响.     

黄芪多糖对力竭运动大鼠心肌细胞凋亡及BcL-2、Bax蛋白表达的影响

为了探讨黄芪多糖(APS)对力竭运动大鼠机体的保护作用,通过建立大强度力竭运动大鼠模型,选取成年健康雄性SD大鼠24只,随机分为安静对照组,运动组和运动加药组,运动组和运动加药组按照训练模型进行为期6周的耐力训练,最后1次训练进行1次力竭运动,随后取心肌组织并进行样本处理.检测大鼠心肌MDA含量,用缺口末端标记法(TUNEL法)及免疫组织化学法检大鼠心肌细胞凋亡指数(AI )及BcL-2、Bax蛋白表达的变化.结果表明：运动组MDA 含量、AI和BcL-2、Bax蛋白表达水平均明显高于安静对照组(P<0.05);与运动组比较,运动加药组MDA含量,AI与Bax 蛋白表达水平均下降,而BcL-2蛋白表达水平显著增高(P<0.05).黄芪多糖可有效抑制力竭运动大鼠心肌细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调BcL-2 和下调Bax蛋白表达水平有关.