全文获取类型
收费全文 | 3349篇 |
免费 | 100篇 |
国内免费 | 284篇 |
专业分类
系统科学 | 19篇 |
丛书文集 | 87篇 |
教育与普及 | 191篇 |
理论与方法论 | 43篇 |
现状及发展 | 11篇 |
综合类 | 3382篇 |
出版年
2024年 | 7篇 |
2023年 | 48篇 |
2022年 | 65篇 |
2021年 | 62篇 |
2020年 | 63篇 |
2019年 | 73篇 |
2018年 | 31篇 |
2017年 | 46篇 |
2016年 | 77篇 |
2015年 | 93篇 |
2014年 | 165篇 |
2013年 | 151篇 |
2012年 | 202篇 |
2011年 | 215篇 |
2010年 | 197篇 |
2009年 | 269篇 |
2008年 | 338篇 |
2007年 | 248篇 |
2006年 | 206篇 |
2005年 | 179篇 |
2004年 | 165篇 |
2003年 | 126篇 |
2002年 | 150篇 |
2001年 | 128篇 |
2000年 | 113篇 |
1999年 | 62篇 |
1998年 | 69篇 |
1997年 | 40篇 |
1996年 | 31篇 |
1995年 | 31篇 |
1994年 | 16篇 |
1993年 | 11篇 |
1992年 | 18篇 |
1991年 | 13篇 |
1990年 | 10篇 |
1989年 | 10篇 |
1988年 | 3篇 |
1987年 | 1篇 |
1983年 | 1篇 |
排序方式: 共有3733条查询结果,搜索用时 724 毫秒
961.
杨建华 《邵阳学院学报(自然科学版)》2004,1(1):51-53
本文介绍了高强化超轻型单缸系列风冷柴油机的主要技术规格,设计思想,结构与技术特点,性能指标及其应用范围。 相似文献
962.
克隆了矮牵牛花特异表达基因CHSA启动子,并定向插入到已含有花色调节基因Lc的质粒pBI121中,取代原有的CaMV 35S启动子.所构建的新表达载体可用于花色改良研究. 相似文献
963.
猪繁殖和呼吸综合征病毒福建毒株ORF5的序列分析及原核表达 总被引:1,自引:0,他引:1
根据猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)已发表的核苷酸序列,设计了一对特异性引物(p1/p2),用RT-PCR扩增PRRSV福建毒株FJ-1的全长糖基化囊膜蛋白基因(ORF5),将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,筛选阳性重组质粒进行序列测定与分析.再设计另一条引物(p3)与p2从重组载体pUCm-T-ORF5中扩增出缺失了N端30个氨基酸残基的tGP5的编码序列tORF5,克隆入表达载体pGEX-4T-3后在大肠杆菌中表达.结果表明,FJ-1毒株ORF5基因为603 bp,编码200个氨基酸,与北美型参考毒株VR-2332、CH-1a及欧洲型参考毒株LV的氨基酸同源性分别为87%、89%和53%,推定福建毒株FJ-1属于北美型毒株.原核表达产物经过SDS-PAGE及Western Blot分析,证实为GP5与谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白.分子量为41 kDa.表达量约占菌体蛋白的15%,主要以包涵体形式存在. 相似文献
964.
II型猪圆环病毒(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原.本研究用PCR以构建的PCV2 ORF2重组质粒pBS-T-ORF2为模板,扩增截短的ORF2(tORF2)基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒pGEX-tORF2并转化大肠杆菌BL21(DE3).经SDS-PAGE及Western blot鉴定,成功表达了谷胱甘肽S转移酶(GST)融合的tORF2,重组蛋白分子量约为45ku,表达量约为菌体总蛋白的20%,重组蛋白具有良好的免疫学活性.用tORF2重组蛋白对20份临床猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)阳性猪血清进行Western blot检测,有4份(20%)血清显示PCV2抗体阳性,说明PCV2与PRRSV存在共同感染现象.本研究初步证明表达的tORF2重组融合蛋白可以应用于临床检测. 相似文献
965.
海水养殖真鲷肝CYP1A基因的克隆与表达 总被引:2,自引:0,他引:2
根据国外已发表野生真鲷(Pagrus major)肝CYP1A cDNA同源序列,利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从我国海水养殖真鲷(Pagrus major)的肝脏中扩增出P4501A基因全长cDNA序列(1 548 bp).用基因重组技术将P4501A cDNA克隆于pTrc-CKS载体,在大肠杆菌TOP10F′诱导表达,将细菌总蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析;其表达产物为89 ku,获得了表达融合蛋白CKS-CYP1A.该项研究将为利用免疫学技术研究有机污染物的毒性效应机制以及探讨P450酶作为毒性效应的生物标志物奠定基础. 相似文献
966.
以表达人CTLA4Ig(hCTLA4Ig)的原核质粒为基础,采用限制性DNA内切酶,DNA连接酶等基因重组技术,构建了能表达该蛋白的真核质粒,ELISA法检出了受转染的真核细胞培养上清液中的蛋白表达.在此基础上构建了含hCTLA4Ig的穿梭质粒. 相似文献
967.
吴寒 《湘潭师范学院学报(自然科学版)》2006,28(1):120-121
设计速写以其简洁、快速的表达方式,在众多的设计表现技法中占有重要的地位。在设计的每一个环节,设计速写都有相应的表现。针对美术基础薄弱的工科学生来说,选择适合他们的学习方法,使其在实践中正确地、全面地认识设计速写在工业设计中的作用及其必要性,则能更好地达到训练的目的,为今后的设计打下良好的基础。 相似文献
968.
根据已经克隆的mtLR1基因序列,采用RT-PCR的方法获得mtLR1基因。将所得的PCR产物插入原核表达载体pMAL-P-2x中,得重组质粒(pMAL-P-2x/mtLR1)并转化大肠杆菌(E.coli)DH5α.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,重组蛋白得到了正确表达,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的52%,分子质量约为73 kDa。mtLR1蛋白的高效表达,为研究其生物学功能和制备单克隆抗体奠定了基础。 相似文献
969.
在基于图论的机构拓扑结构表达基础上,通过引入拓扑图之边的权因子来表达运动副类型及运动副位置和姿态信息,建立了机构运动尺度信息;通过产品CAD模型的中性文件建立运动单元的物理特性信息;由产品CAD模型的中性文件提取其运动信息及人机交互建立驱动信息;从而建立了面向运动学动力学求解的产品模型的完整信息. 相似文献
970.
"听、说、读、写"是英语教学的主要手段,在英语教学中,最困难的是"写",因为它是表达性的、输出性的技能.书面表达是用文字传达、交流信息的手段,对如何培养学生书面表达能力提出几方面的看法. 相似文献